用于分子分析的人水和玻璃体液体活检的生物样本库

该协议遵循美国斯坦福大学人类受试者研究机构审查委员会（IRB）的指导方针。 注意：本协议是合格眼科外科医生的指南。在眼内恶性肿瘤的情况下，不能排除房水或玻璃体液活检情况下的眼外肿瘤播种。然而，经玻璃体脉络膜肿瘤活检的眼外延伸和眼眶受累的风险极低，这是以安全性增强的方式进行的，并仔细考虑进入部位6。该方案不包括视网膜母细胞瘤或具有高转移风险的肿瘤，并且可能禁忌。 1. 样品采集前 机构审查委员会批准 在实验开始前获得当地IRB的批准，并相应地进行样品收集。 研究人群 纳入标准：包括在该机构接受眼内手术的所有患者（0 – 99 岁），该机构将提供足够数量的房水或玻璃体液体，超过适当的诊断测试所需的量，以评估患者的病情和希望参与的患者。 排除标准：排除拒绝参加的患者和孕妇。 知情同意 按照IRB批准的方案获得每位患者的书面知情同意。 将签名的同意存档到安全的数据库中。 如本协议所述，培训相关人员（外科医生、实验室技术人员、手术室 （OR） 工作人员、科学家）。 设置示例管理数据库。使用 REDCap 作为符合 HIPAA 标准的基于 Web 的样本数据库，旨在支持研究的数据捕获5.注意：本文介绍如何使用 REDCap 提供的基于 Web 的界面来设计表单、定义字段、设置分支逻辑和应用数据验证规则，而无需广泛的编程知识。或者，其他软件，例如标准电子表格应用程序，也可能是合适的。 确保冷却箱、干冰、样品采集注射器和冷冻管的可用性（见 材料表）。使用带有永久蚀刻在小瓶上的条形码的冷冻管。这消除了在小瓶上添加患者标识符的需要，以及在冷冻条件下丢失标签的可能性。 在预定手术前至少 24 小时通知外科医生和实验室技术人员，他们将在手术前至少 24 小时帮助采集样本。 2. 在手术室采集手术标本 移动手术室实验室界面（莫利） 在手术室建立MORLI。MORLI包括一个平坦的实验室工作台表面，一台带有条形码扫描仪的计算机/平板电脑，可以访问REDCap数据库，以及一个带干冰的冷却箱（见 材料表）。注意：干冰非常冷。处理干冰时始终戴手套，避免触摸干冰。 在手术室中制备样品采集 登录MORLI上的计算机/平板电脑并打开REDCap数据库。 检查患者是否已签署知情同意书，并与外科医生确认。提醒他/她需要未稀释的样品。 戴手套。获取适当数量的条形码冷冻管（房水为 0.5 mL，玻璃体样品为 1.9 mL），并将其放置在易于接近的地方。 房水活检的收集注意：将人体组织样本视为生物危害性材料，这需要适当的预防措施，例如实验室外套和手套，以确保相关人员的安全。注意：以下步骤只能由训练有素的眼科医生执行。房水活检可以在白内障手术开始时获得，白内障手术是全球最常见的手术之一。注意：根据手术室的标准护理协议保持无菌区域。与患者麻醉相关的术前程序遵循前房和玻璃体视网膜手术的标准护理步骤。准备并悬垂眼睛进行手术，并放置无菌眼睑窥器，以获得最佳无菌区域的可视化效果。 使用手术显微镜使用连接到 1 mL 注射器的 30-32 G 针头进行垂直于角膜缘的前房穿刺术。在此过程中，使用棉尖或小镊子稳定眼睛。注意：确保针头和注射器已锁定，并且注射器中没有压力（通过移动柱塞）。确保针尖保持在中前房的外周虹膜上，以避免损伤眼内结构。在白内障手术的情况下，获得液体活检的针头也可以通过为白内障手术创建的穿刺者之一进入前房。 在通过显微镜直接可视化的情况下，使用 1 mL 注射器手动吸出约 100 μL 未稀释的房水。用外科医生的非惯用手或训练有素的助手移动注射器柱塞，而无需移动针头。注意：获得少于 100 μL 的房水，以防前房塌陷。 小心地从前房取出针头。注意：在有晶状体眼睛中，将针保持在虹膜上以避免接触晶状体。眼球上的正压会增加反流。在拔出针头之前松开棉尖有助于减少回流。 拉回柱塞，看看空气和收集的流体是如何移动的。 将注射器注入冷冻管。额外的空气清除注射器的死角。 使用冷冻管上的条形码将样本扫描到手术室计算机上的REDCap表格（更多详细信息见步骤3.1至3.9）。 立即将冷冻管转移到冷却箱中的干冰中。 继续为患者安排的手术（例如，如前所述7 的白内障手术）。 玻璃体液体活检的采集注意：以下步骤只能由训练有素的玻璃体视网膜外科医生执行。玻璃体液体活检可在玻璃体切除术开始时进行8.由于目标是收集未稀释的玻璃体样品，因此玻璃体切除术切割机不会灌注液体1。注意：根据手术室的标准护理协议保持无菌区域。与患者麻醉相关的术前程序遵循前房和玻璃体视网膜手术的标准护理步骤。准备并悬垂眼睛进行手术，并放置无菌眼睑窥器，以获得最佳无菌区域的可视化效果。 按照标准护理程序，使用 23、25 或 27 G 套管进行菌核切除术。插入输液插管并目视确认玻璃体腔中的适当位置。 在玻璃体腔中，无需输注即可激活玻璃体切割器以收集未稀释的玻璃体样品。使用连接到玻璃体挤出插管的注射器手动吸出 0.5 至 1.0 mL 玻璃体1. 从眼睛上取下玻璃体切割器并打开液体输注。 将管内剩余的液体吸入注射器中。 断开注射器。 按照第2.3节（步骤2.3.5至步骤2.3.9）中对房水样品的描述处理样品。 3. 在手术室中处理样本并将样本添加到数据库中 要求实验室技术人员取出准备好的冷冻管（房水为 0.5 mL，玻璃体样本为 1.9 mL），并在不接触任何无菌手术室设备的情况下步行到外科医生处。 请实验室技术人员打开冷冻管。 将注射器直接卸载到冷冻管中。 请实验室技术人员立即回顾冷冻管。 请实验室技术人员走回MORLI，并立即将样品转移到冷却箱（-80°C）中的干冰上。合上盒子的盖子。 打开新的示例收集表单。在表格的相应字段中输入以下信息：病例外科医生、收集地点和日期、患者标识符号和其他基本信息，例如年龄、性别、右眼或左眼、诊断、术前病史（自由文本）、有关程序的信息（例如，手术类型）以及有关样本的信息，例如收集的样本数量， 样品类型（房水、玻璃体）和其他细节，如体积。使用条形码扫描仪添加管条形码。 单击 提交/下一步。 如果收集了任何其他样本，请重复步骤 3.1 到 3.7。 保护所有示例后，单击“ 保存并提交” REDCap 示例收集“表单。然后注销数据库和计算机/平板电脑。 4. 将冷冻管转移到储存室 将冷却箱中的干冰样品从手术室运输到实验室，并将其放在实验室计算机旁边的实验室工作台上。 使用您的登录ID和密码在实验室计算机上登录REDCap。 戴手套。取收集到的样本之一，并将冷冻管的条形码扫描到数据库中（更多详细信息见第5节）。立即将样品放回干冰上。 获得第二个装满干冰的容器。 从-80°C冰箱中获取冷冻管架。将其放入干冰上的第二个容器中。注意：0.5 mL 体液水管需要一个 96 规格的架子，1.9 mL 玻璃体液管需要一个 48 规格的架子。 将机架的条形码扫描到数据库（更多详细信息见第 5 节）。 将样品转移到架上。 将样品瓶在架子中的位置添加到数据库中（更多详细信息见第5节）。 单击 保存并提交。 将装有小瓶的架子在干冰上运送到冰箱中，以在-80°C下储存。 使用坐标系将架子添加到冰箱中的特定位置。这将允许以后轻松检索样品进行下游分析。 5. 样品存储表格 为在输入表单阶段收集的每个样品填写存储表格。单击 空圆圈 或样品存储下的“+”以创建并打开新的 存储 表单。 在 “记录存档日期”下输入此表单的填写日期。 扫描或键入试管 条形码下的试管条形码。立即将样品放回干冰上。 选择是将样品移出还是将样品放入内部生物储存库。 验证是否已从患者处获得书面知情同意，并选中“验证同意 合规性 ”下的框，然后在 “同意验证者”下输入您的姓名。 为架子中的冷冻管选择一个空闲且合适的位置。将这个位置的冷冻管转移到架子上（例如，位置A1）。将架子放在干冰上。 在“位置”阶段，输入以下信息：冰箱下冰箱的位置、样品存放在货架下的货架号、盒子条形码下的盒子条形码、逐行（管位置（行））和列（管位置（列））中的试管位置。注意：或者，也可以在“箱子标签”下输入箱子标签，这可能有助于在冰箱中找到 箱子。 在 “使用情况 ”部分下，输入以下信息：示例用于的项目的名称（项目名称）、以下类别之一的样本体积：完整、部分、接近空或空（样本体积），以及 存储注释下的存储注释（如果适用）。注意：上次访问表单的日期、时间和用户会自动填充，以确保可以根据需要查看和审核监管链。 通过单击“完成？”下的“完成”来确认表单已完成。 单击“ 保存并退出表单”。这将带您回到患者概述。 对于收集的每个试管，通过单击样品存储下的“+”生成另一个 样品收集表。然后重复步骤 5.1 到 5.10。 单击 保存并退出 以填写表单并注销数据库和计算机/平板电脑。 将样品架（在干冰上）转移到冰箱的预定位置。 6. 提取手术标本进行下游分析 注意：标本通常在分析之前存档数年。条形码冷冻管和可搜索的REDCap数据库系统可以轻松查找和定位每个样品以进行下游分析。 通过使用数据库的搜索功能识别实验感兴趣的样本。这将允许从20至40岁的糖尿病视网膜病变患者中发现例如所有房水样本。 获取感兴趣的冷冻管的位置（冰箱、搁架/架子、样品架、样品架内的坐标）。将它们写下来，打印出来，或在移动计算机/平板电脑上提供，以方便在冰箱中查找样品。 将示例标记为在数据库中使用。 单击 保存并退出 以填写表单并注销 REDCap 和计算机/平板电脑。