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Um protocolo Universal para grande escala gRNA biblioteca de produção a partir de qualquer fonte de DNA
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JoVE Journal Genética
A Universal Protocol for Large-scale gRNA Library Production from any DNA Source

Um protocolo Universal para grande escala gRNA biblioteca de produção a partir de qualquer fonte de DNA

DOI:
10.3791/56264-v

•

10:32 min

•

December 06, 2017

•

,
1MCN Junior Research Group, Munich Center for Neurosciences,Ludwig-Maximilian-Universität, BioMedical Center, 2Epigenetic Engineering, Institute of Stem Cell Research,Helmholtz Zentrum, German Research Center for Environmental Health

Capítulos

  • 00:05Título
  • 00:48Digestion of DNA with MNase and Separation of DNA Fragments by PAGE
  • 03:05Isolation of DNA Fragments from PAGE Gels and Linker Generation
  • 04:26End Repair of Gel-purified Fragments and Linker Ligation
  • 05:32Size Selection and Assembly of Vector-insert Construct
  • 06:18Electroporation of TG1 Electrocompetent E. coli Cells
  • 08:38Results: a gRNA Library can be Generated from and Target DNA
  • 09:56Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Métodos para a geração de bibliotecas gRNA em larga escala devem ser simples, eficiente e econômica. Descreveremos um protocolo para a produção de bibliotecas de gRNA baseado na digestão enzimática de ADN alvo. Este método, CORALINA (geração de biblioteca gRNA abrangente através da actividade nuclease controlada) apresenta uma alternativa para síntese do oligonucleotide personalizado dispendiosos.

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Keywords: CRISPRGRNA LibraryGuide RNA LibraryDNA DigestionMicrococcal NucleasePAGEDNA Fragment ExtractionCORALINA MethodDNA Source Agnostic

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