Il protocollo dimostra un metodo conveniente per produrre un flusso oscillatorio armonico da 10-1000 Hz in microcanali. Questo viene eseguito interfacciando un diaframma dell’altoparlante controllato dal computer al microcanale in modo modulare.
La tecnologia microfluidica è diventata uno strumento standard nei laboratori chimici e biologici sia per l’analisi che per la sintesi. L’iniezione di campioni liquidi, come reagenti chimici e colture cellulari, viene effettuata prevalentemente attraverso flussi costanti che sono tipicamente guidati da pompe a siringa, gravità o forze capillari. L’uso di flussi oscillatori complementari è raramente considerato nelle applicazioni, nonostante i suoi numerosi vantaggi, come recentemente dimostrato in letteratura. La significativa barriera tecnica all’implementazione di flussi oscillatori nei microcanali è probabilmente responsabile della mancanza della sua adozione diffusa. Le pompe a siringa commerciali avanzate in grado di produrre flusso oscillatorio, sono spesso più costose e funzionano solo per frequenze inferiori a 1 Hz. Qui viene dimostrato l’assemblaggio e il funzionamento di un apparato a basso costo, basato su altoparlanti di tipo plug-and-play, che genera flusso oscillatorio in microcanali. Flussi oscillatori armonici ad alta fedeltà con frequenze comprese tra 10 e 1000 Hz possono essere raggiunti insieme al controllo indipendente dell’ampiezza. Ampiezze che vanno da 10-600 μm possono essere raggiunte in tutta la gamma di funzionamento, comprese le ampiezze > 1 mm alla frequenza di risonanza, in un tipico microcanale. Sebbene la frequenza di oscillazione sia determinata dall’altoparlante, illustriamo che l’ampiezza dell’oscillazione è sensibile alle proprietà del fluido e alla geometria del canale. In particolare, l’ampiezza dell’oscillazione diminuisce con l’aumentare della lunghezza del circuito del canale e della viscosità del liquido e, al contrario, l’ampiezza aumenta con l’aumentare dello spessore e della lunghezza del tubo dell’altoparlante. Inoltre, l’apparecchio non richiede caratteristiche precedenti per essere progettato sul microcanale ed è facilmente rimovibile. Può essere utilizzato contemporaneamente a un flusso costante creato da una pompa a siringa per generare flussi pulsatili.
Il controllo preciso della portata del liquido nei microcanali è fondamentale per le applicazioni lab-on-a-chip come la produzione di goccioline e l’incapsulamento1, la miscelazione 2,3 e lo smistamento e la manipolazione delle particelle sospese 4,5,6,7. Il metodo prevalentemente utilizzato per il controllo del flusso è una pompa a siringa che produce flussi costanti altamente controllati che erogano un volume fisso di liquido o una portata volumetrica fissa, spesso limitata a un flusso interamente unidirezionale. Le strategie alternative per la produzione di flusso unidirezionale includono l’uso della testa gravitazionale8, delle forze capillari9 o del flusso elettro-osmotico10. Le pompe a siringa programmabili consentono un controllo bidirezionale dipendente dal tempo delle portate e dei volumi erogati, ma sono limitate a tempi di risposta superiori a 1 s a causa dell’inerzia meccanica della pompa a siringa.
Il controllo del flusso a scale temporali più brevi sblocca una pletoradi 6,11,12,13,14,15 di possibilità altrimenti inaccessibili a causa di cambiamenti qualitativi nella fisica del flusso. Il mezzo più pratico per sfruttare questa variegata fisica del flusso è attraverso onde acustiche o flussi oscillatori con periodi di tempo che vanno da 10-1– 10-9 s o 101 -109 Hz. L’estremità superiore di questa gamma di frequenze è accessibile utilizzando dispositivi a onda acustica di massa (BAW; 100 kHz-10 MHz) e onde acustiche di superficie (SAW; 10 MHz-1 GHz). In un tipico dispositivo BAW, l’intero substrato e la colonna di fluido vengono vibrati applicando un segnale di tensione attraverso un piezoelettrico legato. Ciò consente rendimenti relativamente elevati, ma si traduce anche in riscaldamento ad ampiezze più elevate. Nei dispositivi SAW, tuttavia, l’interfaccia solido-liquido viene oscillata applicando tensione a una coppia di elettrodi interdigitati modellati su un substrato piezoelettrico. A causa delle lunghezze d’onda molto corte (1 μm-100 μm) particelle piccole come 300 nm possono essere manipolate con precisione dall’onda di pressione generata nei dispositivi SAW. Nonostante la capacità di manipolare piccole particelle, i metodi SAW sono limitati alla manipolazione delle particelle locali poiché l’onda si attenua rapidamente con la distanza dalla sorgente.
Nella gamma di frequenza 1-100 kHz, i flussi oscillatori sono solitamente generati utilizzando piezo-elementi che sono legati a un microcanale di polidimetilsilossano (PDMS) sopra una cavità progettata16,17. La membrana PDMS sopra la cavità modellata si comporta come una membrana vibrante o un tamburo che pressurizza il fluido all’interno del canale. A questa gamma di frequenze, la lunghezza d’onda è maggiore della dimensione del canale, ma le ampiezze della velocità di oscillazione sono piccole. Il fenomeno più utile in questo regime di frequenza è la generazione di flussi di flusso acustico/viscoso, che sono flussi costanti rettificati causati dalla non linearità inerente al flusso di liquidi con inerzia18. I flussi di flusso costante si manifestano tipicamente come vortici controrotanti ad alta velocità in prossimità di ostacoli, spigoli vivi o microbolle. Questi vortici sono utili per miscelare19,20 e separare particelle di dimensioni 10 μm dal flussodi flusso 21.
Per le frequenze nell’intervallo 10-1000 Hz, sia la velocità della componente oscillatoria che il suo flusso viscoso costante associato sono considerevoli in grandezza e utili. Forti flussi oscillatori in questa gamma di frequenze possono essere utilizzati per la messa a fuoco inerziale22, facilitano la generazione di goccioline23 e possono generare condizioni di flusso (numeri di Womersley) che imitano il flusso sanguigno per studi in vitro . D’altra parte, i flussi di streaming sono utili per la miscelazione, l’intrappolamento delle particelle e la manipolazione. Il flusso oscillatorio in questa gamma di frequenze può anche essere realizzato utilizzando un elemento piezoelettrico legato al dispositivo come descritto sopra23. Un ostacolo significativo all’implementazione di flussi oscillatori attraverso un elemento piezoelettrico legato è che richiede che le caratteristiche siano progettate in anticipo. Inoltre, gli elementi degli altoparlanti incollati non sono staccabili e un nuovo elemento deve essere incollato a ciascun dispositivo24. Tuttavia, tali dispositivi presentano il vantaggio di essere compatti. Un metodo alternativo consiste nell’utilizzare una valvola a relè elettromeccanica20. Queste valvole richiedono sorgenti di pressione pneumatiche e software di controllo personalizzato per il funzionamento e quindi aumentano la barriera tecnica al collaudo e all’implementazione. Tuttavia, tali dispositivi consentono l’applicazione dell’ampiezza e della frequenza di pressione impostate.
In questo articolo, viene descritta la costruzione, il funzionamento e la caratterizzazione di un metodo user-friendly per generare flussi oscillatori nella gamma di frequenze di 10-1000 Hz nei microcanali. Il metodo offre numerosi vantaggi come l’assemblaggio economico, la facilità d’uso e la predisposizione per l’interfaccia con canali e accessori microfluidici standard come pompe a siringa e tubi. Inoltre, rispetto ai precedenti approcci simili25, il metodo offre all’utente un controllo selettivo e indipendente delle frequenze e delle ampiezze di oscillazione, compresa la modulazione tra forme d’onda sinusoidali e non sinusoidali. Queste caratteristiche consentono agli utenti di implementare facilmente flussi oscillatori e, quindi, facilitano l’adozione diffusa in una vasta gamma di tecnologie e applicazioni microfluidiche attualmente esistenti nei campi della biologia e della chimica.
Abbiamo dimostrato l’assemblaggio (vedi protocolli critici 3 e 4) e il funzionamento (vedi protocolli critici passaggi 5 e 6) di un apparato esterno basato su altoparlanti per la generazione di flusso oscillatorio con frequenze comprese tra 10 e 1000 Hz in dispositivi microfluidici. Il tracciamento delle particelle traccianti sospese è necessario per determinare la fedeltà del moto armonico e per calibrare l’intervallo di ampiezze di oscillazione ottenibili nell’intervallo delle frequenze operative. La curva ampiezza-f…
The authors have nothing to disclose.
Vorremmo riconoscere il supporto fornito e le strutture fornite dal Dipartimento di Scienze Meccaniche e Ingegneria Rapid Prototyping Lab presso l’Università dell’Illinois per consentire questo lavoro.
Oscillatory Driver Assembly | |||
Alligator-to-pin wire | Adafruit | 3255 | Small alligator clip to male jumper wire (12) |
Aux cable | Adafruit | 2698 | 3.5 mm Male/Male stereo cable 1 m |
Controller chip | Damgoo | TPA3116 | 50w+50w 2 channel audio amplifier (bluetooth and AUX) |
DC adapter | Adafruit | 798 | 12 V DC 1A regulated switching power adapter |
Micro-pipette tip | VWR Signature | 37001-532 | 200 ul micropipette tip |
Silicone sealant | Loctite | 908570 | Clear silicone waterproof sealant (80 ml) |
Speaker | Drok | 6843996 | 4.5 inch 4 Ohm 40 W speaker |
Speaker mount | 3D printed from 'speakermount.stl' in supplementary files | ||
Speaker-to-tube adapter | 3D printed from 'speaketubeadapter.stl' in supplementary files | ||
Microchannel Manufacture | |||
Biopsy punch | Miltex | 15110 | Biopsy punch with plunger (1 – 4 mm) |
Degasser | |||
Disposable cup | |||
Disposable spoon | |||
Glass Slides | VWR Signature | 16004-430 | 3" x 1" pre clean 1 mm thick |
Mold | Si – SU-8 or 3D printed | ||
Oven | Fischer Scientific | Isotemp | |
PDMS resin and cross-linker | Dow Chemical | 4019862 | Sylgard 184 PDMS resin and crosslinker (500 g) |
Polyethylene tubing | Becton Dickinson Intramedic | 427440 | Polyethylene tubing (PE 60 – PE 200) |
Razor blades | VWR | 55411-050 | Single edge industrial razor blades |
RF plasma generator | Electro-Technic Products | BD – 20 | High frequency generator |
Silicone Mold Release | CRC | 03301 | Food Grade Silicon Mold release (16 oz) |
Observation and Characterization | |||
Camera | Edgertronic | SC2+ | |
Lens | Nikon | Plan Fluor 10x | |
Microscope | Nikon | Ti Eclipse manual stage | |
Needles | Becton Dickinson | 305175 | PrecisionGlide 20G |
Syringe | Becton Dickinson | 1180100555 | Monoject 1 ml |
Syringe pump | Harvard Apparatus | Dual syringe programmable syringe pump | |
Tracer Particles | Spherotech | PP-10-10 | Polystyrene tracer particles 1 um |