Summary

Électrophysiologie de l’activité corticale laminaire chez le ouistiti commun

Published: August 04, 2023
doi:

Summary

Des micro-variateurs sur mesure permettent de cibler des sites d’enregistrement corticaux submillimétriques avec des réseaux linéaires de silicium.

Abstract

Le ouistiti fournit un modèle idéal pour examiner les circuits corticaux laminaires en raison de sa surface corticale lisse, qui facilite les enregistrements avec des réseaux linéaires. Le ouistiti a récemment gagné en popularité en raison de son organisation fonctionnelle neuronale similaire à celle des autres primates et de ses avantages techniques pour l’enregistrement et l’imagerie. Cependant, la neurophysiologie dans ce modèle pose des défis uniques en raison de la petite taille et de l’absence de gyri comme repères anatomiques. À l’aide de micro-disques personnalisés, les chercheurs peuvent manipuler le placement du réseau linéaire avec une précision inférieure au millimètre et enregistrer de manière fiable au même endroit ciblé par le rétinotopie pendant les jours d’enregistrement. Ce protocole décrit la construction étape par étape du système de positionnement du micro-entraînement et la technique d’enregistrement neurophysiologique avec des réseaux d’électrodes linéaires en silicium. Grâce à un contrôle précis du placement des électrodes au cours des sessions d’enregistrement, les chercheurs peuvent facilement traverser le cortex pour identifier les zones d’intérêt en fonction de leur organisation rétinotopique et des propriétés d’accord des neurones enregistrés. De plus, en utilisant ce système d’électrodes à réseau laminaire, il est possible d’appliquer une analyse de densité de source de courant (CSD) pour déterminer la profondeur d’enregistrement des neurones individuels. Ce protocole présente également des exemples d’enregistrements laminaires, y compris des formes d’onde de pointe isolées dans Kilosort, qui couvrent plusieurs canaux sur les réseaux.

Introduction

Le ouistiti commun (Callithrix jacchus) a rapidement gagné en popularité en tant que modèle pour étudier le fonctionnement du cerveau ces dernières années. Cette popularité croissante est due à l’accessibilité du cortex lisse du ouistiti, aux similitudes dans l’organisation fonctionnelle neuronale avec les humains et les autres primates, ainsi qu’à la petite taille et au taux de reproduction rapide1. Au fur et à mesure que cet organisme modèle a gagné en popularité, il y a eu un développement rapide des techniques neurophysiologiques adaptées à une utilisation dans le cerveau des ouistitis. Les méthodes d’électrophysiologie sont largement utilisées en neurosciences pour étudier l’activité des neurones uniques dans le cortex des rongeurs et des primates, ce qui permet d’obtenir une résolution temporelle et un accès à la localisation inégalés. En raison de la relative nouveauté du singe ouistiti en tant que modèle de neurosciences visuelles, l’optimisation des techniques d’électrophysiologie à comportement éveillé est encore en évolution. Des études antérieures ont montré l’établissement de protocoles robustes pour l’électrophysiologie dans les préparations anesthésiées2, et des études de neurophysiologie précoce à comportement éveillé ont montré la fiabilité des électrodes de tungstène à canal unique3. Ces dernières années, les chercheurs ont établi l’utilisation de réseaux de microélectrodes à base de silicium pour la neurophysiologie éveillée4. Cependant, le ouistiti pose des défis de ciblage uniques en raison de la petite taille de son cerveau et de l’absence de repères anatomiques. Ce protocole décrit comment construire et utiliser un système d’enregistrement de micro-entraînement adapté au ouistiti qui permet d’enregistrer de grandes populations de neurones avec des réseaux linéaires en silicium tout en produisant des dommages tissulaires minimaux.

Travailler avec le ouistiti pose un défi en raison de la plus petite échelle des cartes rétinotopiques dans le cortex visuel par rapport aux primates plus grands. Un léger décalage des électrodes de seulement 1 mm peut entraîner des changements significatifs dans les cartes. De plus, les chercheurs doivent souvent modifier le placement des électrodes entre les sessions d’enregistrement pour obtenir une gamme plus large de positions rétinotopiques dans le cortex visuel. Les préparations semi-chroniques actuelles ne permettent pas d’ajuster quotidiennement le positionnement de l’électrode ou avec suffisamment de précision pour cibler des emplacements spécifiques à des échelles submillimétriques5. Dans cette optique, le système de micro-entraînement proposé utilise un étage d’électrode X-Y qui monte un micro-entraînement léger sur une chambre d’enregistrement et permet le ciblage submillimétrique des sites corticaux. Les composants mobiles de la platine X-Y permettent un mouvement vertical et horizontal du réseau linéaire afin de traverser systématiquement les zones corticales, ce qui est nécessaire pour identifier les zones d’intérêt (via les propriétés de rétinotopie et d’accordage). Au fil des sessions d’enregistrement, les chercheurs peuvent également ajuster manuellement la platine X-Y pour déplacer les sites ciblés dans la zone. Il s’agit d’un avantage clé par rapport aux techniques alternatives utilisant des préparations d’enregistrement semi-chroniques, qui n’ont pas de mécanismes de ciblage d’électrodes faciles.

Le micro-entraînement est un outil polyvalent qui permet de fixer divers réseaux de silicium pour les descendre dans le cortex. Dans ce protocole, une sonde personnalisée avec deux réseaux linéaires à 32 canaux espacés de 200 μm a été utilisée pour l’étude des circuits laminaires couvrant la profondeur corticale. La plupart des méthodes de sondage des circuits neuronaux échantillonnent généralement les potentiels électriques ou les unités uniques moyennées sur toutes les couches du cortex cérébral. Cependant, des recherches récentes ont révélé des résultats intrigants sur les microcircuits laminaires corticaux6. En utilisant le micro-entraînement, les chercheurs peuvent utiliser des sondes laminaires et ajuster finement la profondeur d’enregistrement pour assurer un échantillonnage complet sur toutes les couches.

Ce système peut être construit avec des composants disponibles dans le commerce et est facilement modifié pour différentes techniques expérimentales ou sondes. Les principaux avantages de cette préparation sont la possibilité de changer la position d’enregistrement X-Y avec une précision submillimétrique et de contrôler la profondeur de l’enregistrement dans le cortex. Ce protocole présente des instructions étape par étape pour la construction de l’étape X-Y, des techniques de micro-entraînement et d’enregistrement neurophysiologique.

Protocol

Les procédures expérimentales ont suivi le Guide des National Institutes of Health pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire. Les protocoles pour les procédures expérimentales et comportementales ont été approuvés par le comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université de Rochester. 1. Construction du micro-entraînement contenant l’électrode pour l’enregistrement (Figure 1) <p class=…

Representative Results

Ce protocole décrit comment construire un étage d’électrode X-Y (Figure 1) qui permet le ciblage submillimétrique des sites et maintient un positionnement fiable sur des sessions d’enregistrement distinctes. La fiabilité du positionnement X-Y est illustrée à la figure 6, qui montre que deux sessions d’enregistrement menées à une semaine d’intervalle ont montré un chevauchement de 70,8 % de leurs emplacements RF moyens (figu…

Discussion

Plusieurs méthodes (par exemple, chronique, semi-chronique, aiguë) sont actuellement disponibles pour effectuer des expériences de neurophysiologie chez les primates non humains. Le ouistiti commun pose des défis uniques pour les expériences de neurophysiologie en raison de sa petite taille et de l’absence de gyri comme repères anatomiques. Cela oblige les chercheurs à utiliser des repères neurophysiologiques tels que la rétinotopie et les propriétés d’ajustement des zones d’intérêt pour identifier les…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ce travail a été soutenu par la subvention R01 des National Institutes of Health (NIH) EY030998 (J.F.M., A.B. et S.C.). Cette méthode est basée sur les méthodes développées dans Coop et al. (en cours de révision, 2022 ; https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2022.10.11.511827v2.abstract). Nous tenons à remercier Dina Graf et les membres du laboratoire Mitchell pour leur aide dans les soins et la manipulation des ouistitis.

Materials

1/4 Hp burr drill bit McMaster & Carr Cat# 43035A32 Carbide Bur with 1/4" Shank Diameter, Rounded Cylinder Head, trade Number SC-1, single Cut(https://www.mcmaster.com/products/bur-bits/burs-7/?s=1%2F4%22+bur+bits)
1x1mm Crist Grid Crist Instruments 1 mm x 1 mm Grid https://www.cristinstrument.com/products/implant-intro/grids
91% isopropyl alcohol Medline N/A https://www.medline.com/product/Medline-Isopropyl-Rubbing-Alcohol/Bulk-Alcohol/Z05-PF03807?question=91%25%20isopropyl%20alcohol
Acquisition Board Open-Ephys N/A https://open-ephys.org/acquisition-system/eux9baf6a5s8tid06hk1mw5aafjdz1
Bacitracin Ointment Medline: Cosette Pharmaceuticals Inc N/A https://www.medline.com/product/Bacitracin-Ointment/Antibiotics/Z05-PF86957?question=bacitr
Blunt straight Forceps Medline N/A https://www.medline.com/category/Central-Sterile/Surgical-Instruments/Forceps/Z05-CA16_02_20/products
Bone wax Medline ETHW31G https://www.medline.com/product/Ethicon-Bone-Wax/Bone-Wax/Z05-PF61528?question=bonewax
C&B Metabond Quick Adhesive Cement System Parkell, Inc. SKU: S380 https://www.parkell.com/C-B-Metabond-Quick-Adhesive-Cement-System
Clavamox MWI Animal Health N/A
Contact lens solution Bausch and lomb Various sources available
Custom Printed 3D printed parts ProtoLab https://marmolab.bcs.rochester.edu/resources.html
DB25-G2 25 Pin Male Plug Port Signal Connector Various Sources DB25-G2 25 DB25-G2 25 Pin Male Plug Port Signal 2 Row Terminal Breakout Board Screw Nut Connector
diamond saw attachement for dremmel Dremmel 545 Diamond Wheel https://www.dremel.com/us/en/p/545-26150545ab
Digitizing Head-stages Intan RHD 32channel (Part #C3314) https://intantech.com/RHD_headstages.html?tabSelect=RHD32ch&yPos=120.80
000305175781
EDOT Sigma Aldrich Product # 483028 https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/483028
Helping Hands Harbor Freight N/A https://www.harborfreight.com/helping-hands-60501.html
Hook Electrical Clips Various Sources N/A Hook test Cable wires
Interface Cables (RHD 3-ft (0.9 m) ultra thin SPI cable) Intan  Part #C3213 https://intantech.com/RHD_SPI_cables.html
Lab jack Various Sources N/A https://www.amazon.com/Stainless-Steel-Scissor-Stand-Platform/dp/B07T8FM85H/ref=asc_df_B07T8FM85H/?tag=&linkCode=df0&hvadid=366343
827267&hvpos=&hvnetw=g&hvrand
=2036619536500717246&hvpone
=&hvptwo=&hvqmt=&hvdev=c&hv
dvcmdl=&hvlocint=&hvlocphy=900
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ref=&adgrpid=71496544770&th=1
Meloxicam MWI Animal Health N/A
Micro-drive Crist Instrument 3-NRMD https://www.cristinstrument.com/products/microdrives/miniature-microdrive-3-nrmd
Multi-channel linear silicon arrays with 64 channel connector NeuroNexus A1x32-5mm-25-177 https://www.neuronexus.com/products/electrode-arrays/up-to-10-mm-depth/
NanoZ Omentics Adapter- 32 Channel NeuraLynx ADPT-NZ-N2T-32 https://neuralynx.com/hardware/adpt-nz-n2t-32
NanoZ System Plexon NanoZ Impedence Tester https://plexon.com/products/nanoz-impedance-tester/
Narishige Micromanipulator Narishige Stereotaxic Micromanipulator https://usa.narishige-group.com/
Open-Ephys GUI Open-Ephys https://open-ephys.org/
Polyimide Tubing (OD(in): 0.021 / ID(in) 0.018 ) Various Sources (Chamfr) Chamfr Cat#HPC01895 https://chamfr.com/sellers/teleflex-medical-oem-llc/
Primate Chair Custom made by University of Rochester Machine Shop Designs online https://marmolab.bcs.rochester.edu/resources.html
Poly(sodium 4-styrenesulfonate) (PSS) Sigma Aldrich Product # 243051 https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/243051
RHD USB Interface board Intan RHD2000 Evaluation Board Version 1.0 https://intantech.com/RHD_USB_interface_board.html
Silastic gel World Precision Instuments # KWIK-SIL Low Toxicity Silicone Adhesive ((https://www.wpiinc.com/kwik-sil-low-toxicity-silicone-adhesive)
Slow release buprenorphine Compounding Pharmacy
Stainless steel wire 36 gauge McMaster & Carr Cat# 6517K11 Round Bend-and-Stay Multipurpose 304 Stainless Steel Wire, Matte Finish, 1-Foot Long, 0.008" Diameter
Stanley 6-Piece Precision Screwdriver Set Stanley 1.4mm flathead screwdriver https://www.amazon.com/Stanley-Tools-6-Piece-Precision-Screwdriver/dp/B076621ZGC/ref=sr_1_3?crid=237VSK5FNFP9N&keywords=
stanley+66-052&qid=1672764369&sprefix=
stanley+66-052%2Caps%2C90&sr=8-3
Steel Screws McMaster & Carr type 00 stainless steel hex screws and 1/8” in length https://www.mcmaster.com/
Steel Tube McMaster & Carr 28 gauge stainless steel tubing https://www.mcmaster.com/tubing/multipurpose-304-stainless-steel-6/id~0-055/
Superglue Loctite SuperGlue Gel Control https://www.loctiteproducts.com/en/products/fix/super-glue/loctite_super_gluegelcontrol.html

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check_url/pt/65397?article_type=t

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Citar este artigo
Bucklaew, A., Coop, S. H., Mitchell, J. F. Electrophysiology of Laminar Cortical Activity in the Common Marmoset. J. Vis. Exp. (198), e65397, doi:10.3791/65397 (2023).

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