Kalsitonin-genrelatert peptid (CGRP) er et 37-aminosyre nevropeptid som er tilstede i nevronfibre med perivaskulær lokalisering samt ikke-nevronvev. De to formene for CGRP, α- og β-CGRP, deler mer enn 90 % homologi og deler fysiologiske funksjoner; αCGRP finnes imidlertid i det sentrale og perifere nervesystemet, mens βCGRP finnes i det enteriske nervesystemet ^1,2. Ved nociceptoraktivering og kalsiumavhengig eksocytose frigjøres CGRP fra nevroner, og induserer steril nevrogen inflammasjon som involverer arteriell vasodilatasjon og ekstravasasjon^av plasmaprotein 3,4,5,6,7. Herfra opptrer CGRP i postkapillærkarene og kan være en biomarkør for sykdommer som gir afferente nociseptiv aktivering, som migrene 8,9,10,11. Det er verdt å merke seg at CGRP også har vært involvert i COVID-19 gjennom sin rolle i angiogenese og immunmodulering, og kan forutsi ugunstig sykdomsutvikling^12,13. Dermed kan en protokoll for nøyaktig kvantifisering av CGRP i humant plasma ha en bred verdi.

Mest oppmerksomhet har man kanskje fått om CGRPs rolle ved migrene. Basert på prekliniske og kliniske studier har CGRP blitt presentert som en mulig biomarkør for migrene og som et mål for behandling 3,4,5,6,7,8,9,10. Noen studier har funnet en økning av CGRP i kohorter med episodisk migrene i forhold til kontrolldeltakere^10,14,15. Suksessen til CGRP-hemmere i kliniske studier for migrenehodepinebehandling ser ut til å implisere forhøyet CGRP som årsaksfaktor for migrenehodepine. Imidlertid har ikke alle etterforskere bekreftet disse resultatene^16,17,18,19. Videre er CGRPs rolle ved ikke-hodepinesymptomer ved migrene ennå ikke klarlagt; det nåværende arbeidet var motivert av et ønske om å forstå CGRPs rolle i vestibulære symptomer på migrene.

Inkonsistente CGRP-immunoassay-data i litteraturen kan skyldes flere årsaker. For det første er halveringstiden for CGRP i perifer vaskulatur 6,9 min 20, på grunn av aktiviteten til serinproteaser 21, insulinnedbrytende enzymer og andre metalloproteaser 22, nøytrale endopeptidaser 23 og endotelinkonverterende enzym-1 ²⁴. For det andre er de variable tekniske detaljene for immunoassays som brukes til å kvantifisere CGRP ikke fullstendig beskrevet i slike studier. Endelig kompliserer mangelen på standardisering av immunoassay-metoden bildet enda mer.

Denne artikkelen beskriver en modifisert enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA)-protokoll som muliggjør rensing og nøyaktig kvantifisering av α- og βCGRP i humant plasma. Settets antistoffer er ikke kryssreaktive med amylin, kalsitonin eller substans P. Denne protokollen har gjennomgått de nødvendige valideringseksperimentene, for eksempel spike og utvinning og linearitet av fortynning, dataene som presenteres her. En slik CGRP ELISA-protokoll som har gjennomgått validering er ikke tidligere fullstendig beskrevet i litteraturen. Denne protokollen kan brukes til å kvantifisere CGRP i humant plasma i sammenheng med migrene samt kardiologiske^2,25, dermatologiske 26, obstetriske 27, revmatologiske^28,29, muskel– og skjelettlidelser 30,31, endokrine 32,33 og virussykdommer ^12,13 der CGRP har vært involvert.