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Termoestabilización, Expresión, purificación y cristalización del transportador de serotonina humano enlazado a S citalopram

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Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

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Termoestabilización, Expresión, purificación y cristalización del transportador de serotonina humano enlazado a S citalopram

DOI:

10.3791/54792-v

•

12:21 min

•

November 27, 2016

•

Jonathan A. Coleman, Evan M. Green, Eric Gouaux³

¹Vollum Institute,Oregon Health & Science University, ²Graduate Group in Biophysics,University of California, San Francisco, ³Howard Hughes Medical Institute,Oregon Health & Science University

Capítulos

00:05Título
00:47Transfection of Adherent HEK293S GnTI-cells for Thermostability Screen
02:24Scintillation Proximity-based Thermostability Screen with Citalopram
04:18Expression of the Human Serotonin Transporter in HEK293S GnTI-cells
05:24Affinity-purification of the Serotonin Transporter for Immunization and Crystallization
07:12Formation of Transporter-antibody Complexes and Separation by Size-exclusion Chromatography
08:21Crystallization of Transporter-antibody Complexes by Hanging Drop
10:01Results: Thermostabilization and Crystallization of the Serotonin Transporter in an Antidepressant-bound State
11:25Conclusion

Summary

Tadução automática

Este manuscrito describe cómo la pantalla para termoestabilizante mutaciones, purificar el transportador de serotonina humano, generar anticuerpos de alta afinidad, y cristalizar el complejo transportador de serotonina-anticuerpo unido a la antidepresivo fármaco S citalopram. Este protocolo puede ser adaptado para el estudio de otros transportadores desafiantes de membrana, receptores y canales.

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