Les débuts des tests de plaque virale remontent aux premières découvertes de virus dans les années 18901. Le virus de la mosaïque du tabac a d’abord été isolé et transmis sur les feuilles de tabac, où des taches individuelles d’infection ont pu être reconnues et quantifiées comme provenant d’une seule entité virale ^vivante2, identifiée plus tard comme un ^virion2. Des études séminales ultérieures avec des bactéries et des bactériophages ont perfectionné les techniques utilisées pour plaquer ces virus, y compris les bactéries à la phase médiane de croissance logarithmique, la dilution en série d’échantillons de bactériophages et la gélose supérieure avec visualisation ultérieure de trous littéraux (plaques) dans la pelouse ^{bactérienne3}.

L’affaissement des virus animaux a pris du retard par rapport aux recherches passionnantes menées avec les bactériophages, principalement parce que les méthodes requises pour la culture de cellules de mammifères n’ont pas été développées avant les années ¹⁹⁴⁰⁴. Cependant, l’avènement de la croissance des cellules murines en l’absence de l’organisme hôte ^entier4 a engendré une nouvelle ère dans la capacité de cultiver et de compter les virus. Ces travaux ont été étendus pour la propagation et la quantification du virus de l’encéphalomyélite équine occidentale dans les cellules de poulet et du poliovirus dans les cellules ^humaines5,6. Au fur et à mesure que le domaine des cellules de mammifères cultivables s’est élargi, la multitude de cellules hôtes différentes pour diverses infections virales a donné au monde une corne d’abondance de possibilités d’étudier toutes sortes de ^virus7. Cela comprenait la propagation et la quantification des herpèsvirus humains, en particulier les virus de l’herpès simplex 1 (HSV-1) et -2 (HSV-2), qui causent des lésions muco-cutanées8. Il est important de noter que tous les tests de plaque dépendent de l’existence de virions vivants, qui peuvent pénétrer dans les cellules hôtes de manière médiée par les récepteurs dans un ^{échantillon9}. Indépendamment de l’omniprésence et de la multitude de publications sur l’exécution des tests de plaque5,10,11,12,13,14,15,16, ces méthodes pour HSV-1/-2 sont un mélange d’art et de science; on ne peut pas effectuer le test sans une attention appropriée à chaque détail du protocole, ni exécuter un test réussi sans un œil crticial pour la subtilité dans le processus. Ce manuscrit décrit l’une des méthodes les plus reproductibles pour les tests de plaque HSV-1/-2, avec des détails précis sur l’art du test qui sont rarement discutés.

Ce protocole actuel permet d’obtenir de manière fiable le nombre d’unités formant de la plaque vivante (PFU) pour le HSV-1 et le -2. Les meilleurs résultats sont obtenus à l’aide de cellules Vero (cellules épithéliales rénal de singe vert africain transformées) à faible passage (sous le numéro de passage 155) et couramment cultivées en ^alpha-MEM17 complété par 10% de sérum de veau fœtal (FCS), L-alanyl-L-glutamine et un mélange antibiotique/antimycotique18. Les cellules Vero sont propagées de manière standard dans ce milieu deux à trois fois par semaine à une dilution ^{de 1}/₅ à chaque fois.