डाउनस्ट्रीम उपयोग (जैसे, एलिसा, एंजाइम कैनेटीक्स, पश्चिमी सोख्ता, प्रोटीन शुद्धि, और मास स्पेक्ट्रोमेट्री) के बावजूद, जीवन विज्ञान प्रयोगशालाओं में सटीक विश्लेषण के लिए प्रोटीन मात्रा का ठहराव महत्वपूर्ण है। माध्यमिक रीडआउट के रूप में उनके उपयोग के अलावा (यानी, प्रोटीन के प्रति द्रव्यमान विश्लेषण के सापेक्ष स्तर की गणना करने के लिए), एक नमूने में प्रोटीन का स्तर भी वांछित आउटपुट हो सकता है। उदाहरण के लिए, खाद्य संसाधनों¹ या मूत्र² में प्रोटीन के स्तर में रुचि हो सकती है। नमूनों में प्रोटीन एकाग्रता को मापने के लिए कई तरीके उपलब्ध हैं³, प्रत्यक्ष यूवी अवशोषण रीडिंग⁴, प्रोटीन-कॉपर केलेशन ^5,6, प्रोटीन-डाई बाध्यकारी वर्णमिति परख⁷, और प्रोटीन-डाई बाध्यकारी फ्लोरोसेंट परख⁸ सहित। प्रोटीन मात्रा की प्रासंगिकता सबसे उद्धृत साहित्य ^9,10 के शीर्ष -3 में प्रोटीन माप विधियों ^5,7 का वर्णन करने वाले दो पत्रों की उपस्थिति से स्पष्ट है। इस तथ्य के बावजूद कि कई लेखक गैर-प्राथमिक संदर्भों का हवाला देते हुए या कुछ भी उद्धृत नहीं करके अपने वास्तविक उद्धरण की उपेक्षा करते हैं, लोरी प्रोटीन परख और ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख का वर्णन करने वाले मूल कागजात प्रत्येक¹⁰ में > 200,000 उद्धरण देते हैं।

ब्रैडफोर्ड परख की लोकप्रियता इसकी सामर्थ्य, सादगी, गति और संवेदनशीलता से उपजी है। परख अम्लीय परिस्थितियों में प्रोटीन और डाई कूमासी ब्रिलियंट ब्लू जी के बीच बातचीत पर आधारित है। परख (यानी, कम पीएच) की शर्तों के तहत, डाई तीन रूपों में मौजूद है: 470 एनएम पर λmax के साथ एक लाल धनायनित रूप; 650 एनएम पर λmax के साथ एक हरा तटस्थ रूप; और 590 एनएम^11,12 (चित्रा 1) पर λmax के साथ एक नीला आयनिक रूप। प्रोटीन की अनुपस्थिति में धनायनित रूप प्रबल होता है। जैसे ही प्रोटीन डाई के साथ बातचीत करते हैं, वे नीले आयनिक रूप को स्थिर करते हैं, जिससे समाधान के रंग में भूरे से नीले रंग में ध्यान देने योग्य परिवर्तन होता है। आमतौर पर, डाई के नीले रूप की एकाग्रता में परिवर्तन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से निर्धारित किया जाता है, जिसका अवशोषण 590-595 एनएम पर परख में प्रोटीन की मात्रा के लिए आनुपातिक होता है।

चित्रा 1: ब्रैडफोर्ड परख की शर्तों के तहत कूमासी शानदार नीले जी अवशोषण स्पेक्ट्रा। तीन मुख्य चोटियों को तीर के साथ चिह्नित किया जाता है जो डाई के लाल (470 एनएम), हरे (650 एनएम), और नीले (590 एनएम) रूपों के λमैक्स को दर्शाता है। स्पेक्ट्रा प्रोटीन (पीली रेखा) की अनुपस्थिति में और गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन के 3 μg (ग्रे लाइन) और 10 μg (नीली रेखा) की उपस्थिति में दर्ज किए गए थे। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

ब्रैडफोर्ड परख के व्यापक उपयोग कई सीमाओं की पहचान के लिए नेतृत्व किया है (जैसे, विभिन्न प्रोटीन¹¹ के लिए चर प्रतिक्रियाओं, और लिपिड¹³ और डिटर्जेंट⁷ द्वारा हस्तक्षेप) और संशोधनों के विकास के लिए अपने प्रदर्शन में सुधार करने के लिए (जैसे, डिटर्जेंट^14,15 के अलावा, क्षारीकरण^14,16 और अवशोषण¹⁷ के अनुपात का उपयोग). परख में ही संशोधनों के अलावा, विश्लेषणात्मक संकेतों को पकड़ने के लिए स्मार्टफोन या कैमरों जैसे वैकल्पिक उपकरणों का उपयोग भी 18,19,20 वर्णित किया गया है। दरअसल, पोर्टेबल रासायनिक विश्लेषक के रूप में स्मार्टफोन का उपयोग करने वाले तरीकों का विकास अनुसंधान का एक सक्रिय क्षेत्र रहा है। स्मार्टफोन के उपयोग की प्रेरणा इन उपकरणों की सामर्थ्य, पोर्टेबिलिटी, उपयोग में आसानी और व्यापक उपलब्धता से उपजी है।

यह पेपर RGBradford परख²⁰ का उपयोग करके प्रोटीन परिमाणीकरण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करता है, जो एक विश्लेषणात्मक उपकरण के रूप में स्मार्टफोन का उपयोग करता है। मूल RGBradford प्रकाशन²⁰ के विपरीत, यहां, रंग निष्कर्षण प्रक्रिया को सुव्यवस्थित करने वाली एक प्रक्रिया पेश की गई है। इसमें माइक्रोप्लेट चित्र के प्रत्येक कुएं से स्वचालित रूप से रंग जानकारी निकालने के लिए स्वतंत्र रूप से उपलब्ध सॉफ़्टवेयर एप्लिकेशन का उपयोग शामिल है, जिससे महत्वपूर्ण समय और प्रयास की बचत होती है। यह एक ग्राफिक्स संपादक सॉफ्टवेयर अनुप्रयोग²⁰ का उपयोग करके एक-एक करके प्रत्येक अच्छी तरह से मैन्युअल रूप से रंग डेटा प्राप्त करने की पिछली विधि का एक विकल्प है। अंततः, नमूनों में प्रोटीन के स्तर को स्मार्टफोन के साथ ली गई माइक्रोप्लेट की तस्वीर से निकाले गए रंग डेटा का उपयोग करके निर्धारित किया जा सकता है।