Ce protocole décrit les étapes pour le clonage de plusieurs ARN à guide unique dans un vecteur de vecteur de guide RNA, qui est particulièrement utilisé dans la création de knockouts multi-gènes utilisant la technologie CRISPR / Cas9. La génération de double knockouts dans les organoïdes intestinaux est une application possible de cette méthode.
Merenda, A., Andersson-Rolf, A., Mustata, R. C., Li, T., Kim, H., Koo, B. A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer. J. Vis. Exp. (125), e55916, doi:10.3791/55916 (2017).