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Expresión, purificación, cristalización y ensayos enzimáticos de proteínas que contienen el dominio de la hidrolasa fumarilacetoacetato
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1Research Institute for Biomedical Aging Research,University of Innsbruck Austria, 2Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI),University of Innsbruck Austria, 3Division of Genetic Epidemiology,Medical University of Innsbruck Austria, 4Faculty of Chemistry, Department of Organic Chemistry,University of Vienna Austria
Capítulos
- 00:04Título
- 01:12Expression of FAHD Proteins in Competent E. coli
- 03:44Lysis of Bacterial Pellets and Filtration of Debris
- 04:33Purification of His-tagged FAHD Proteins using Ni-NTA Affinity Chromatography
- 05:59Purification of FAHD Proteins via Ion Exchange Chromatography
- 06:35Basic FAHD Activity Assays with Substrates Oxaloacetate and Acetylpyruvate
- 07:53Results: Expression and Purification of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-containing Proteins
- 09:19Conclusion
La expresión y purificación de las proteínas que contienen el dominio de la hidrolasa fumarilacetoacetato se describe con ejemplos (expresión en E.coli, FPLC). Las proteínas purificadas se utilizan para la cristalización y la producción de anticuerpos y se emplean para ensayos enzimáticos. Los ensayos fotométricos seleccionados se presentan para mostrar la multifuncionalidad de FAHD1 como oxaloacetato decarboxilasa e hidrolasa de acilpuvato.
