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Expression, Purification, Cristallisation et Essais enzymatiques des protéines contenant du domaine de l'hydrolase fumarylacetoacetate
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1Research Institute for Biomedical Aging Research,University of Innsbruck Austria, 2Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI),University of Innsbruck Austria, 3Division of Genetic Epidemiology,Medical University of Innsbruck Austria, 4Faculty of Chemistry, Department of Organic Chemistry,University of Vienna Austria
Capítulos
- 00:04Título
- 01:12Expression of FAHD Proteins in Competent E. coli
- 03:44Lysis of Bacterial Pellets and Filtration of Debris
- 04:33Purification of His-tagged FAHD Proteins using Ni-NTA Affinity Chromatography
- 05:59Purification of FAHD Proteins via Ion Exchange Chromatography
- 06:35Basic FAHD Activity Assays with Substrates Oxaloacetate and Acetylpyruvate
- 07:53Results: Expression and Purification of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-containing Proteins
- 09:19Conclusion
L'expression et la purification des protéines contenant du domaine de l'hydrolase fumarylacetoacetate sont décrites avec des exemples (expression dans E. coli, FPLC). Les protéines purifiées sont utilisées pour la cristallisation et la production d'anticorps et utilisées pour les analyses d'enzymes. Des essais photométriques sélectionnés sont présentés pour afficher la multifonctionnalité de FAHD1 comme oxaloacetate decarboxylase et hydrolase d'acylpyruvate.
