Cellekroppe af vagale afferents er indeholdt i jugular, petrosal, og nodose ganglier^1,2,3. Deres axoner rejser sammen via flere grene af vagusnerven til craniocervical, thorax og abdominal territorier^4,5,6,7. Fra deres viscerale slutninger kan vagale afferents reagere på en bred vifte af fysiologiske og skadelige stimuli^8,9,10. Imidlertid er fordelingen af signalmolekyler og receptorer, der er involveret i vagal sensing, stadig dårligt karakteriseret. Dette skyldes til dels, at vagal ganglier, på trods af deres lille størrelse, udtrykker et bredt spektrum af receptorer, herunder et stort antal GPCRs^8,11,12,13. Desuden er vagale afferent neuroner i sagens natur heterogene og viser forskellige molekylære profiler¹⁴. For at komplicere sagen er halspulsåren, petrosal og nodose ganglier fastgjort i musen og danner derved en enkelt ganglionic masse. Endelig er nodose ganglion i en delmængde af dyr knyttet til den sympatiske overlegne cervikal ganglion¹⁵.

Tidligere har efterforskere henvendt sig til immunohistochemistry for at studere den neurokemiske make-up af vagale afferent neuroner^16,17,18. Mens immunohistochemistry ved hjælp af validerede antistoffer er nyttige, skal resultaterne af immunohistokemiske undersøgelser fortolkes med forsigtighed. For eksempel har talrige bestræbelser på at identificere specifikke antistoffer mod GPCR undladt^{19,20,21,22,23,24,25}, førende efterforskere til at konkludere, at de fleste antistoffer mod GPCR er upålidelige. For at omgå disse spørgsmål er kvantitativ PCR (qPCR) blevet meget brugt til at vurdere genekspression i gnaverens vagale ganglionic masse^26,27,28,29. Men, undersøgelse genekspression ved hjælp af qPCR sker på bekostning af et tab af rumlige oplysninger. Det kan især ikke forudsiges, hvor mange celler eller hvilken eller flere celletyper der udtrykker et bestemt interessegen (f.eks. nodose vs. halspulsårer). Tilbagevendende spørgsmål omfatter også forurening med tilstødende væv og inddragelse af variable længder af vagus nerve, overlegen cervikal, og halspulsåren ganglier under dissektion¹⁵. Som et resultat af ovenstående vanskeligheder, kontroverser omgiver udtryk og distribution af flere GPCRs i vagal afferent neuroner. Et særligt gådefuldt eksempel vedrører ghrelin receptor (Ghsr). Mens nogle undersøgelser har fundet udbredt udtryk for denne receptor i vagal afferent neuroner^30,31,32, andre har fundet Ghsr mRNA at være næsten målbart i nodose ganglion^11,14. En detaljeret kortlægning af Ghsr mRNA i den vagale ganglionic masse er derfor berettiget.

In situ hybridisering (ISH) er også blevet brugt til at vurdere genekspressionsmønstre i vagal ganglionic masse^{7,11,12,33,34,35}. Fordi RNA-baserede teknikker forbliver mere pålidelige og specifikke end antistofbaserede teknikker under de fleste omstændigheder^36,37, har ISH-undersøgelser vist sig værdifulde for bedre forståelse af den neurokemiske kodning af vagale afferent neuroner. Ikke desto mindre er traditionelle ISH-teknikker i sig selv ikke uden forbehold. Radioaktiv ish er følsom, men genererer baggrund og forbliver besværlig³⁸. Ikke-radioaktiv ish er mindre kompliceret, men også mindre følsom³⁸. I modsætning hertil er den nyligt udviklede RNAscope ISH-metode meget følsom og genererer minimal baggrund³⁹. Den nuværende undersøgelse anvendt multiplex fluorescerende RNAscope til påvisning af GPCRs i vagal afferent neuroner af musen. Vi fokuserede på at kortlægge fordelingen af Ghsr og sammenlignede dens fordeling med fordelingen af cholecystokinin receptor (Cck1r), en anden GPCR kendt for at være udtrykt i nodose ganglion³⁴. Endelig blev de to transskriptionsfaktorer, parret-lignende homeobox 2b (Phox2b) og PR domæne zink finger protein 12 (Prdm12), brugt som selektive markører for nodose og jugular afferent neuroner, henholdsvis¹⁴. Uden at visualisere Phox2b eller Prdm12, ville det være udfordrende at identificere jugular vs nodose afferents med sikkerhed. Potentielle tekniske faldgruber diskuteres også i hele artiklen.