迷走神经传入者的细胞体包含在颈静脉，岩质和结节^1，2，3中。它们的轴突通过迷走神经的几个分支一起传播到颅颈，胸部和腹部区域^{4，5，6，7。}从它们的内脏末端，迷走神经传入物可以对广泛的生理和有害刺激做出反应^{8，9，10。}然而，参与迷走神经传感的信号分子和受体的分布仍然很差。这部分是因为迷走神经节尽管体积小，但表达的受体范围很广，包括大量的GPCR8，11，12，13。此外，迷走神经传入神经元本质上是异质的，并且显示出不同的分子谱¹⁴。更复杂的是，颈静脉、岩神经节和结节附着在小鼠体内，从而形成单个神经节肿块。最后，在动物亚群中，结节连接到交感神经节上颈神经节¹⁵。

过去，研究人员已经转向免疫组织化学来研究迷走神经传入神经元的神经化学组成16，17，18。虽然使用经过验证的抗体进行免疫组化是有用的，但必须谨慎解释免疫组化研究的结果。例如，许多鉴定GPCR特异性抗体的努力都失败了19，20，21，22，23，24，25，导致研究人员得出结论，大多数针对GPCR的抗体是不可靠的。为了规避这些问题，定量PCR（qPCR）已被广泛用于评估啮齿动物迷走神经节质量^{26，27，28，29}中的基因表达。然而，使用qPCR检查基因表达是以空间信息丢失为代价的。特别是，无法预测有多少细胞或什么细胞类型表达特定的目的基因（例如，结节细胞与颈细胞）。反复出现的问题还包括邻近组织的污染以及在解剖过程中包括可变长度的迷走神经，颈部上部和颈神经节¹⁵。由于上述困难，围绕迷走神经传入神经元中几种GPCR的表达和分布存在争议。一个特别令人费解的例子与ghrelin受体（Ghsr）有关。虽然一些研究发现这种受体在迷走神经传入神经元^30，31，32中广泛表达，但其他人发现Ghsr mRNA在结节^11，14中几乎检测不到。因此，有必要在迷走神经节质量中详细绘制Ghsr mRNA。

原位杂交（ISH）也被用于评估迷走神经节质量^{7、11、12、33、34、35}的基因表达模式。因为在大多数情况下，基于RNA的技术仍然比基于抗体的技术更可靠和特异性^{36，37，ISH}的研究已被证明对更好地理解迷走神经传入神经元的神经化学编码是有价值的。尽管如此，传统的ISH技术本身并非没有警告。放射性ISH是敏感的，但会产生背景，并且仍然很麻烦³⁸。非放射性ISH不那么复杂，但也不那么敏感^38。相比之下，最近开发的RNAscope ISH方法具有高度灵敏度，并且产生最小的背景^39。目前的研究将多重荧光RNAscope应用于检测小鼠迷走神经传入神经元中的GPCR。我们专注于绘制Ghsr的分布图，并将其分布与胆囊收缩素受体（Cck1r）的分布进行比较，胆囊收缩素受体（Cck1r）是另一种已知在结节³⁴中表达的GPCR。最后，将两种转录因子，成对的同源盒2b（Phox2b）和PR结构域锌指蛋白12（Prdm12）分别用作结节和颈静脉传入神经元的选择性标记物^14。如果不可视化Phox2b或Prdm12，则很难确定地识别颈静脉传入物与结核传入物。本文还讨论了潜在的技术陷阱。