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にバインドされた熱安定、発現、精製、およびヒトセロトニントランスポーターの結晶化<em> S</em> - シタロプラム
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JoVE Journal Bioquímica
Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram
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にバインドされた熱安定、発現、精製、およびヒトセロトニントランスポーターの結晶化<em> S</em> - シタロプラム

DOI:
10.3791/54792-v

•

12:21 min

•

November 27, 2016

•

, ,
1Vollum Institute,Oregon Health & Science University, 2Graduate Group in Biophysics,University of California, San Francisco, 3Howard Hughes Medical Institute,Oregon Health & Science University

Capítulos

  • 00:05Título
  • 00:47Transfection of Adherent HEK293S GnTI-cells for Thermostability Screen
  • 02:24Scintillation Proximity-based Thermostability Screen with Citalopram
  • 04:18Expression of the Human Serotonin Transporter in HEK293S GnTI-cells
  • 05:24Affinity-purification of the Serotonin Transporter for Immunization and Crystallization
  • 07:12Formation of Transporter-antibody Complexes and Separation by Size-exclusion Chromatography
  • 08:21Crystallization of Transporter-antibody Complexes by Hanging Drop
  • 10:01Results: Thermostabilization and Crystallization of the Serotonin Transporter in an Antidepressant-bound State
  • 11:25Conclusion

Summary

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本稿では、変異を熱安定をスクリーニングヒトセロトニントランスポーターの精製、高親和性抗体を生成し、抗うつ薬のSの -シタロプラムにバインドされたセロトニントランスポーター-抗体複合体を結晶化する方法について説明します。このプロトコルは、他の挑戦的な膜輸送体、受容体、およびチャネルの研究に適合させることができます。

Tags

Keywords: Serotonin TransporterS-citalopramThermostabilizationExpressionPurificationCrystallizationMembrane ProteinsDrug TargetsNeurotransmitter TransportersReceptorsChannelsSoluble ProteinsHEK293S GnTIDNA TransfectionCitalopramC12MCHSProtease InhibitorsTritiated CitalopramBSAHis-tag AffinitySPA BeadsSertraline

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