Den overlegne colliculus (SC) er et vigtigt visuelt center hos alle hvirveldyr. Hos pattedyr modtager den direkte input fra nethinden og den visuelle cortex¹. Mens optisk optagelse er blevet anvendt i vid udstrækning på cortex 2,3,4,5, hindres dens anvendelse i SC af dårlig optisk adgang 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17 ,^18,19. Målet med denne protokol er at give detaljer om to komplementære metoder til optisk optagelse af den neurale aktivitet i SC.

SC er placeret under cortex og tværgående sinus, hvilket begrænser optisk adgang til de kollikulære neuroner. En metode til at overvinde denne begrænsning er at aspirere den overliggende cortex og udsætte den forreste laterale SC 7,9,10,13,14,19. Men fordi SC modtager kortikale input, kan en sådan operation påvirke, hvordan SC-neuronerne reagerer på visuelle stimuli. For at overvinde denne begrænsning beskriver vi her en alternativ protokol til at afbilde det overfladiske lag af den bageste mediale SC med et siliciumstik, mens cortex forbliver intakt ^8,11. Specifikt for at opnå enkeltcelleopløsning anvendte vi to-fotonmikroskopi til billedcalciumresponser i den bageste mediale SC hos vildtypemus. For at opnå bred dækning anvendte vi desuden vidvinkelmikroskopi til at afbilde hele SC af en mutant mus, hvis bageste cortex ikke har udviklet²⁰.

De to metoder, der er beskrevet i denne protokol, supplerer hinanden. To-foton calciumbilleddannelse uden ablering af cortex er egnet til registrering af neural aktivitet ved enkeltcelleopløsning med intakte kortikale indgange. Wide-field calciumbilleddannelse er velegnet til registrering af neural aktivitet i hele SC, mens den rumlige opløsning ofres.