Il peptide correlato al gene della calcitonina (CGRP) è un neuropeptide di 37 aminoacidi presente nelle fibre neuronali con localizzazione perivascolare e nei tessuti non neuronali. Le due forme di CGRP, α- e β-CGRP, condividono più del 90% di omologia e condividono funzioni fisiologiche; tuttavia, αCGRP si trova nel sistema nervoso centrale e periferico, mentre βCGRP si trova nel sistema nervoso enterico ^1,2. Dopo l’attivazione dei nocicettori e l’esocitosi calcio-dipendente, CGRP viene rilasciato dai neuroni, inducendo un’infiammazione neurogena sterile che coinvolge vasodilatazione arteriosa e stravaso di proteine plasmatiche 3,4,5,6,7. Da qui, CGRP appare nei vasi postcapillari e può essere un biomarcatore per le malattie che causano l’attivazione nocicettiva afferente, come l’emicrania 8,9,10,11. Da notare che la CGRP è stata anche implicata nel COVID-19 attraverso il suo ruolo nell’angiogenesi e nella modulazione immunitaria e può prevedere un’evoluzione sfavorevole della malattia^12,13. Pertanto, un protocollo per la quantificazione accurata del CGRP nel plasma umano potrebbe avere un valore ampio.

La maggiore attenzione è stata forse data al ruolo di CGRP nell’emicrania. Sulla base di studi preclinici e clinici, CGRP è stato proposto come un possibile biomarcatore per l’emicrania e come bersaglio per il trattamento 3,4,5,6,7,8,9,10. Alcuni studi hanno trovato un aumento di CGRP in coorti con emicrania episodica rispetto ai partecipanti di controllo^10,14,15. Il successo degli inibitori CGRP negli studi clinici per il trattamento dell’emicrania sembra implicare un elevato CGRP come fattore causale per l’emicrania. Tuttavia, non tutti gli investigatori hanno confermato questi risultati^16,17,18,19. Inoltre, il ruolo di CGRP nei sintomi non cefalei dell’emicrania deve ancora essere chiarito; il lavoro attuale è stato motivato dal desiderio di comprendere il ruolo del CGRP nei sintomi vestibolari dell’emicrania.

Dati immunologici CGRP incoerenti in letteratura potrebbero essere dovuti a diversi motivi. In primo luogo, l’emivita di CGRP nel sistema vascolare periferico è di 6,9 min²⁰, a causa dell’attività delle proteasi serina 21, degli enzimi che degradano l’insulina e di altre metalloproteasi 22, delle endopeptidasi neutre 23 e dell’enzima di conversione dell’endotelina-1 ²⁴. In secondo luogo, i dettagli tecnici variabili dei saggi immunologici utilizzati per quantificare CGRP non sono completamente descritti in tali studi. Infine, la mancanza di standardizzazione della metodologia di dosaggio immunologico complica ulteriormente il quadro.

Questo articolo descrive un protocollo ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) modificato che consente la purificazione e la quantificazione accurata di α e βCGRP nel plasma umano. Gli anticorpi del kit non sono cross-reattivi con amilina, calcitonina o sostanza P. Questo protocollo è stato sottoposto agli esperimenti di validazione necessari, come spike e recupero e linearità di diluizione, i cui dati sono presentati qui. Tale protocollo ELISA CGRP sottoposto a validazione non è stato precedentemente completamente descritto in letteratura. Questo protocollo può essere utilizzato per quantificare CGRP nel plasma umano nel contesto dell’emicrania e cardiologica^2,25, dermatologica 26, ostetrica 27, reumatologica^28,29, muscoloscheletrica 30,31, endocrina 32,33 e malattie virali ^12,13 in cui CGRP è stato implicato.