Kalcitoningenrelaterad peptid (CGRP) är en 37-aminosyraneuropeptid som finns i neuronala fibrer med perivaskulär lokalisering såväl som icke-neuronala vävnader. De två formerna av CGRP, α- och β-CGRP, delar mer än 90% homologi och delar fysiologiska funktioner; αCGRP finns dock i centrala och perifera nervsystemet, medan βCGRP finns i det enteriska nervsystemet ^1,2. Vid nociceptoraktivering och kalciumberoende exocytos frisätts CGRP från nervceller, vilket inducerar steril neurogen inflammation som involverar arteriell vasodilatation och plasmaproteinextravasering 3,4,5,6,7. Härifrån visas CGRP i de postkapillära kärlen och kan vara en biomarkör för sjukdomar som orsakar afferent nociceptiv aktivering, såsom migrän 8,9,10,11. Observera att CGRP också har varit inblandad i COVID-19 genom sin roll i angiogenes och immunmodulering, och kan förutsäga ogynnsam sjukdomsutveckling^12,13. Således kan ett protokoll för noggrann kvantifiering av CGRP i human plasma ha ett brett värde.

Mest uppmärksamhet har kanske ägnats åt CGRP:s roll vid migrän. Baserat på prekliniska och kliniska studier har CGRP presenterats som en möjlig biomarkör för migrän och som ett mål för behandling 3,4,5,6,7,8,9,10. Vissa studier har funnit en förhöjning av CGRP i kohorter med episodisk migrän i förhållande till kontrolldeltagare^10,14,15. Framgången för CGRP-hämmare i kliniska prövningar för behandling av migrän verkar innebära förhöjd CGRP som en orsaksfaktor för migränhuvudvärk. Men inte alla utredare har bekräftat dessa resultat^16,17,18,19. Dessutom har CGRP: s roll i icke-huvudvärksymtom på migrän ännu inte klarlagts; det nuvarande arbetet motiverades av en önskan att förstå CGRP: s roll i vestibulära symtom på migrän.

Inkonsekventa CGRP-immunanalysdata i litteraturen kan bero på flera orsaker. För det första är halveringstiden för CGRP i perifer vaskulatur 6,9 min 20, på grund av aktiviteten hos serinproteaser 21, insulinnedbrytande enzymer och andra metalloproteaser 22, neutrala endopeptidaser 23 och endotelinkonverterande enzym-1 ²⁴. För det andra beskrivs inte de variabla tekniska detaljerna för de immunanalyser som används för att kvantifiera CGRP fullständigt i sådana studier. Slutligen komplicerar bristen på standardisering av immunanalysmetoden bilden ännu mer.

Denna artikel beskriver ett modifierat enzymkopplat immunosorbentanalysprotokoll (ELISA) som möjliggör rening och noggrann kvantifiering av α- och βCGRP i human plasma. Kitets antikroppar är inte korsreaktiva med amylin, kalcitonin eller substans P. Detta protokoll har genomgått de nödvändiga valideringsexperimenten, såsom spik och återvinning och linjäritet av utspädning, vars data presenteras här. Ett sådant CGRP ELISA-protokoll som har genomgått validering har inte tidigare beskrivits fullständigt i litteraturen. Detta protokoll kan användas för att kvantifiera CGRP i human plasma i samband med migrän såväl som kardiologisk^2,25, dermatologisk 26, obstetrisk 27, reumatologisk^28,29, muskuloskeletal 30,31, endokrin 32,33 och virussjukdomar ^12,13 där CGRP har varit inblandad.