הכשרת ארנבי מעבדה לשכלול הליכי גידול שגרתיים
Summary
פרוטוקולי אילוף הכוללים חיזוקים חיוביים להליכי גידול שגרתיים בארנבים פותחו והוכחו כמוצלחים, שכן הארנבים הראו באופן אמין את ההתנהגויות המאומנות בבדיקה הכללית השבועית. איסוף הארנבים עם ארגז ההובלה היה פחות מרתיע מטכניקת הטיפול הקונבנציונלית.
Abstract
טכניקות טיפול ואילוף לא מרתיעות עבור חיות מעבדה נדרשות כדי להקל על הליכי גידול ניסיוניים ושגרתיים, ולשפר הן את רווחת בעלי החיים והן את האיכות המדעית. אימוני קליקר נוצלו לפיתוח פרוטוקולי אילוף לארנבים כדי לחדד נהלי גידול שגרתיים מלחיצים הקשורים בדרך כלל להרמה (כלומר, הרמה מהרצפה) / ריסון (כלומר, החזקתם בזרועות אדם) אותם. שלוש עשרה נקבות ארנבים לבנים מניו זילנד אומנו במשך שלושה שבועות. כל הארנבים למדו את התנהגויות המטרה שהוגדרו מראש: הם עקבו אחר מקל המטרה, קפצו על סולם השקילה, נכנסו לארגז הובלה והתרוממו לאחור תוך שהם מניחים את כפותיהם הקדמיות על ידו של המאמן. בנוסף, עשר חיות קפצו מהרצפה אל ברכי המאמן בישיבה ואפשרו למאמן להרים את כפותיו מהמשטח בעודו יושב על ברכי המאמן. עבור אנשים מסוימים, היה צורך להתאים את הפרוטוקולים על ידי צעדי ביניים נוספים. בסוף האימון, הארנבים הראו באופן אמין את התנהגויות המטרה הצפויות, גם לאחר הפסקות אימון קצרות וארוכות. למעט כמה יוצאים מן הכלל, אדם מוכר שאינו המאמן יכול היה לעורר את התנהגויות המטרה מהארנבים (הכללה), אם כי נדרשו מפגשים נוספים לצורך הכללה. במבחן הגישה הוולונטרית, הארנבים העדיפו אינטראקציה עם המאמן בניסויהראשון אך בילו זמן רב עם אדם לא מוכר כמו עם המאמןבניסוי השני . התצפיות ההתנהגותיות הצביעו על כך שלהרים את הארנבים עם תיבת ההובלה, כמתואר בפרוטוקול, במקום לרסן אותם עם קשקוש צווארם ולהרים אותם על הזרוע, היה פחות מרתיע. בסך הכל, פרוטוקולי האימון היו אפשריים ויכולים לשמש כאסטרטגיית חידוד במתקני חיות מעבדה. למען רווחת בעלי החיים, יש ליישם את פרוטוקולי האילוף במידת האפשר.
Introduction
בין השנים 2015 ל-2019, יותר מ-49 מיליון בעלי חיים שימשו למטרות מדעיות באיחוד האירופי (ובנורבגיה); 1,745,037 (3.5%) מהם היו ארנבים1. ארנבים משמשים בעיקר למחקר רגולטורי (למשל, בקרת איכות, רעילות ובדיקות בטיחות אחרות, כולל פרמקולוגיה) ולייצור שגרתי של חומרים ביולוגיים (למשל, מוצרים מבוססי דם)2. למרות שנעשים מאמצים להחליף ניסויים בבעלי חיים בשיטות ללא בעלי חיים, השימוש בבעלי חיים עדיין נחוץ לחלק ממטרות אלה. בכל פעם שלא ניתן להחליף ניסוי בבעלי חיים, חיוני לצמצם את מספר בעלי החיים ולחדד את תנאי הניסוי, הדיור והגידול כדי למזער את הסבל. ראסל וברץ’ תיארו אסטרטגיה זו כעקרון 3R (להחליף, להפחית, לחדד) בשנת 19593 , ובשנת 2010, היא יושמה בדירקטיבה 2010/63/EU להגנה על חיות מעבדה המשמשות למטרות מדעיות4. תפקיד העידון, המכונה לעתים “סינדרלה” של ה-3Rs5, זכה לחשיבות הולכת וגוברת. בעוד החלפה והפחתה הן אסטרטגיות ארוכות טווח לקראת המטרה הסופית של הדירקטיבה להחליף באופן מלא ניסויים בבעלי חיים, עידון מאפשר שיפור מיידי של רווחת בעלי חיים5, אשר בתורו יש פוטנציאל לשפר את האיכות המדעית6. חלקים חיוניים של זיקוק הם טיפול בבעלי חיים ואילוף, כפי שצוין בנספח III של דירקטיבה 2010/63/EU. הדירקטיבה קובעת כי מתקני בעלי חיים צריכים לתכנן תוכניות הרגלה והכשרה לחיות המעבדה המותאמות למינים, לנוהל ולפרויקט4. מנספח א’ לת”צ מס’ 123 עולה כי אנשי צוות חיות המעבדה מקדישים זמן “לשיחה, טיפול, אילוף וטיפוח בעלי חיים”7.
חלק מהליכי הטיפול גורמים ללחץ, במיוחד עבור חיות טרף יבשתיות כגון ארנבות. דוגמאות לכך הן נדחקים לפינה, מרוסנים (כלומר, נתפסים על ידי אדם, מוחזקים בזרועותיו של אדם, או משותקים על ידי מכשיר), ומרימים (כלומר, מרימים מהרצפה) לצורך בדיקת בריאות או הליכים ניסיוניים8. סקר שהתמקד בארנבי מחמד גילה כי 57-61% מהם נאבקו כאשר הרימואותם 9,10 וחלקם אף הראו תוקפנות הקשורה לפחד (כלומר, נשיכה)11. זה מדגיש את הצורך בטכניקות טיפול ואימון עדינות. כבר הוכח עבור יונקים קטנים אחרים כגון עכברים כי טכניקות טיפול עדינות מפחיתות חרדה12. יתר על כן, טיפול עדין בשילוב עם אימון מפחית מתח, חרדה והתנהגות דמוית דיכאון בעכברים13. בקופי מקוק רזוס ושימפנזים, מדדים פיזיולוגיים הקשורים ללחץ הושפעו פחות כאשר הם אומנו בעבר בהליך14,15. ניתן להניח שאם בעל חיים יכול לבחור להשתתף באילוף מרצונו, הוא יכול לעסוק באופן פעיל ולשלוט במצב, מה שמשפר את רווחתו של בעל החיים ועשוי גם לתרום לנתונים מדעיים חזקים ואמינים יותר16.
הליכי אילוף רבים של בעלי חיים מסתמכים על עקרונות התניה אופרנטית, במיוחד השימוש בחיזוק חיובי ועיצוב 17,18,19. התניה אופרנטית דורשת מבעל החיים לעורר התנהגויות שלאחר מכן ניתן להגדיל או להקטין20. ישנם ארבעה מצבים נפוצים המשמשים לתיאור התניה אופרנטית: חיזוק חיובי ושלילי וכן עונש חיובי ושלילי21,22. בארנבות, עונש חיובי משמש כאשר אדם מתקרב (גירוי לא רצוי) לחיה כדי להרחיק אותה ממקום מסוים או לקראתו23 . בהקשר של טיפול בארנב על שולחן הבדיקה, דוגמה לחיזוק שלילי היא הסרת לחץ (גירוי לא רצוי) על גוף הארנב כאשר הארנב שומר על שקט; דוגמה לעונש שלילי היא משיכת פרס מזון (גירוי רצוי) כאשר הארנב מתחיל להיאבק. לא עונש חיובי/שלילי ולא חיזוקים שליליים מומלצים באילוף בעלי חיים. ענישה גורמת להשפעות רגשיות שליליות24 , כגון מצוקה כפי שמוצג אצל כלבים25 . במקום זאת, חיזוק חיובי צריך להיות שיטת הבחירה בעת אילוף בעלי חיים25,26. אימון חיזוק חיובי (PRT) פירושו שגירוי רצוי (למשל, פרס מזון) ניתן לאחר שבעל החיים הראה התנהגות רצויה, מה שמגדיל את הסבירות שבעל החיים יציג שוב את ההתנהגות הרצויה בעתיד27 . PRT כרוך לעתים קרובות ביישום של חיזוק מותנה. מחזק מותנה (מחזק משני) הוא בדרך כלל גירוי ניטרלי כגון צליל, שהחיה לומדת לקשר עם מחזק בלתי מותנה (מחזק ראשוני, למשל, תגמול מזון)28. לאחר שהחיה מציגה את ההתנהגות הרצויה, מוצג מיד החיזוק המותנה, ואחריו הצגת פרס המזון26. דוגמה ידועה ל-PRT היא אימון קליקרים, שבו קליקר משמש להפקת קליק כמחזק משני26.
האימון צריך לעקוב אחר דפוסים צפויים, אשר מושגת על ידי עיצוב פרוטוקול אימון. פרוטוקול האימון מתאר כיצד ניתן להגיע להתנהגות מטרה צעד אחר צעד (כלומר, עיצוב התנהגותי) כאשר כל צעד מוגדר על ידי קריטריונים אובייקטיביים ויש לבצע אותו בקלות26 . אם האילוף מתבצע על פי פרוטוקול מסוים, ייתכן שצוות חיות המעבדה מתחלף באילוף בעלי החיים. חשוב לציין כי אנשי הצוות צריכים לדעת את העקרונות של טכניקות למידה והכשרה על מנת ליישם אותם כראוי26. אילוף בעלי חיים משלב לעתים קרובות עיצוב התנהגותי. עיצוב התנהגותי ידני שימש לראשונה במכוון על ידי סקינר ועמיתיו בתחילת שנות הארבעים29. לעומת זאת, בעבודות קודמות, סקינר התמקד דווקא ב”ביצוע שינויים קטנים בסביבה הפיזית כדי ליישם תוכנית של קירוב עוקב”29. במאמר שפורסם בסיינטיפיק אמריקן, הוא הסביר כי חיזוק התנהגות מגדיל את הסבירות שההתנהגות תחזור על עצמה, מה ש”מאפשר לעצב התנהגות של חיה כמעט כפי שפסל מעצב גוש חימר”30. מאז, העיצוב חווה חשיבות גוברת עבור בעלי חיים בשבי 29,30,31,32. לצורך שכפול ושיפור פרוטוקולי עיצוב, חיוני להעריך את הפרוטוקולים באופן שיטתי ואובייקטיבי 33,34,35,36.
סקירה שיטתית ומטא-אנליזה שפורסמה לאחרונה על ידי Pfaller-Sadovsky et al. מצאה כי חיזוק מותנה נחקר בתדירות הגבוהה ביותר בסוסים וכלבים, אם כי חתולים, בקר, דגים, עזים ופרימטים לא אנושיים נחקרו גם37. במדעי חיות המעבדה, PRT נמצא בשימוש נרחב עבור פרימטים לא אנושיים 38,39,40 וכלבים41,42. בנוסף, חזירים43, עזים44, ואפילו יונקים קטנים, כגון עכברים13 וחולדות 45,46,47, אומנו בהצלחה באמצעות קליקר בסביבת המעבדה. למיטב ידיעת המחברים, הכנסת PRT לארנבי מעבדה דווחה רק לעתים רחוקות48; ספרות קיימת שעברה ביקורת עמיתים ופורסמה לפני כמה עשורים היא מיושנת ואינה עומדת בקריטריונים של המחקר האתי המודרני. למרות שמעט פיסות מידע שלא עברו ביקורת עמיתים מצביעות על כך שניתן לאלף ארנבים בהצלחה באמצעות PRT49, נראה שיש חוסר ידע על פרוטוקולי אילוף מתאימים לארנבים השוכנים במתקני חיות מעבדה. הסיבות הבסיסיות עשויות להיות שונות. לדוגמה, טכניקות אימון בשימוש לא יכול להיות מתואר בפירוט במאמרי מחקר או נתונים מופקים עבור מחקר רגולטורי ולכן לא מתפרסמים. יתר על כן, ארנבים עשויים שלא להיות המוקד העיקרי של מחקר עידון מאז מינים אחרים כגון עכברים וחולדות משמשים לעתים קרובות יותר במחקר. מכיוון שארנבים יכולים להסוות מתח ואי נוחות בצורה טובה מאוד, מצבם הרגשי השלילי בעת הטיפול עשוי לעתים קרובות להישאר בלתי מזוהה. גודלו של ארנב מאפשר לבני אדם לרסן בעלי חיים אלה לצורך פרוצדורות, בעוד שמינים אחרים, כגון פרימטים שאינם אנושיים, אינם יכולים להיות מוחזקים עם הידיים להתערבויות דומות מבלי להיפצע קשה50. עם זאת, עובדות אלה לא צריכות למנוע פיתוח או שיתוף של פרוטוקולי PRT עבור ארנבי מעבדה.
באשר ליתרונות הפוטנציאליים של PRT, נעשו ניסיונות ראשונים למלא את פער הידע על פרוטוקולי הכשרה מתאימים לארנבי מעבדה. כדי להקל על הליכים שגרתיים כגון טיפול, בדיקות בריאות ושקילה, פותחו פרוטוקולי אילוף והוערכה היתכנותם עבור נקבות ארנבות לבנות בניו זילנד. בוצעו השוואות כדי להעריך האם טכניקת הטיפול החלופית המתוארת בפרוטוקולי האימון הייתה פחות מרתיעה מטכניקת הטיפול הקונבנציונלית והאם פרוטוקולי האימון יכולים לשמש כאמצעי חידוד. איור 1 מדגים את לוח הזמנים של המחקר הנוכחי.
תחזוקת בעלי חיים
שלוש עשרה נקבות ארנבים לבנים מניו זילנד נלקחו ממקורות מסחריים (הגיעו למתקן לבעלי חיים בגיל שבעה שבועות בערך). בעלי החיים היו נקיים מכל הפתוגנים הנגיפיים, החיידקיים והטפיליים המפורטים בהמלצות FELASA51. ביגוד וציוד מגן (כפפות, מסכות, רשתות לשיער) נלבשו בעת ביצוע הצעדים של הפרוטוקול הנוכחי. קבוצה של שישה וקבוצה של שבעה בעלי חיים שוכנו יחד במכלאה רצפתית של 2.8 מ’ × 2.8 מ’ (שיכון רצפה), בהתאמה. הרצפה כוסתה במצעי עץ עדינים ומתקלפים (autoclaved). יתר על כן, חומר קינון וצמר נייר פוזרו על גבי המצעים. שלושה בתי פלסטיק בעלי שני פתחים כל אחד (37 ס”מ × 60 ס”מ; גובה 30 ס”מ) ומנהרת פלסטיק (אורך: 58 ס”מ, קוטר: 16 ס”מ) שימשו כמקלטים. בנוסף, סופקו פריטי העשרה כגון קוביות מכרסמים מעץ, כדורי חציר וערבה וכדורי חטיפים מלאים בכדורי מזון, הנושרים בעת הנעת הכדור. לארנבים הייתה גישה חופשית למי ברז, מזון כדורי, חציר אוטוקלאבי וקש. מידע נוסף על פריטי מזון והעשרה מופיע בטבלת החומרים. חדר החיות נוקה בימי חמישי.
הארנבים הוחזקו בתנאים סטנדרטיים (טמפרטורת החדר והלחות היחסית שניתנו כממוצע ± סטיית תקן: 20.3 ± 0.4 מעלות צלזיוס ו-50 ± 5%) במחזור אור:כהה של 12:12 שעות (אור מלאכותי עם שכיחות נוספת של אור יום). רדיו הופעל 30 דקות לפני תחילת שלב האור במשך כ -8 שעות כדי להרגיל את הארנבים לרעשי הסביבה.
Protocol
Representative Results
Discussion
פרוטוקולי ההכשרה פותחו כדי לחדד נהלים שגרתיים כגון טיפול, בדיקות בריאות ושקילה בארנבי מעבדה. היתכנותם הוערכה במחקר גישוש זה באמצעות שלוש עשרה נקבות ארנבים לבנים מניו זילנד. פרוטוקולי האילוף יכולים להיות מיושמים באופן אמין כדי לאלף בהצלחה את הארנבים. רוב הארנבים הצליחו ללמוד את התנהגויות המטרה שהוגדרו בפרוטוקולי האימון תוך פחות מתקופת האימון בת 3 השבועות, זכרו אותן לאחר הפסקות אימון של שבוע, והכלילו אותן לאדם אחר מאשר המאמן. היה צורך לבצע התאמות מעטות לפרוטוקול כדי לענות על הצורך של בעלי חיים בודדים. הממצא העיקרי של המחקר הנוכחי היה שטכניקת הטיפול המעודנת להרמת ארנבים, כפי שתוארה בפרוטוקולי האימונים, הייתה פחות מרתיעה מטכניקת הטיפול הקונבנציונלית. באופן מעניין, הארנבים המאומנים הראו את התנהגותם החקרנית לא רק כלפי המאמן המוכר אלא גם כלפי אדם לא מוכר במבחן גישה מרצון.
משמעות המטרה
היעד שימש בסיס לפרוטוקול האימונים הנוכחי. בעת הצגת המטרה, בעלי החיים למדו כי התנהגותם השפיעה על הסביבה ויצרה תוצאות. הצגת המטרה בונה אמון בין האדם לחיה, כפי שהודגם על ידי ארנב #4, נדרשו 7 אימונים לפני שעקב אחר מקל המטרה לזירת האימונים אך למד את התנהגויות המטרה הבאות במהירות (כלומר, תוך 1-3 מפגשי אימון). נראה כי ארנב #4 זה רכש אמון במאמן במהלך הצגת המטרה, מה שהקל על אימון התנהגויות המטרה האחרות. עם זאת, ארנב זה עדיין חסר אמון באנשים אחרים ולא היה מוכן להראות את רוב התנהגויות המטרה בפגישות הכללה.
יש לציין כי היעד לא הוגדר כנקודת קצה בחלק מסעיפי הפרוטוקול. במקום זאת, למשל, החיות היו צריכות לעקוב אחר המטרה למספר משתנה של כשות או להישאר על הסקאלה במשך מספר משתנה של שניות. דפוס תגמול משתנה נבחר כדי להגדיל ולשמר את תשומת הלב והמוטיבציה של הארנבים באימונים.
אותות
לאחר שהארנבים ביצעו בהצלחה את שלב 5.1, בכל האימונים הבאים, המאמן מיקם את המטרה במרחק קרוב לאפו של הארנב כדי לאותת לארנב שניסוי האימונים החל. אם הארנב נגע במטרה באף/פה, נשקלה נכונות להשתתף באימון והאימונים החלו.
הפרוטוקולים הנוכחיים לא כללו אותות נוספים, למשל, קנה המידה, תיבת ההובלה או היד לא נחשבו לאותות. במקום זאת, המטרה שימשה כדי להוביל את החיה לתוך זירת האימונים, על המאזניים, לתוך תיבת ההובלה, באוויר (גידול) או על ברכי המאמן. משמעות הדבר היא כי התנהגויות המטרה “שקילה”, “כניסה לתיבת הובלה”, “גידול” ו “קפיצה על הברכיים” היו שינויים של “בעקבות המטרה”. הסיבה לכך הייתה הדרישות לפרוטוקול ההכשרה: זה צריך להיות ריאלי להתבצע על ידי צוות של מתקני בעלי חיים, כי לא יכול להיות מומחים באילוף בעלי חיים, ולשלב בקלות לתוך שגרת העבודה היומיומית. לכן, הפרוטוקולים חייבים להיות יעילים ולהשיג את התנהגויות המטרה במהירות.
עם זאת, היד שמונחת לפני הארנב (שלב 8.3), הסולם או תיבת ההובלה יש גם פוטנציאל להיות גם אות וגם מטרה עבור הכפות. לכן, ייתכן שניתן יהיה להגדיר צעדים נוספים החורגים מהפרוטוקולים הנוכחיים ואינם מחייבים שימוש במקל המטרה. לדוגמה, ברגע שהארנב רואה את קנה המידה, הסולם מסמן לארנבים לקפוץ עליו עם כל ארבע הכפות.
התאמות של הפרוטוקולים
אף על פי שניתן לצפות שהפנוטיפ של חיות מעבדה כמעט זהות גנטית דומה מאוד, ישנם “הבדלים התנהגותיים בין פרטים עקביים לאורך זמן ובין מצבים [ו]מכונים אישיות”55, למשל, חלק מבעלי החיים ביישנים למדי ואחרים נועזים56 . ייתכן שייקח לבעלי חיים ביישנים ופחות חקרניים זמן רב יותר ללמוד את התנהגויות המטרה המוגדרות של הפרוטוקול (למשל, ארנב #4). גם אם פרוטוקולי אילוף סטנדרטיים עשויים להתאים לרוב, אילוף צריך להתחשב בצרכים של בעל חיים בודד ולהסתגל אליו, בעת הצורך26 . לפיכך, יש להגדיר צעדי ביניים קטנים יותר עבור אותם ארנבים שאינם לומדים שלב הכשרה של הפרוטוקול. שלבי אימון הביניים הנוספים אמורים לסייע להם להתקדם בהצלחה לשלב הבא. במיוחד מכיוון שתוכניות אימון מפותחות בתיאוריה ולאחר מכן נבדקות בפועל, ייתכן שיתברר כי נדרשים צעדי אימון נוספים כדי לאמן התנהגות מטרה מסוימת.
ביחס לפרוטוקולי האימון הנוכחיים, היה צורך להוסיף כמה שלבי אימון ביניים עבור התנהגויות המטרה “בעקבות המטרה”, “כניסה לתיבת הובלה”, “גידול” ו”קפיצה על הברכיים”, כפי שמתואר בפירוט בפרק על התוצאות המייצגות מכיוון שבעלי חיים בודדים לא המשיכו בשלב האימון הבא. מעניין לציין כי שלבי הביניים 8.2+ ו-9.3+ נדרשו על ידי רוב הארנבים, תוך הדגשת חשיבותם. לכן, שלבים אלה נוספו כהערה לפרוטוקולי ההדרכה.
לחלופין, לשלב 8.2+ המוגדר, המאמן יכול להניח יד על הרצפה כשכף היד פונה כלפי מעלה ולתת לארנב לדרוך על היד עם כף קדמית אחת ובסופו של דבר שתי כפות קדמיות. יתר על כן, ניתן להעלות על הדעת כי ארנב דורש צעדי ביניים נוספים לפני שלב 9.3+, למשל, תחילה הארנב מניח כפה אחורית אחת ולאחר מכן שתי כפות אחוריות על ברכי המאמן. אם ארנב אינו מסכים שיגעו בו בשלבים 9.5-9.9, ניתן להגדיל בהדרגה את משך הנגיעה בחלקי הגוף השונים. יתר על כן, בתחילה רק את האצבע המורה ואת האצבע האמצעית ניתן להשתמש כדי ללטף את החיות עם לחץ נוצה אור. לאחר מכן ניתן להגדיל את מספר האצבעות המשמשות למגע ואת הלחץ במספר צעדים.
חידוד טכניקות הטיפול
ניתן להניח כי הטיפול מרתיע מאוד, במיוחד אצל ארנבים עם תכונת אישיות ביישנית. ארנבים הם חיות טרף יבשתיות והרמה (כלומר, הרמה מהרצפה) או ריסון (כלומר, החזקתם בזרועות אדם) לצורך בדיקת בריאות והליך ניסיוני עלולה לגרום לחרדה ומצוקה. אפשרות אחת לשכלל את שיטות הטיפול הוכנסה בפרוטוקולי האילוף: במקום לרסן את הארנב על ידי קשקוש הצוואר ולהרים את הארנב על היד השנייה, ניתן להוביל את הארנב עם מקל המטרה לתוך התיבה ולשאת אותו בקופסה אל שולחן הבדיקה, כפי שהוצע קודם לכן50, 57, שם הארנב מועבר בעדינות מהקופסה לשולחן. לחלופין, ניתן להסיר את החלק העליון של הקופסה, או להנחות את הארנב עם מקל המטרה מחוץ לקופסה.
התצפיות ההתנהגותיות שבוצעו לאחר איסוף הארנבים באמצעות טכניקת הטיפול הקונבנציונלית או תיבת ההובלה גילו כי טכניקת הטיפול הקונבנציונלית הייתה קשורה ליותר התנהגות הקשורה ללחץ וחרדה מאשר הטכניקה החלופית. מסקנה זו נבעה מהמספר הגבוה של בעלי חיים המסרבים לקבל תגמול מזון על שולחן הבדיקה, וממשך הזמן הארוך יותר שהוקדש להסתתרות במקלטים כאשר יושמה טכניקת הטיפול הקונבנציונלית. באופן מעניין, טכניקת הטיפול לא השפיעה על זמן האינטראקציה עם המאמן, מה שמצביע על כך שייתכן שתהליך הטיפול לא פגע ביחסי אדם-חיה. עם זאת, מלבד המאמן, תיבת ההובלה שימשה גם כ”מכשיר טיפול” (כלומר, מכשיר הטיפול של הטכניקה הקונבנציונלית היה המאמן, מכשירי הטיפול של הטכניקה החלופית היו גם המאמן וגם תיבת ההובלה). לכן, זמן האינטראקציה עם תיבת התחבורה נותח גם. למרות שהארנבים נאספו זה עתה עם ארגז ההובלה, הם בילו זמן רב יותר באינטראקציה עם התיבה או בתיבה מאשר כאשר נאספו על ידי הטכניקה הקונבנציונלית. זה הציע כי תיבת התחבורה יכולה להיות קשורה עם השפעה חיובית. כאשר משווים את משך הזמן שהוקדש לאינטראקציה עם שני “מכשירי הטיפול” (כלומר, סכום משך הזמן שהוקדש לאינטראקציה עם הקופסה ועם המאמן), טכניקת הטיפול בקופסה הגדילה את משך הזמן באינטראקציה עם “מכשירי הטיפול”, כלומר, לטכניקה זו הייתה השפעה חיובית ברורה על התגובה ההתנהגותית של הארנבים כלפי “מכשירי הטיפול” בציפייה לטיפול. ממצאים דומים נעשו בעכברי מעבדה, והראו כי טכניקות טיפול עדינות ואימון הפחיתו מתח וחרדה: בעלי חיים שנאספו באמצעות מנהרה או ידיים מקופלות בילו זמן רב יותר באינטראקציה רצונית עם “מכשיר הטיפול” והראו פחות התנהגות הקשורה לחרדה מאשר עכברים עם טיפול בזנב12. נראה כי האימונים חיזקו את האפקט הזה. לידינגר ועמיתיו הראו כי עכברים בעלי טיפול עדין (מנהרה /) הראו פחות השתנה, עשיית צרכים וקול כאשר היו מרוסנים על ידי קשקוש צווארם ופחות התנהגות צפה במבחן מבוך המים מוריס כאשר הם אומנו באמצעות PRT בהשוואה לעכברים לא מאומנים13.
היתכנות הפרוטוקולים לעבודה יומיומית – משך ההדרכה, שימור והכללה
מספר האימונים שנדרשו כדי ללמוד התנהגות מטרה היה תלוי בחיה הבודדת ובהתנהגויות המטרה, שכללו מספר שונה של שלבים החל מסעיף 3 ועד סעיף 9 לפרוטוקול שהוצג לעיל.
על פי מספר בעלי החיים שהצליחו ללמוד התנהגות מטרה ומספר ההתאמות שהיו צריכות להיעשות לפרוטוקולים עבור בעלי החיים הבודדים, שלבי האילוף היו בדרגות קושי שונות. ההתנהגות “בעקבות המטרה” הייתה חווית האילוף הראשונה של הארנבים, ולכן לקח לבעלי חיים מסוימים זמן רב יותר להתאמן על התנהגות זו מאשר התנהגות המטרה האחרת, כפי שפורט לעיל. בעוד שניתן היה לאמן את כל בעלי החיים על “שקילה” על פי הפרוטוקול הנוכחי, נדרשו צעדי ביניים נוספים ל”כניסה לתיבת הובלה” על ידי שני בעלי חיים ול”גידול” וכן “קפיצה על הברכיים” על ידי כמעט כל הארנבים. ניתן להסביר זאת במידת המגע הפיזי בין בעל החיים למאלף שהיה הכרחי לביצוע התנהגויות המטרה השונות. “שקילה” ו”כניסה לקופסת הובלה” לא היו כרוכים במגע פיזי בין בעל חיים לאדם. השלב האחרון של “גידול” (8.3) והשלבים 9.2-9.4 של “קפיצה על הברכיים” דרשו מהארנבים ליצור מגע פיזי עם המאמן. בנוסף, המאלף נגע בכתף, בגב, בעכוז, באוזניים או בכפות של הארנב בשלבים 9.5-9.9 של “קפיצה על הברכיים”, מה שהגדיל את מידת המגע הפיזי בין בעל החיים למאמן. קבלת המגע הייתה מאתגרת יותר עבור ארנבים מסוימים מאשר עבור אחרים. כפי שפורט לעיל, היה מועיל להתאים את פרוטוקולי האימון של התנהגויות מטרה אלה ולהוסיף צעדי ביניים.
עם זאת, שלושה ארנבים דרשו אימונים נוספים כדי להשלים את התנהגות המטרה “קפיצה על הברכיים” (#4, #7, #10). ניתן לשלול ליקויים פיזיים שמנעו מבעלי חיים אלה לקפוץ על ברכי המאמן. יתר על כן, הארנבים הצליחו לקפוץ על בתיהם, הגבהים של אלה היו גבוהים יותר מחיקו של המאמן.
ניתן היה להבחין כי שניים משלושת הארנבים הללו (#4 ו- #10) נזקקו לזמן רב יותר כדי להתרגל למאמן כמו גם לתגמול המזון במפגשי ההרגלה ונזקקו באופן חלקי לאימונים נוספים כדי להגיע לשלב הסופי של התנהגויות מטרה אחרות. זה היה נכון גם לגבי ארנב #7, שנפצע בזנב עקב קרבות בתוך הקבוצה מאז ההרגלה הרביעית. לכן, ארנב #7 נאסף, הועבר לשולחן הבדיקה, טופל ונבדק מדי יום במשך 15 ימים, מה שאולי הביא לזהירות מוגברת כלפי בני אדם. מצד אחד, חשוב לציין כי ביצועי האימון יכולים להיות מושפעים, למשל, ממצב בריאותי לקוי, רמות מתח מוגברות, או מערכת יחסים מופרעת בין אדם לחיה עקב התערבויות אחרות. מצד שני, תצפיות אלה הדגימו את חשיבות ההתרגלות למאמן ואת תגמול המזון. בעלי חיים מסוימים עשויים לדרוש זמן רב יותר כדי להכיר את נוכחותו של המאלף ולקבל את פרס המזון מהמאמן. אם היו נערכים מפגשי הרגלה נוספים, ארנב #4 ו #10 עשויים היו לבצע טוב יותר במפגשי האימונים. הרלוונטיות של הרגלת ארנבים לבני אדם כבר דווחה בספרות. המגדל המסחרי, שממנו נרכשו הארנבים המשמשים במחקר זה, הציג לאחרונה מפגשי ליטוף קבועים, אשר הפחיתו את ההתנהגות הקשורה ללחץ וביטלו תוקפנות58. במחקר קודם הודגם כי ליטוף וטיפול בארנבים צעירים מפחיתים התנהגות הקשורה לחרדה, מגבירים את העלייה במשקל שלהם ומפחיתים את שיעור התמותה59.
לאחר שהארנבים למדו את התנהגויות המטרה השונות, הם עדיין היו מסוגלים להציג אותן לאחר שתי הפסקות אימון קצרות (שבוע) וארוכות (כ-7.5-9.5 שבועות), למעט חריגים בודדים. תצפיות אלה עשויות להצביע על כך שמספיק לבקש מהארנבים לבצע את התנהגויות המטרה המאומנות פעם בשבוע כאשר הבדיקה הכללית מבוצעת, ומנקים את החדר/עט.
עבור היתכנות של הפרוטוקול עבור חיי העבודה היומיומיים, זה גם חיוני כי ארנבים להכליל את התנהגויות המטרה מאומן לאנשים אחרים מאשר המאמן. במקרה של חופשה או מחלה, אדם אחר צריך להמשיך את האילוף והטיפול בבעלי החיים. רוב הארנבים (שנים עשר מתוך שלושה-עשר) הכלילו את התנהגויות המטרה “שקילה”, “כניסה לתיבת הובלה” ו”גידול” למטפל בבעלי החיים, אם כי, במקרים מסוימים, נדרשו לארנבים יותר מאימון אחד כדי להראות את ההתנהגות הרצויה. נראה שהמילה “שקילה” היא הכללה הטובה ביותר; ואחריו “כניסה לתיבת הובלה” ו”גידול”. עם זאת, “קפיצה על הברכיים” נראה קשה יותר להכליל לאדם אחר. לקח לבעלי החיים זמן רב יותר להדגים את ההתנהגות הרצויה (9.9.) ושני ארנבים, שלמדו קודם לכן את השלב האחרון 9.9, לא הצליחו להראות התנהגות מטרה זו, אולי בגלל המגע הפיזי הגבוה יותר הדרוש (ראו לעיל). ארנב אחד (# 4) לא הראה צעדים כלשהם של התנהגויות המטרה “שקילה”, “כניסה לתיבת הובלה” ו”גידול “ולא היה מעוניין באינטראקציה עם המטפל בבעלי החיים. ארנב #4 היה אחד מבעלי החיים שהיו זקוקים לזמן רב יותר כדי להתרגל למאלף ולתגמול המזון במפגשי ההרגלה. זה עשוי להצביע על כך, עבור אנשים מסוימים, מפגשים נוספים שבהם המטפלים בבעלי חיים מבלים זמן עם הארנבות, להרגיל אותם לקבל את פרס המזון מהם ולבנות קשר חיובי מועילים23. ארנבים עשויים להיות מסוגלים להבחין בין אנשים שונים, כפי שהודגם עבור חולדות60. גורמים נוספים, שיש להם פוטנציאל להשפיע על ביצועי הארנבים בפגישות עם המאלף ועם המטפל בבעלי החיים, עשויים להיות אותות לא מודעים שהמאלף נתן לבעלי החיים במהלך האימון, למשל, מיקום מקל המטרה או קערת התגמול, תנוחת הגוף או התנועה. אם המאמן אינו מודע לאותות אלה, הם לא יתועדו והאנשים האחרים לא יחקו אותות אלה.
יתר על כן, מיומנויות האילוף של האנשים העובדים עם בעלי החיים, כולל שגרת הטיפול במקל המטרה והצגת התגמולים, יכולים להשפיע על התנהגות בעלי החיים. מלבד ידע בעקרונות למידה ותקשורת עם בעלי חיים, יש צורך בהתנסויות מעשיות כדי לאמן בהצלחה בעל חיים61 ולשלוף התנהגות מטרה. מכיוון שלא הושוו מפגשי הכללה של אדם מיומן ובלתי מיומן, לא ניתן לקבוע את הרלוונטיות של הגורם “מיומנויות אימון”. עם זאת, למיטב ידיעת המחברים, חלק גדול מצוות חיות המעבדה אינו מאומן באילוף בעלי חיים ולכן התנאים שבהם בוצעו מפגשי ההכללה (כלומר, השתתפות מטפל בבעלי חיים עם ניסיון קודם מועט בלבד באילוף קליקרים) ייצגו סביבה מציאותית במתקני חיות מעבדה.
הנתונים המייצגים של הפרוטוקולים מספקים למתקנים לבעלי חיים מושג על עומס העבודה הקשור לאימון התנהגויות המטרה השונות. הנתונים עשויים לסייע למתקנים לבעלי חיים ליצור לוחות זמנים משלהם לעבודה בעת יישום (חלקים של) הפרוטוקול. בהתאם להתנהגות האישית של בעל החיים והמטרה, יש לשמור זמן נוסף לתהליך ההכללה. עם זאת, משך הזמן עשוי להשתנות בעת עבודה עם ארנבים זכרים או גזע ארנב אחר. במתקני בעלי החיים יש לקיים דיון האם קיים זמן מתאים ומה צריך לשנות כדי לאפשר זמן לאילוף בעלי חיים.
מלבד הזמן הנדרש לאילוף בעלי החיים, יש לקחת בחשבון כי אילוף צריך מאמנים מיומנים וללמד את הצוות כיצד לאלף בעלי חיים יכול גם לקחת זמן. אם ההכשרה הייתה חלק חובה מהחינוך של אנשי צוות חיות המעבדה, כלומר מטפלים בבעלי חיים, וטרינרים וחוקרים, יישום אילוף בעלי חיים במתקנים היה מתקל יותר והיה לוקח פחות זמן. על פי נספח III של דירקטיבה 2010/63/EU, “מפעלים יקימו תוכניות הרגלה ואילוף המתאימות לבעלי החיים, לנהלים ולמשך הפרויקט”, כלומר, אילוף בעלי חיים נדרש על פי חוק. בגרמניה, יש להגיש תוכניות כאלה בעת הגשת בקשה לרישיון לניסויים בבעלי חיים. זה דורש שאנשים המתכננים ניסויים בבעלי חיים ועובדים עם חיות מעבדה יהיו מיומנים באילוף בעלי חיים. עם זאת, לפחות בגרמניה, אילוף בעלי חיים אינו חלק מלוח הזמנים של הכשרה של מטפלים בבעלי חיים בתחום המחקר והמרפאה 62,63,64. יתר על כן, היא אינה מוזכרת במפורש בהמלצות האיחוד האירופי למסגרת חינוך והכשרה65. לכן, כל עוד לא הוטמעה הכשרה בתקנות אלה, המשך הפיתוח המקצועי המתמקד בהכשרת חיזוקים חיוביים דורש תשומת לב רבה יותר. אנשי חיות המעבדה צריכים ללמוד את עקרונות טכניקות הלמידה והאילוף, את הקריטריונים הדרושים, את העברת הנוהל בין מאמנים, שמירת רשומות וכיצד להגיב לבעלי חיים שאינם משתתפים באופן רצוי כדי להבטיח עקביות ויכולת חיזוי.
אינטראקציה בין אדם לחיה
זמן האינטראקציה האינטנסיבי בין אדם לחיה במהלך האימונים מספק סביבה אופטימלית לחיזוק הקשר בין הארנבים הבודדים לבין המאלף26,66. יחסי אדם-חיה חיוביים מועילים לרווחתם של בעלי החיים, שכן הם יכולים להפחית את רמות הלחץ שלהם בגידול ובמסגרות ניסוי67. בפרוטוקולי האימון הנוכחיים, המאמן שוקל את סוכנות הארנבים והם יכולים להחליט להשתתף (או לא להשתתף) באימון על בסיס התנדבותי. מתן סוכנות לבעלי החיים מועיל לרווחתם 16 ולכן יש להמשיך בניסויים כמו גם בדיור ובגידול. ישנן רמות סוכנות התנהגותיות שונות68; ניתן לייחס את ההשתתפות ב-PRT לרמה של סוכנות מונעת פעולה, כלומר, “התנהגות פעילה להשגת תוצאות נוכחיות [למשל, רכישת מזון]”68.
כאשר מנתחים את הגישה הוולונטרית של הארנבים כלפי המאלף ואדם לא מוכר, ניתן להבחין באינטראקציה אינטנסיבית בין אדם לחיה. התוצאות הראו כי כל הארנבים, למעט חיה אחת בניסויהראשון (#12), קיימו אינטראקציה הן עם המאלף והן עם האדם הלא מוכר. נראה שהם זיהו את המאמן מכיוון שהם הראו העדפה ברורה לאינטראקציה עם המאמן בניסויהראשון וחלקם קפצו עם כל ארבע הכפות על ברכי המאמן; התנהגות שלא הוצגה כלפי האדם הלא מוכר. למרות שהארנבים בילו יותר זמן באינטראקציה עם המאמן מאשר האדם הלא מוכר בניסויהראשון , זמן האינטראקציה כבר לא היה שונהבמשפט השני . סיבה לתצפית זו עשויה להיות שהארנבים ציפו לקבל תגמול מזון מהמאמן בניסויהראשון ובשל היעדר תגמולי מזון במבחן הגישה מרצון, הם לא בילו יותר זמן עם המאמן בניסויהשני . עם זאת, נתונים אלה הדגישו כי הארנבים המאומנים התרגלו במהירות לנוכחותו של אדם לא מוכר ואף אחד מהם לא התבייש מדי לקיים אינטראקציה. לעומת זאת, הם היו מאוד חקרניים והתעניינו באדם הלא מוכר. עם זאת, מכיוון שקבוצת ביקורת לא מאומנת לא נחקרה, השפעת האימון על התנהגות הגישה הרצונית של הארנבים אינה ברורה.
השערה המסבירה את התנהגותו של ארנב #12 בניסויהראשון היא שאדם זה עדיין היה צריך להתרגל לנוכחותו של האדם הלא מוכר בניסויהראשון והיה מעוניין יותר באינטראקציה הן עם המאמן (70 שניות) והן עם האדם הלא מוכר (9 שניות) בניסויהשני. לארנבים יש תכונות אישיות שונות אשר עשויות להשפיע על רמת הנוחות סביב אנשים לא מוכרים ובתורו על ההשהיה להתקרב או משך זמן האינטראקציה עם אדם69,70.
מגבלות
אנו מודעים לכך שכל הארנבים במכלאה/חדר, לא רק זה שמשתתף באימון יכולים לשמוע את הקליק (כלומר, המחזק המותנה) במהלך האימון והשפעתו המחזקת עלולה להיחלש מכיוון שתגמול המזון (כלומר, המחזק הטבעי/הבלתי מותנה) אינו מוצג. אם ארנב מחוץ לזירת האימונים מראה התנהגות מאומנת ושומע את הקליק, אך לא מוצג מזון (ותרחיש זה מתרחש מספר פעמים), ההתנהגות המאומנת עלולה להיכחד. תופעה זו מכונה הכחדה64,71. עם זאת, מכיוון שכל התנהגויות המטרה של הפרוטוקולים הנוכחיים תלויות במטרה המוצגת על ידי המאמן, לא סביר שתתרחש הכחדה במסגרת האימונים שלנו.
מכיוון שקירות זירת האימונים היו שקופים וזירת האימונים הייתה ממוקמת במכלאה, יכלו הארנבים לראות, לשמוע ולהריח זה את זה במהלך האימונים, דבר המהווה יתרון מובהק הקשור לרווחה. יתר על כן, ייתכן שהארנבים צפו בחברי הקבוצה שלהם במהלך האימונים ולמדו זה מזה. בחולדות, הוכח בעבר, שאנשים למדו לבצע התנהגות מטרה על ידי צפייה בחברם לכלוב מאומן על ידי PRT45. עובדה זו עשויה להיחשב הן יתרון והן חיסרון. התקדמות הלמידה של בעלי החיים עשויה להיות מהירה יותר כאשר הם יכולים להתבונן זה בזה. עם זאת, הנתונים של בעלי החיים הבודדים עשויים להיות מושפעים מהביצועים של חברי הקבוצה ולא ניתן לייחס אותם אך ורק לאילוף של בעל החיים הבודד. לכן, אילוף בעלי חיים ללא כל מגע עם חברי הקבוצה שלהם או ארנבים בודדים יכול לקחת זמן רב יותר.
תצפיות התנהגותיות של הפרטים (במבחן הגישה הוולונטרית ולאחר יישום טכניקות הטיפול השונות) בוצעו בסביבה החברתית המוכרת שלהם ובקבוצה כדי למנוע מתח והסחת דעת הנגרמים על ידי סביבה חדשה והפרדה מקבוצתם, אשר בתורו היו משפיעים על התצפיות ההתנהגותיות. החיסרון הוא, עם זאת, שהארנבים עשויים להשפיע זה על התנהגותו של זה במהלך מפגשי התצפית.
ההשפעות של טכניקות הטיפול נחקרו רק בשבעה בעלי חיים שבהם היה מעורב המאלף כאדם המטפל בבעלי החיים. המחברים מתכננים מחקר המשך הכולל חישוב גודל מדגם א-פריורי כדי לשחזר את הממצאים עם מטפלים אחרים ולבחון עוד יותר את ההבדלים בין טכניקות הטיפול.
כל בני האדם שהיו מעורבים בהכשרה, בטיפול ובמבחן הגישה הוולונטרית היו נשים. לא נחקר אם ביצועי האילוף של הארנבים או התנהגותם ישתנו אם מדובר בזכרים.
פרוטוקולי האילוף הנוכחיים אמורים לתת לקורא מושג על מה ניתן לאלף ארנבים, אך אינם כוללים את כל התנהגויות המטרה הפוטנציאליות שיועילו לאילוף ארנב מעבדה. לדוגמה, סימון ארנב כפי שהוצע בסעיף הפרוטוקול על דרישות כלליות יהיה שווה גם הכשרה באמצעות PRT.
כפי שצוין לעיל, הבחירה בתגמול הנכון אינה טריוויאלית. בשל מגבלות היגיינה, השימוש בעשבי תיבול טריים כתגמולי מזון אסור בחלק ממתקני חיות המעבדה, ולכן יש להשתמש בתגמולי מזון פחות מתאימים כגון גרעיני חמניות או פינוקי ליקוט מבוססי דגנים. ביחס להחלטה על תגמול המזון, כמה כללים ותקנות של נוהלי המעבדה הנוכחיים מזיקים לרווחת בעלי החיים ולהכשרה יעילה, ולכן ייתכן שיהיה צורך לשקול אותם מחדש בכל מקרה לגופו. ייתכן שניתן יהיה גם להשתמש בחלופות לתגמולי מזון, כגון נגיעות עדינות או אינטראקציות עם המאמן או פריטי העשרה. עם זאת, המאלף חייב לוודא עבור כל חיה בנפרד כי האלטרנטיבה היא לתגמל את החיה כי פרס הוא רק פרס אם הארנב באמת מעדיף את זה. במיוחד נגיעות לא יכול להתקבל כמתגמל על ידי כל הארנבים.
מסקנות
לסיכום, המחקר הנוכחי היווה צעד ראשון להשלמת פער הידע על פרוטוקולי אילוף מתאימים לארנבי מעבדה. נקבות ארנבות לבנות מניו זילנד יכולות להיות מאומנות להליכי גידול שגרתיים באמצעות PRT ולהכליל את התנהגויות המטרה שנלמדו לאנשים אחרים, אם כי יש לשמור זמן נוסף לתהליך ההכללה. התנהגויות מטרה ללא מגע פיזי נראו קלות יותר ללמידה מאשר התנהגויות שדרשו מגע פיזי עם בני אדם. לאחר שהחיות סיימו בהצלחה את האימון של התנהגות מטרה, היה מספיק לשלוף אותן פעם בשבוע במסגרת הבדיקה הכללית וניקוי העט. פרוטוקולי אילוף הנחשבים מיושמים בדרך כלל על כל הארנבים נוחים, אך על המאלף להיות מודע לכך שבמקרים מסוימים, יש להתאים אותו לצרכי החיה. התוצאות על טכניקות הטיפול הראו כי להרים את הארנבים עם ארגז ההובלה במקום לרסן אותם על ידי קשקוש הצוואר שלהם ולהרים אותם על הזרוע היה פחות מרתיע. בסך הכל, הפרוטוקולים הנוכחיים מספקים הוראות אפשריות לתהליך ההרגלה והאילוף של ארנבים ויכולים לשמש כעידון במתקני חיות מעבדה.
אסור לבעלי חיים לסבול עקב חיסכון בעבודה, זמן או כסף (לפחות על פי חוק צער בעלי החיים הגרמני72). חשוב לטפל ולטפל בכל בעלי החיים בצורה העדינה ביותר האפשרית. מאחר שבעלי חיים לא מאומנים סובלים במידה רבה יותר מחרדה ומצוקה הנגרמים על ידי הליכי גידול ניסיוניים ושגרתיים מאשר עמיתיהם המאומנים13, אילוף הוא אמצעי חידוד פשוט כדי למנוע מהם לחוות מצבים רגשיים שליליים.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים למטפלים בבעלי החיים על הטיפול בארנבים ועל עבודתם החומלת והמסורה. תודה לקאי דידריך על ההגהה של כתב היד.
Materials
| Bed-r’Nest | The Andersons, Inc., Maumee, USA | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Finger Clicker | ASCO | https://ascoshop.de/products/fingerclicker | |
| G*Power | version 3.1.9.7 | ||
| Heu-Proppen | Ssniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| IBM Corp. Released 2020. IBM SPSS Statistics for Windows, Armonk, NY: IBM Corp | IBM Corp | Version 27.0. | in the manuscript referred to as "software for advanced statistical analysis" |
| Kaninchen Haltung + 25 mg/kg Salinomycin-Natrium-Sondermischung | Ssniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Lignocel block | Lignocel J. Rettenmaier &Söhne GmbH + Co KG, Rosenberg, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Lillebro geschälte Sonnenblumenkerne”, Martina GmbH, München, Germany) and Rainbow Foraging Bits (Bio-Serv, Flemington, USA) | Martina GmbH, München, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Microsoft Excel for Microsoft 365 MSO | Microsoft Corporation | Version 2305 | in the manuscript referred to as "spread sheet" |
| New Zealand White rabbits | Charles River Laboratories France | ||
| Plattformwaage DE 35K5DL | KERN & SOHN GmbH, Balingen-Frommern, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Premium scientific bedding (fine & flake) | SAFE, Augy, France | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Rainbow Foraging Bits | Bio-Serv, Flemington, USA | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Snackball für Kaninchen – 7 cm | TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Target stick with integrated clicker | TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Trixi Transportbox Capri Open Top | TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. | |
| Weiden-Heuball | JR FARM GmbH, Holzheim-Pessenburgheim, Germany | The successful implementation of the protocol does not depend on this particular product. You could use comparable products by other companies. |
Referências
- EU statistics on the use of animals for scientific purposes under directive 2010/63/eu-section 1: Number of animals used for research, testing, routine production and education and training purposes in the EU. European Commission Available from: https://webgate.Ec.Europa.Eu/envdataportal/content/alures/section1_number-of-animals.html (2023)
- EU statistics database on the use of animals for scientific purposes under directive 2010/63/eu-section 2: Details of all uses of animals for research, testing, routine production and education and training purposes in the EU. European Commission Available from: https://webgate.Ec.Europa.Eu/envdataportal/content/alures/section2_number-of-uses.html (2023)
- Russell, W. M. S., Burch, R. L. . The principles of humane experimental technique. , (1959).
- Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official journal of the European Union Available from: https://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/?uri=celex%3A32010L0063 (2023)
- Hau, J., Carver, J. Refinement in laboratory animal science; is it a cinderella subject, and is there conflict and imbalance within the 3Rs. Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 21 (4), 161-167 (1994).
- Prescott, M. J., Lidster, K. Improving quality of science through better animal welfare: the NC3Rs strategy. Lab Anim (NY). 46 (4), 152-156 (2017).
- European convention for the protection of vertebrate animals. Appendix a of the european convention for the protection of vertebrate animals used for experimental and other scientific purposes (ETS No. 123). Guidelines for accommodation and care of animals (article 5 of the convention). European convention for the protection of vertebrate animals. , (2006).
- Morimoto, A., Watanabe, T., Myogin, T., Murakami, N. Restraint induced stress elicits acute-phase response in rabbits. Pflügers Archiv – European Journal of Physiology. 410 (4), 554-556 (1987).
- Rooney, N. J., et al. The current state of welfare, housing and husbandry of the English pet rabbit population. BMC Research Notes. 7, 942 (2014).
- Schepers, F., Koene, P., Beerda, B. Welfare assessment in pet rabbits. Animal welfare. 18 (4), 477-485 (2009).
- Normando, S., Gelli, D. Behavioral complaints and owners’ satisfaction in rabbits, mustelids, and rodents kept as pets. Journal of Veterinary Behavior. 6 (6), 337-342 (2011).
- Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nature methods. 7 (10), 825-826 (2010).
- Leidinger, C., Herrmann, F., Thoene-Reineke, C., Baumgart, N., Baumgart, J. Introducing clicker training as a cognitive enrichment for laboratory mice. Journal of Visualized Experiments. (121), e55415 (2017).
- Lambeth, S. P., Hau, J., Perlman, J. E., Martino, M., Schapiro, S. J. Positive reinforcement training affects hematologic and serum chemistry values in captive chimpanzees (pan troglodytes). American Journal of Primatology. 68 (3), 245-256 (2006).
- Reinhardt, V. Working with rather than against macaques during blood collection. Journal of Applied Animal Welfare Science. 6 (3), 189-197 (2003).
- Sueur, C., Zanaz, S., Pelé, M. Incorporating animal agency into research design could improve behavioral and neuroscience research. Journal of Comparative Psychology. 137 (2), 129-143 (2023).
- Skinner, B. F. Two types of conditioned reflex: a reply to Konorski and M. The Journal of General Psychology. 16 (1), 272-279 (1937).
- Skinner, B. F. . The behavior of organisms: An experimental analysis. , (1938).
- Pierce, W. D., Cheney, C. D. . Behavior analysis and learning: a biobehavioral approach. , (2017).
- Cooper, J. O., Heron, T. E., Heward, W. L. . Applied behavior analysis. , (2020).
- Pryor, K. . Don’t shoot the dog: The art of teaching and training. , (2019).
- Brando, S., Norman, M. Handling and training of wild animals: Evidence and ethics-based approaches and best practices in the modern zoo. Animals (Basel). 13 (14), (2023).
- Heidenreich, B. An introduction to positive reinforcement training and its benefits). Journal of Exotic Pet Medicine. 16 (1), 19-23 (2007).
- Vieira De Castro, A. C., et al. Does training method matter? Evidence for the negative impact of aversive-based methods on companion dog welfare. PLoS One. 15 (12), 0225023 (2020).
- Laule, G., Hubrecht, R. C., Kirkwook, J. . The UFAW Handbook on the care and management of laboratory and other research animals. , 206-218 (2010).
- Zimbardo, P. G., Gerrig, R. J. . Psychologie. 18th edition. , (2004).
- Powell, R. A., Honey, P. L., Symbaluk, D. G. . Introduction to learning and behavior. 5th edition. , (2017).
- Peterson, G. B. A day of great illumination: B. F. Skinner’s discovery of shaping. J Exp Anal Behav. 82 (3), 317-328 (2004).
- Skinner, B. F. How to teach animals. Scientific American. 185 (6), 26-29 (1951).
- Breland, K., Breland, M. A field of applied animal psychology. American Psychologist. 6 (6), 202-204 (1951).
- Fernandez, E. J., Martin, A. L. Animal training, environmental enrichment, and animal welfare: a history of behavior analysis in zoos. Journal of Zoological and Botanical Gardens. 2 (4), 531-543 (2021).
- Ferguson, D. L., Rosales-Ruiz, J. Loading the problem loader: The effects of target training and shaping on trailer-loading behavior of horses. J Appl Behav Anal. 34 (4), 409-423 (2001).
- Fernandez, E. J., Dorey, N. R. An examination of shaping with an african crested porcupine (hystrix cristata). J Appl Anim Welf Sci. 24 (4), 372-378 (2021).
- Fernandez, E. J., Rosales-Ruiz, J. A comparison of fixed-time food schedules and shaping involving a clicker for halter behavior in a petting zoo goat. The Psychological Record. 71 (3), 487-491 (2021).
- Slater, C., Dymond, S. Using differential reinforcement to improve equine welfare: shaping appropriate truck loading and feet handling. Behav Processes. 86 (3), 329-339 (2011).
- Pfaller-Sadovsky, N., Hurtado-Parrado, C., Cardillo, D., Medina, L. G., Friedman, S. G. What’s in a click? The efficacy of conditioned reinforcement in applied animal training: A systematic review and meta-analysis. Animals (Basel). 10 (10), (2020).
- Prescott, M., Bowell, V., Buchanan-Smith, H. Training laboratory-housed non-human primates, part 2: Resources for developing and implementing training programmes. Animal Technology and Welfare. 4 (3), 133-148 (2005).
- Prescott, M., Buchanan-Smith, H. Training laboratory-housed non-human primates, part i: A UK survey. Animal welfare. 16 (1), 21-36 (2007).
- Schapiro, S. J., Bloomsmith, M. A., Laule, G. E. Positive reinforcement training as a technique to alter nonhuman primate behavior: Quantitative assessments of effectiveness. Journal of Applied Animal Welfare Science. 6 (3), 175-187 (2003).
- Joint Working Group on Refinement. Refining dog husbandry and care. Eighth report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW joint working group on refinement. Laboratory Animals. 38, 1-94 (2004).
- Meunier, L. D. Selection, acclimation, training, and preparation of dogs for the research setting. ILAR Journal. 47 (4), 326-347 (2006).
- Thomsen, A. F., Kousholt, B. S. Transition of farm pigs to research pigs using a designated checklist followed by initiation of clicker training – a refinement initiative. Journal of Visualized Experiments. (174), e62099 (2021).
- Langbein, J., Siebert, K., Nuernberg, G., Manteuffel, G. The impact of acoustical secondary reinforcement during shape discrimination learning of dwarf goats (capra hircus). Applied Animal Behaviour Science. 103 (1), 35-44 (2007).
- Leidinger, C. S., Kaiser, N., Baumgart, N., Baumgart, J. Using clicker training and social observation to teach rats to voluntarily change cages. Journal of Visualized Experiments. (140), e58511 (2018).
- Poling, A., et al. Tuberculosis detection by giant african pouched rats. The Behavior Analyst. 34 (1), 47-54 (2011).
- Poling, A., et al. Using trained pouched rats to detect land mines: Another victory for operant conditioning. Journal of Applied Behavior Analysis. 44 (2), 351-355 (2011).
- Rubin, H. B., Brown, H. J. The rabbit as a subject in behavioral research. J Exp Anal Behav. 12 (4), 663-667 (1969).
- Müller, I. . Clickertraining: Für Kaninchen. , (2015).
- Bradbury, A. G., Dickens, G. J. Appropriate handling of pet rabbits: a literature review. J Small Anim Pract. 57 (10), 503-509 (2016).
- Mähler, M., et al. Felasa recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Laboratory Animals. 48 (3), 178-192 (2014).
- Faul, F., Erdfelder, E., Lang, A. G., Buchner, A. G*power 3: a flexible statistical power analysis program for the social, behavioral, and biomedical sciences. Behavior Research Methods. 39 (2), 175-191 (2007).
- Friard, O., Gamba, M. Boris: A free, versatile open-source event-logging software for video/audio coding and live observations. Methods in Ecology and Evolution. 7 (11), 1325-1330 (2016).
- Landis, J. R., Koch, G. G. The measurement of observer agreement for categorical data. Biometrics. 33 (1), 159-174 (1977).
- Réale, D., Dingemanse, N. J., Kazem, A. J., Wright, J. Evolutionary and ecological approaches to the study of personality. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological sciences. 365 (1560), 3937-3946 (2010).
- Mullan, S. M., Main, D. C. Behaviour and personality of pet rabbits and their interactions with their owners. Veterinary Record. 160 (15), 516-520 (2007).
- Mackie, J., Patel, C., Rendle, M., Hinde-Megarity, J. . Bsava manual of practical veterinary welfare. , 146-165 (2022).
- Dhondt, K. P., Rabany, B., Méon, B., Leal, A., Paillet, G. Rabbit human habituation program during breeding reduced significantly stress related signs during acclimatization period. In Abstracts of 15th FELASA congress 2022. Laboratory Animals. 56, 23 (2022).
- Jezierski, T. A., Konecka, A. M. Handling and rearing results in young rabbits. Applied Animal Behaviour Science. 46 (3), 243-250 (1996).
- Davis, H., Taylor, A. A., Norris, C. Preference for familiar humans by rats. Psychonomic Bulletin & Review. 4 (1), 118-120 (1997).
- Meier, J., Hillmann, E., Theby, V., Fischer-Tenhagen, C. Train the trainer: what is needed to train goats for experiments. In Abstracts of 15th FELASA congress 2022. Laboratory Animals. 56, 24 (2022).
- BGBL. I S. . Verordnung über die Berufsausbildung zum Tierpfleger/zur Tierpflegerin vom 3. , 1093 (2003).
- Pavlov, P. I. Conditioned reflexes: An investigation of the physiological activity of the cerebral cortex. Annals of Neurosciences. 17 (3), 136-141 (2010).
- Skinner, B. On the rate of extinction of a conditioned reflex. The Journal of General Psychology. 8 (1), 114-129 (1933).
- Directorate-General for Environment (European Commission). Caring for animals aiming for better science – directive 2010/63/eu on protection of animals used for scientific purposes – education and training framework. Directorate-General for Environment (European Commission). , (2018).
- Rault, J. L., Waiblinger, S., Boivin, X., Hemsworth, P. The power of a positive human-animal relationship for animal welfare). Frontiers in Veterinary Science. 7, 590867 (2020).
- Bayne, K. Development of the human-research animal bond and its impact on animal well-being. ILAR J. 43 (1), 4-9 (2002).
- Špinka, M. Animal agency, animal awareness and animal welfare. Animal Welfare. 28 (1), 11-20 (2019).
- Ellis, C. F. . Exploring domestic rabbit (oryctolagus cuniculus) personality utilising behaviour coding, behaviour testing and a novel behaviour rating tool. , (2020).
- Gomezdelatorre Clavel, M. G., Youngblood, M., Lahti, D. Relationship between personality and cognitive traits in domestic rabbits (Oryctolagus cuniculus). bioRxiv. , (2020).
- Pavlov, P. I. Conditioned reflexes: An investigation of the physiological activity of the cerebral cortex. Annals of Neurosciences. 17 (3), 136 (2010).
