脉络丛 （ChP） 通常被认为通过分泌脑脊液 （CSF） 和脑源性神经营养因子 （BDNF） 来帮助维持脑功能稳态^1,2。在过去三十年中，越来越多的研究表明，ChP 代表了免疫细胞浸润到中枢神经系统 （CNS） 的独特途径。

ChP 的紧密连接 （TJ） 由单层 ChP 上皮细胞组成，通过阻止大分子和免疫细胞进入大脑来维持免疫稳态³。然而，在某些病理条件下，ChP 组织会检测脑脊液和血液中的危险相关分子模式 （DAMP） 并做出反应，导致异常免疫浸润和脑功能障碍 ^4,5。尽管ChP起着关键作用，但它的小尺寸和在大脑中的独特位置使得很难在不影响其他大脑区域的情况下研究其功能。因此，在ChP中特异性地操纵基因表达是了解其功能的理想方法。

最初，环化重组酶 （Cre） 转基因系在 ChP 中表达的基因特异性启动子的控制下表达 Cre，通常用于通过与 flox 候选基因杂交来删除靶基因 ^6,7,8。例如，转录因子叉头盒J1（FoxJ1）仅在产前小鼠脑的ChP上皮细胞中表达⁷。因此，FoxJ1-Cre 系通常用于删除位于 ChP ^6,9 中的基因。然而，这种策略的成功很大程度上取决于启动子的特殊性。逐渐发现 FoxJ1 的表达模式不够独特，因为 FoxJ1 也存在于大脑和外周系统其他部位的纤毛上皮细胞中⁷。为了克服这一局限性，进行了脑室内 （ICV） 注射 Cre 重组酶，以将重组酶输送到絮状转基因系的脑室中。该策略显示出高度特异性，仅在 ChP 组织中存在 tdTomato 荧光就证明^{了这一点 10,11}。然而，这种方法仍然受到氟化转基因小鼠品系可用性的限制。为了解决这个问题，研究人员采用了腺相关病毒 （AAV） 的 ICV 注射来实现 ChP 特异性敲低或靶基因的过表达^12,13。对不同 AAV 血清型的 ChP 感染的综合评估显示，AAV2/5 和 AAV2/8 在 ChP 中表现出很强的感染能力，而不感染其他大脑区域。然而，发现 AAV2/8 感染心室周围的室管膜，而 AAV2/5 组未显示感染¹⁴。该方法的优点是克服了获得floxed转基因动物的局限性。

本文描述了使用两种方法在 ChP 中敲低基因的分步方案：携带腺苷 A 2A 受体 （A 2A R） 的 shRNA 的 AAV2/5 的 ICV 和由 TAT 序列 （CRE-TAT） 重组酶组成的 Cre 重组酶蛋白，以实现 A_2A R 的 ChP 特异性敲低。研究结果表明，敲低 ChP 中的 A_2AR 可以缓解实验性自身免疫性脑脊髓炎 （EAE）。该详细方案为 ChP 功能研究和 ChP 中基因的特异性敲低提供了有用的指导。