خمسة عشر عاما من إدارة التنكس البقعي المرتبط بالعمر الوعائي الجديد (AMD) مع العلاج المضاد ل VEGF تحت إشراف التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) قد قدمت رؤى جديدة حول تسلسل التقدم والبنية الدقيقة لهذا السبب السائد لفقدان البصر. الاعتراف الرئيسي هو أن AMD هو مرض ثلاثي الأبعاد يشمل شبكية العين الحسية العصبية ، وظهارة صبغة الشبكية (RPE) ، والمشيمية. نتيجة لتصوير OCT لمرضى التجربة وعيون زملائهم من مرضى العيادة المعالجين ، تم التعرف الآن على ميزات علم الأمراض التي تتجاوز تلك التي شوهدت من خلال التصوير الفوتوغرافي الملون لقاع العين ، وهو معيار سريري لعقود. وتشمل هذه الأوعية الدموية داخل الشبكية (النوع 3 الأوعية الدموية الحديثة^{البقعية 1} ، الانتشار الوعائي سابقا) ، رواسب الدروسينويد تحت الشبكية (SDDs ، وتسمى أيضا الشبكية الكاذبة)² ، مسارات متعددة لمصير RPE³،^{4 ،} وخلايا مولر الدبقية بشكل مكثف في ضمور ^5,6.

الأنظمة النموذجية التي تفتقر إلى البقعة (الخلايا والحيوانات) تعيد إنشاء بعض شرائح هذا المرض^{المعقد 7،8،9}. يمكن أن يأتي المزيد من النجاح في تخفيف عبء AMD من اكتشاف واستكشاف علم الأمراض الأساسي في عيون الإنسان ، وفهم التركيب الخلوي الفريد للبقعة ، تليها الترجمة إلى أنظمة نموذجية. يصور هذا التقرير تعاونا لمدة ثلاثة عقود بين مختبر أبحاث أكاديمية وبنك عيون. أهداف طرق توصيف الأنسجة الموصوفة هنا ذات شقين: 1) إبلاغ تكنولوجيا التشخيص المتطورة من خلال إظهار أساس مظهر قاع العين ومصادر إشارة التصوير بالفحص المجهري ، و 2) تصنيف عينات AMD لتقنيات الاكتشاف الجزيئي المستهدفة (الكيمياء الهيستولوجية المناعية) وغير المستهدفة (قياس الطيف الكتلي للتصوير ، IMS ، والنسخ المكاني) التي تحافظ على النقرة المخروطية فقط وشبه القضيب الغني و perifovea. يمكن لمثل هذه الدراسات تسريع الترجمة إلى OCT السريري ، حيث يمكن إجراء تسلسل تقدم ومتابعة طولية من خلال تتبع العين. هذه التقنية ، المصممة لمراقبة آثار العلاج ، تسجل الفحوصات من زيارة عيادة إلى أخرى باستخدام أوعية الشبكية. يمكن أن يوفر ربط OCT الذي يتم تتبعه بالعين بالنتائج المختبرية التي تم الحصول عليها باستخدام التقنيات المدمرة مستوى جديدا من القيمة النذير للنتائج الجزيئية.

في عام 1993 ، التقط مختبر الأبحاث صورا ملونة لقاع ما بعد الوفاة في الفيلم¹⁰. استلهم هذا الجهد من الفحص المجهري الضوئي الرائع والأنسجة لشبكية العين المحيطية البشرية بواسطة Foos وزملائه¹¹،12،¹³ والارتباطات السريرية الشاملة AMD بواسطة Sarks et ^al.14،15. ابتداء من عام 2009 ، تم اعتماد التصوير متعدد الوسائط خارج الجسم الحي (MMI) الراسخ على المجال الطيفي OCT. كان هذا الانتقال مستوحى من الجهود المماثلة للآخرين 16,17 وخاصة من خلال إدراك أن الكثير من البنية التحتية التي وصفها Sarks كانت متاحة في ثلاثة أبعاد ، بمرور الوقت ، في العيادة ^18,19. كان الهدف هو الحصول على عيون ذات بقع متصلة في إطار زمني معقول لإجراء دراسات جيدة للأنماط الظاهرية على المستوى الخلوي في شبكية العين ، RPE ، والمشيمية. كان القصد من ذلك هو تجاوز إحصائيات “لكل عين” إلى “لكل نوع آفة” ، وهو معيار يتأثر بمفاهيم “اللويحات الضعيفة” من أمراض القلب والأوعية الدموية^20,21.

يعكس البروتوكول الوارد في هذا التقرير تجربة ما يقرب من 400 زوج من عيون المتبرعين المنضمة في عدة تيارات. في 2011-2014 ، تم إنشاء موقع Project MACULA الخاص بعلم أمراض الأنسجة AMD ، والذي يتضمن سمك الطبقة والتعليقات التوضيحية من 142 عينة مؤرشفة. تم الحفاظ على هذه العيون من 1996-2012 في مثبت جلوتارالدهيد-بارافورمالدهيد لأنسجة راتنجات الايبوكسي عالية الدقة والمجهر الإلكتروني. تم تصوير جميع الفوندي بالألوان عند استلامها وإعادة تصويرها بواسطة OCT قبل علم الأنسجة مباشرة. تم استخدام حامل العين المصمم أصلا لدراسات العصب البصري²² لاستيعاب لكمة أنسجة كاملة السماكة بقطر 8 مم تتمحور حول النقرة. تم تحميل OCT B-scans من خلال مركز foveal وموقع 2 مم متفوق ، يتوافق مع الأنسجة على نفس المستويات ، على موقع الويب ، بالإضافة إلى صورة قاع العين الملونة. تم تحديد اختيار طائرات OCT من خلال بروز علم الأمراض AMD تحت fovea²³ وبروز SDDs في المناطق الغنية بالقضبان المتفوقة على النقرة^24,25.

ابتداء من عام 2013 ، كانت العيون التي تم تصويرها باستخدام MMI المرتبط ب OCT خلال الحياة متاحة للارتباطات السريرية المرضية المباشرة. معظم (7 من 10 متبرعين) شملت المرضى في ممارسة إحالة شبكية العين (المؤلف: K.B.F.) ، والتي قدمت سجلا توجيهيا متقدما للمرضى المهتمين بالتبرع بأعينهم بعد الوفاة لأغراض البحث. تم استعادة العيون والحفاظ عليها من قبل بنك العيون المحلي ، ونقلها إلى المختبر ، وإعدادها بنفس طريقة عيون مشروع البقعة. تمت قراءة مجلدات OCT السريرية قبل الوفاة بسلاسة في المختبر ، وبالتالي مواءمة ميزات علم الأمراض التي شوهدت خلال الحياة مع الميزات التي شوهدت تحت المجهر²⁶.

ابتداء من عام 2014 ، بدأ جمع العين المرتقب عن طريق فحص AMD في عيون المتبرعين دون تاريخ سريري ولكن تم الحفاظ عليه خلال فترة زمنية محددة (6 ساعات). لهذا الغرض ، تم تعديل حامل العين لاستيعاب الكرة الأرضية بأكملها. هذا قلل من فرصة الانفصال حول الحواف المقطوعة لكمة 8 مم المستخدمة سابقا. تم الحفاظ على العيون في 4٪ بارافورمالدهيد مخزن للكيمياء المناعية ونقلها إلى 1٪ في اليوم التالي للتخزين طويل الأجل. في 2016-2017 (قبل الجائحة) ، تم استرداد 184 عينا من 90 متبرعا. تم إنشاء الإحصاءات والصور الواردة في هذا التقرير من هذه السلسلة. خلال حقبة الوباء (عمليات الإغلاق لعام 2020 وما بعدها) ، استمرت المجموعات المحتملة لتعاون النسخ و IMS بوتيرة منخفضة ، باستخدام أساليب 2014 بشكل أساسي.

تتوفر طرق أخرى لتقييم عين المتبرع. يعتمد نظام مينيسوتا للدرجات (MGS) ^27,28 على نظام AREDS السريري لتصوير قاع العين^{الملون 29}. تشمل قيود هذه الطريقة الجمع بين AMD الضموري والأوعية الدموية الحديثة في مرحلة واحدة من “AMD المتأخر”. علاوة على ذلك ، يستلزم MGS إزالة شبكية العين الحسية العصبية قبل التوثيق الضوئي ل RPE choroid. هذه الخطوة تزيح SDDs بدرجات متفاوتة^30,31 وتزيل المراسلات المكانية لشبكية العين الخارجية ونظام دعمها. وبالتالي ، قد يتم إعاقة الجهود المبذولة لربط الطلب الأيضي والإشارات من شبكية العين إلى علم الأمراض في RPE-choroid. نفذ نظام يوتا MMI باستخدام التصوير الفوتوغرافي الملون خارج الجسم الحي و OCT لتصنيف العيون المخصصة للتشريح إلى مناطق لاستخراج الحمض النووي الريبي^{والبروتين 32}. على الرغم من أنها مفضلة على قلع فنجان العين بالكامل ، إلا أن المنطقة التي يبلغ قطرها 3 مم هي الأكثر عرضة لخطر تقدم AMD^33,34 تمثل 25٪ فقط من لكمة محورها النقرة بقطر 6 مم. وبالتالي ، فإن التقنيات التي يمكن أن تحدد النتائج في إشارة إلى النقرة ، مثل التقسيم التسلسلي للكيمياء المناعية ، مفيدة.