التصوير المناعي لمصائد العدلات خارج الخلية في الأنسجة البشرية والفأر

تم تصور مصائد العدلات خارج الخلية (NETs) لأول مرة بواسطة Brinkmann et al. كمسار للموت الخلوي يختلف عن موت الخلايا المبرمج والنخر في عام 2004¹. في هذا المسار ، تطلق العدلات الكروماتين غير المكثف في الفضاء خارج الخلية لتشكيل هياكل كبيرة تشبه الويب مغطاة بالبروتينات المضادة للميكروبات التي كانت مخزنة سابقا في الحبيبات أو العصارة الخلوية. تشمل هذه البروتينات المضادة للميكروبات إيلاستاز العدلات (NE) ، والميلوبيروكسيديز (MPO) ، وهيستون سيترولين H3 (H3cit) ، والتي تستخدم عادة للكشف المناعي غير المباشر عن NETs². هذه الطريقة لا تحدد فقط الوجود الكمي لهذه البروتينات. في الواقع ، لديها ميزة الكشف على وجه التحديد عن الهياكل الشبيهة بالشبكة. في الشبكات ، تتركز البروتينات المذكورة مع الحمض النووي خارج الخلية ، والذي يمكن اكتشافه من خلال تداخل الإشارات الفلورية لكل بروتين ملطخ والحمض النووي خارج الخلية. على عكس الإشارات المتداخلة بسبب الحمض النووي خارج الخلية والتوطين المشترك للبروتين في الشبكات ، لا تظهر العدلات السليمة أي توطين مشترك. هنا ، عادة ما يتم تخزين مكونات NET بشكل منفصل في الحبيبات والنوى والسيتوسول³.

منذ اكتشافها لأول مرة ، ثبت أن الشبكات تلعب دورا مركزيا في العديد من الأمراض ، لا سيما تلك التي تنطوي على التهاب. تظهر الشبكات وظائف مضادة للميكروبات أثناء العدوى من خلال محاصرة وقتل مسببات الأمراض خارج الخلية في الدم والأنسجة ^4,5. ومع ذلك ، فقد تم ربط الشبكات أيضا بأمراض المناعة الذاتية والاستجابات المفرطة الالتهاب ، مثل الذئبة الحمامية الجهازية والتهاب المفاصل الروماتيزمي والربو التحسسي^6،7،8. تعزز الشبكات انسداد الأوعية والالتهابات في تصلب الشرايين ، والتصاق الصفائح الدموية ، ومن المتوقع أن تلعب دورا في السرطان^{النقيلي 9}،^10،11. ومع ذلك ، يعتقد أن لها خصائص مضادة للالتهابات عن طريق تقليل مستويات السيتوكين المسببة للالتهابات¹². بينما تكتسب الشبكات اهتماما أكبر بمجال أوسع من البحث ، فإن طريقة الكشف عن NET القوية أمر أساسي للبحث في المستقبل.

على الرغم من أن تصور الشبكات في الأنسجة المختلفة باستخدام التصوير المناعي معقد ويتطلب التخصيص ، بصرف النظر عن المجهر الإلكتروني ، إلا أنه يعد حاليا أحد أشهر الطرق لتصور التفاعلات بين الشبكات والخلايا ويستخدم في الغالب في الأنسجة المدمجة بالبارافين المثبتة بالفورمالين (FFPE)^13,14. ومع ذلك ، فإن مقارنة التصوير NET أمر صعب ، حيث تستخدم المختبرات المختلفة بروتوكولاتها المخصصة. تختلف هذه البروتوكولات في استخدامها للأجسام المضادة أو استرجاع المستضد أو طريقة النفاذية وغالبا ما يتم تحسينها لنوع معين من الأنسجة³،13،15،16،17،^18،19،^20،21،22،²³،24،^{25،26، 27}.

بعد أن نشر Brinkmann et al. أول دراسة منهجية باستخدام التصور المناعي الفلوري للشبكات في أنسجة FFPE ، أردنا تحسين هذا البروتوكول لمجموعة متنوعة من الأنسجة والأنواع¹⁵. بالإضافة إلى ذلك ، لإنشاء بروتوكول تألق مناعي قابل للتطبيق على نطاق واسع ، اختبرنا بروتوكولات معدلة مختلفة من الدراسات التي استخدمت طرق التألق المناعي في أنسجة FFPE للكشف عن الشبكات³،13،¹⁶،¹⁷،¹⁸،¹⁹،²⁰،21،22،²³،^{24،25 ، 26,27}. علاوة على ذلك ، جربنا جسما مضادا جديدا ل H3cit لتلطيخ أكثر تحديدا^{خارج الخلية 28}. نحن نفترض أنه من خلال تكييف بروتوكولات التلوين الحالية بشكل منهجي مع الأنواع والأنسجة المختلفة ، يمكن تحسين التصوير في المختبر ، مما يؤدي إلى تمثيل أفضل للتفاعل بين العدلات والشبكات محليا ومنهجيا.