Calcitonin genrelateret peptid (CGRP) er et 37-aminosyre neuropeptid, der er til stede i neuronale fibre med perivaskulær lokalisering såvel som ikke-neuronalt væv. De to former for CGRP, α- og β-CGRP, deler mere end 90% homologi og deler fysiologiske funktioner; aCGRP findes dog i det centrale og perifere nervesystem, mens βCGRP findes i det enteriske nervesystem ^1,2. Ved nociceptoraktivering og calciumafhængig exocytose frigives CGRP fra neuroner, hvilket inducerer steril neurogen inflammation, der involverer arteriel vasodilatation og plasmaproteinekstravasation 3,4,5,6,7. Herfra vises CGRP i postkapillærkarrene og kan være en biomarkør for sygdomme, der forårsager afferent nociceptiv aktivering, såsom migræne 8,9,10,11. Det skal bemærkes, at CGRP også har været impliceret i COVID-19 gennem sin rolle i angiogenese og immunmodulering og kan forudsige ugunstig sygdomsudvikling^12,13. Således kunne en protokol til nøjagtig kvantificering af CGRP i humant plasma have en bred værdi.

Den største opmærksomhed har måske været givet til CGRPs rolle i migræne. Baseret på prækliniske og kliniske studier er CGRP blevet fremsat som en mulig biomarkør for migræne og som et mål for behandling 3,4,5,6,7,8,9,10. Nogle undersøgelser har fundet en forhøjelse af CGRP i kohorter med episodisk migræne i forhold til kontroldeltagere^10,14,15. Succesen med CGRP-hæmmere i kliniske forsøg med migrænehovedpine synes at implicere forhøjet CGRP som en årsagsfaktor for migrænehovedpine. Imidlertid har ikke alle efterforskere bekræftet disse resultater^16,17,18,19. Desuden er CGRP’s rolle i ikke-hovedpine symptomer på migræne endnu ikke belyst; det nuværende arbejde var motiveret af et ønske om at forstå CGRP’s rolle i vestibulære symptomer på migræne.

Inkonsistente CGRP-immunoassaydata i litteraturen kan skyldes flere årsager. For det første er halveringstiden for CGRP i den perifere vaskulatur 6,9 min 20 på grund af aktiviteten af serinproteaser 21, insulinnedbrydende enzymer og andre metalloproteases 22, neutrale endopeptidaser 23 og endothelinkonverterende enzym-1 ²⁴. For det andet er de variable tekniske detaljer i de immunoassays, der anvendes til kvantificering af CGRP, ikke fuldt ud beskrevet i sådanne undersøgelser. Endelig komplicerer manglen på standardisering af immunoassaymetoden billedet endnu mere.

Denne artikel beskriver en modificeret enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) protokol, der muliggør oprensning og nøjagtig kvantificering af α- og βCGRP i humant plasma. Sættets antistoffer er ikke krydsreaktive med amylin, calcitonin eller stof P. Denne protokol har gennemgået de nødvendige valideringseksperimenter, såsom spike og genopretning og linearitet af fortynding, hvis data præsenteres her. En sådan CGRP ELISA-protokol, der har gennemgået validering, er ikke tidligere blevet beskrevet fuldt ud i litteraturen. Denne protokol kan bruges til at kvantificere CGRP i humant plasma i forbindelse med migræne samt kardiologisk^2,25, dermatologisk 26, obstetrisk 27, reumatologisk^28,29, muskuloskeletale 30,31, endokrine 32,33 og virussygdomme ^12,13, hvor CGRP har været impliceret.