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Capítulos
- 00:05Título
- 00:48Digestion of DNA with MNase and Separation of DNA Fragments by PAGE
- 03:05Isolation of DNA Fragments from PAGE Gels and Linker Generation
- 04:26End Repair of Gel-purified Fragments and Linker Ligation
- 05:32Size Selection and Assembly of Vector-insert Construct
- 06:18Electroporation of TG1 Electrocompetent E. coli Cells
- 08:38Results: a gRNA Library can be Generated from and Target DNA
- 09:56Conclusion
Méthodes pour générer des bibliothèques gRNA à grande échelle devraient être simple, efficace et rentable. Les auteurs décrivent un protocole pour la production de bibliothèques gRNA issu de la digestion enzymatique de l’ADN cible. Cette méthode, CORALINA (génération de bibliothèque gRNA globale par activité nucléasique contrôlé) présente une alternative à la synthèse d’oligonucléotides personnalisée coûteux.
