Journal
/
Bioquímica
/
Met behulp van In Vitro fluorescentie Resonance Energy Transfer te bestuderen van de dynamiek van eiwitcomplexen op de tijdschaal van een milliseconde
JoVE Journal
Bioquímica
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.  Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
JoVE Journal Bioquímica
Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Met behulp van In Vitro fluorescentie Resonance Energy Transfer te bestuderen van de dynamiek van eiwitcomplexen op de tijdschaal van een milliseconde

DOI:
10.3791/59038-v

•

10:50 min

•

March 14, 2019

•

, ,
1Department of Biochemistry,Purdue University, 2Department of Botany and Plant Pathology,Purdue University, 3Center for Plant Biology,Purdue University

Capítulos

  • 00:04Título
  • 00:33Designing the FRET Assay
  • 01:12Preparation of Cul1AMC•Rbx1, the FRET Donor Protein
  • 04:42Preparation of FlAsHCand1, the FRET Acceptor Protein
  • 05:18Testing and Confirmation of the FRET Assay
  • 06:08Measuring the Association Rate Constant
  • 07:37Measuring the Dissociation Rate Constant of Cul1•Cand1 in the Presence of Skp•F-box Protein
  • 08:33Results: Dynamics Of Protein Complexes
  • 10:30Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Eiwit-eiwitinteractie zijn kritisch voor biologische systemen, en studies over de bindende kinetiek inzicht verwerven in de dynamiek en de functie van eiwitcomplexen. Beschrijven we een methode die kwantificeert de kinetische parameters van een eiwit complex met behulp van fluorescentie resonantie-energie-overdracht en de techniek gestopt-flow.

Tags

Keywords: FRETProtein ComplexKineticsAssociationDissociationCOL1CAND17-amino-4-methylcoumarinFlASHCell LysisSonicationCentrifugationGlutathione BeadsElutionThrombinBuffer A

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/59038?article_type=v

Fluorescentie anisotropie als een instrument om eiwit-eiwit interacties te bestuderen
check_url/pt/59038?article_type=v

Gebruik Steiger Liposomen lipide-proximale eiwit-eiwit interacties reconstitueren<em> In Vitro</em
check_url/pt/59038?article_type=v

Tijdsgeresolveerde elektrosprayionisatie waterstof-deuterium Exchange Massaspectrometrie voor het bestuderen van Protein Structure en Dynamics
check_url/pt/59038?article_type=v

Kleinschalige colorimetrische testen van intracellulaire lactaat en pyruvaat in de Nematode Caenorhabditis elegans
check_url/pt/59038?article_type=v

Dissipatief Microgravimetry te bestuderen van de dynamiek van de Binding van de fosfolipide bindend proteïne Annexine A2 aan lipide Solid-ondersteund Bilayers met behulp van een Resonator Quartz
check_url/pt/59038?article_type=v

Een fluorescentie schommelingen spectroscopie Assay voor eiwit-eiwitinteractie op cel contacten
check_url/pt/59038?article_type=v

-Voor-stapmodus zuivering van macromoleculaire complexen met behulp van RNA gekoppeld aan biotine en een foto-cleavable Linker
check_url/pt/59038?article_type=v

Monitoring van eiwit-RNA interactiedynamica in vivo bij hoge temporele resolutie met behulp van χCRAC
check_url/pt/59038?article_type=v

Gebruik van time-resolved eiwit-geïnduceerde fluorescentieverbetering om stabiele lokale conformaties één α-synucleïnemonomeer tegelijk te identificeren
check_url/pt/59038?article_type=v

Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study van ribosoom eiwitsynthese

Read Article