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Substrate Generation for Endonucleases of CRISPR/Cas Systems
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Sustrato Generación para endonucleasas de CRISPR / Cas Sistemas

DOI:
10.3791/4277-v

•

11:53 min

•

September 08, 2012

•

, , , ,
1Prokaryotic Small RNA Biology,Max-Planck-Institute for Terrestrial Microbiology

Capítulos

  • 00:05Título
  • 01:37CRISPR/Cas System Overview
  • 02:29Generation of Long Pre-crRNA Substrates via PCR
  • 04:14Generation of Intermediate Pre-cdRNA Substrates via Annealing of DNA Oligonucleotides
  • 06:10Generation of Short Cas RNA Substrates via Custom RNA Oligonucleotide Synthesis
  • 06:41In vitro T7 RNA Polymerase Transcription
  • 08:04Cas6 Endonuclease Assay
  • 09:08Results: Representative Cas6 Endonuclease Assay
  • 11:10Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

CRISPR / Cas sistemas median la inmunidad adaptativa en bacterias y arqueas. Muchas proteínas CAS se propone actuar como endoribonucleases que actúan sobre los precursores crRNA de longitud variable. Aquí se ilustran tres enfoques diferentes para generar pre-crRNA sustratos para el análisis bioquímico de la actividad endonucleasa de Cas.

Tags

Substrate GenerationEndonucleasesCRISPR/Cas SystemsVirusesProkaryotic HostsBacterial EvolutionArchaeal LifeRestriction ModificationAbortive InfectionAdaptive Immune SystemsCRISPR SequencesCas GenesCas ProteinsSpacer ElementCRISPR ClusterPrecursor-crRNACas6 FamilyCrRNAsViral DNA UptakeCascade ComplexBase ComplementarityNuclease Cas3Invader DNA Destruction

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