Början av virusplackanalyser går tillbaka till de första upptäckterna av virus på 1890-talet1. Tobaksmosaikvirus isolerades först och fördes vidare tobaksblad, där enskilda infektionsfläckar kunde erkännas och kvantifieras som härrörande från en enda, levande ^virusenhet2, som senare identifierades som en ^virion2. Senare nyskapande studier med bakterier och bakteriofager fulländade de tekniker som användes för att plackera dessa virus, inklusive bakterier i mitten av loggfasen av tillväxt, seriell utspädning av bakteriofagprover och toppagar med efterföljande visualisering av bokstavliga hål (namngivna plack) i bakteriegräsmattan3.

Plaquing av djurvirus släpade efter den spännande forskning som bedrevs med bakteriofager, främst för att de metoder som krävdes för att odla däggdjursceller i odling inte utvecklades förrän på 1940-talet4. Tillkomsten av växande murina celler i frånvaro av hela ^{värdorganismen4} skapade emellertid en ny era i förmågan att odla och räkna virus. Sådant arbete utvidgades för förökning och kvantitation av Western Equine Encephalomyelitis virus i kycklingceller och poliovirus i mänskliga ^celler5,6. I takt med att sfären av odlingsbara däggdjursceller expanderade gav mängden olika värdceller för olika virusinfektioner världen ett ymnighetshorn av möjligheter att studera alla slags ^virus7. Detta inkluderade förökning och kvantifiering av humana herpesvirus, särskilt herpes simplexvirus-1 (HSV-1) och -2 (HSV-2), som orsakar mukokutana ^lesioner8. Viktigt är att alla plackanalyser är beroende av förekomsten av levande virioner, som kan komma in i värdceller på ett receptormedierat sätt i ett ^prov9. Oavsett allestädes närvarande och många publikationer om utförandet av plackanalyser5,10,11,12,13,14,15,16 är dessa metoder för HSV-1/-2 en blandning av både konst och vetenskap; man kan inte genomföra analysen utan ordentlig uppmärksamhet på varje detalj i protokollet, och man kan inte heller utföra en framgångsrik analys utan ett kritiellt öga för subtilitet i processen. Detta manuskript visar en av de mest konsekvent reproducerbara metoderna för HSV-1/-2-plackanalyser, med exakta detaljer mot analysens konst som sällan diskuteras.

Detta nuvarande protokoll erhåller levande plackbildande enheter (PFU) för HSV-1 och -2 på ett tillförlitligt sätt. De bästa resultaten erhålls med hjälp av Vero-celler (transformerade afrikanska gröna apa njurepitelceller) vid låg passage (under passage nummer 155) och rutinmässigt odlas i ^alfa-MEM17 kompletterat med 10% fetal kalvserum (FCS), L-alanyl-L-glutamin och en antibiotika/antimykotisk ^blandning18. Veroceller förökas vanligtvis i detta medium två till tre gånger per vecka vid en ¹/₅ utspädning varje gång.