चूहों में कैल्शियम क्षणिक अनुसंधान के लिए एक उद्देश्य लेंस के साथ बेसप्लेटिंग और एक मिनीस्कोप प्रीएंकोर्ड का उपयोग करना
Summary
इलाज के दौरान दंत सीमेंट का संकोचन बेसप्लेट को विस्थापित करता है। यह प्रोटोकॉल दंत सीमेंट की प्रारंभिक नींव बनाकर समस्या को कम करता है जो बेसप्लेट को सीमेंट करने के लिए जगह छोड़ देता है। हफ्तों बाद, बेसप्लेट को थोड़े से नए सीमेंट का उपयोग करके इस मचान पर स्थिति में सीमेंट किया जा सकता है, जिससे संकोचन कम हो जाता है।
Abstract
न्यूरोसाइंटिस्ट स्वतंत्र रूप से व्यवहार करने वाले जानवरों में न्यूरोनल गतिविधि का निरीक्षण करने के लिए लघु माइक्रोस्कोप (मिनीस्कोप) का उपयोग करते हैं। कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, लॉस एंजिल्स (यूसीएलए) मिनोस्कोप टीम शोधकर्ताओं को मिनीस्कोप बनाने के लिए खुले संसाधन प्रदान करती है। वी 3 यूसीएलए मिनिस्कोप वर्तमान में उपयोग में सबसे लोकप्रिय ओपन-सोर्स मिनीस्कोप में से एक है। यह सतही कॉर्टेक्स (एक लेंस प्रणाली) पर प्रत्यारोपित एक उद्देश्य लेंस के माध्यम से आनुवंशिक रूप से संशोधित न्यूरॉन्स से उत्सर्जित प्रतिदीप्ति क्षणिकता की इमेजिंग की अनुमति देता है, या गहरे मस्तिष्क में प्रत्यारोपित रिले लेंस के संयोजन के माध्यम से गहरे मस्तिष्क के क्षेत्रों में और एक उद्देश्य लेंस जो रिले छवि (दो-लेंस प्रणाली) का निरीक्षण करने के लिए मिनीस्कोप में पूर्वनिर्धारित होता है। यहां तक कि इष्टतम परिस्थितियों में (जब न्यूरॉन्स प्रतिदीप्ति संकेतक व्यक्त करते हैं और रिले लेंस ठीक से प्रत्यारोपित किया गया है), बेसप्लेट के बीच दंत सीमेंट का मात्रा परिवर्तन और सीमेंट के इलाज पर खोपड़ी से इसके लगाव से उद्देश्य और रिले लेंस के बीच एक परिवर्तित दूरी के साथ गलत संरेखण हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप खराब छवि गुणवत्ता होती है। एक बेसप्लेट एक प्लेट है जो खोपड़ी पर मिनीस्कोप को माउंट करने में मदद करती है और उद्देश्य और रिले लेंस के बीच काम की दूरी तय करती है। इस प्रकार, बेसप्लेट के चारों ओर दंत सीमेंट की मात्रा में परिवर्तन लेंस के बीच की दूरी को बदल देता है। वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य दंत सीमेंट में मात्रा परिवर्तन के कारण होने वाली गलत संरेखण समस्या को कम करना है। प्रोटोकॉल रिले लेंस आरोपण के दौरान दंत सीमेंट की प्रारंभिक नींव का निर्माण करके गलत संरेखण को कम करता है। प्रत्यारोपण के बाद का समय बेसप्लेट को पूरी तरह से ठीक करने के लिए दंत सीमेंट की नींव के लिए पर्याप्त है, इसलिए बेसप्लेट को जितना संभव हो उतना कम नए सीमेंट का उपयोग करके इस मचान पर सीमेंट किया जा सकता है। वर्तमान लेख में, हम चूहों में बेसप्लेटिंग के लिए रणनीतियों का वर्णन करते हैं ताकि मिनीस्कोप में लंगर डाले गए एक उद्देश्य लेंस के साथ न्यूरोनल गतिविधि की इमेजिंग को सक्षम किया जा सके।
Introduction
फ्लोरोसेंट गतिविधि रिपोर्टर न्यूरोनल गतिविधि की इमेजिंग के लिए आदर्श हैं क्योंकि वे संवेदनशील हैं औरबड़ी गतिशील सीमा 1,2,3 है। इसलिए, प्रयोगों की बढ़ती संख्या न्यूरोनल गतिविधि 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15 का सीधे निरीक्षण करने के लिए फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर रही है , 16. पहला लघुकृत एक-फोटॉन फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप (मिनीस्कोप) 2011 में मार्क श्निट्जर एट अल.5 द्वारा डिजाइन किया गया था। यह मिनीस्कोप शोधकर्ताओं को स्वतंत्र रूप से व्यवहार करने वाले जानवरों में अनुमस्तिष्क कोशिकाओं की प्रतिदीप्ति गतिशीलता की निगरानी करने में सक्षम बनाता है5 (यानी, बिना किसी शारीरिक संयम, सिर संयम, बेहोश करने की क्रिया, या जानवरों को संज्ञाहरण के बिना)। वर्तमान में, तकनीक को सतही मस्तिष्क क्षेत्रों जैसे कॉर्टेक्स 6,8,15,16 की निगरानी के लिए लागू किया जा सकता है; पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस 8,11,13,14 और स्ट्रेटम 6,17 जैसे उपकॉर्टिकल क्षेत्र; और वेंट्रल हिप्पोकैम्पस14, एमिग्डाला10,18 और हाइपोथैलेमस 8,12 जैसे गहरे मस्तिष्क क्षेत्र।
हाल के वर्षों में, कई ओपन-सोर्स मिनीस्कोप विकसित किए गए हैं4,5,6,7,11,13,17,19. मिनोस्कोप को शोधकर्ताओं द्वारा आर्थिक रूप से इकट्ठा किया जा सकता है यदि वे कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, लॉस एंजिल्स (यूसीएलए) मिनिस्कोप टीम द्वारा प्रदान किए गए चरण-दर-चरण दिशानिर्देशों का पालन करते हैं4,7,11,13. क्योंकि तंत्रिका गतिविधि की ऑप्टिकल निगरानी प्रकाश संचरण की सीमाओं से प्रतिबंधित है7 रुचि की न्यूरोनल आबादी से, एक मिनीस्कोप डिजाइन किया गया था, जिसके लिए एक ऑब्जेक्टिव ग्रेडिएंट अपवर्तक सूचकांक (GRIN) लेंस (या उद्देश्य लेंस) को मिनीस्कोप के निचले भाग में पूर्वनिर्धारित करने की आवश्यकता होती है ताकि रिले GRIN लेंस (या रिले लेंस) से रिले किए गए दृश्य के क्षेत्र को बढ़ाया जा सके।6,7,8,10,16,17. इस रिले लेंस को लक्षित मस्तिष्क क्षेत्र में प्रत्यारोपित किया जाता है जैसे कि लक्ष्य मस्तिष्क क्षेत्र की प्रतिदीप्ति गतिविधि रिले लेंस की सतह पर रिले की जाती है6,7,8,10,16,17. प्रकाश की एक पूर्ण साइनसॉइडल अवधि का लगभग 1/4 उद्देश्य GRIN लेंस (~ 0.25 पिच) के माध्यम से यात्रा करता है ।चित्र 1A1), जिसके परिणामस्वरूप एक आवर्धित प्रतिदीप्ति छवि होती है6,7. उद्देश्य लेंस हमेशा मिनीस्कोप के निचले भाग में तय नहीं होता है और न ही रिले लेंस का आरोपण आवश्यक होता है6,7,11,13,15. विशेष रूप से, दो विन्यास हैं: एक मिनीस्कोप में एक निश्चित उद्देश्य लेंस के साथ और मस्तिष्क में प्रत्यारोपित एक रिले लेंस8,10,12,14,16 (चित्र 1B1) और सिर्फ एक हटाने योग्य उद्देश्य लेंस के साथ दूसरा6,7,11,13,15 (चित्र 1B2). निश्चित उद्देश्य और प्रत्यारोपित रिले लेंस संयोजन के आधार पर डिजाइन में, मस्तिष्क से प्रतिदीप्ति संकेतों को रिले लेंस की शीर्ष सतह पर लाया जाता है (चित्र 1A1)7,8,10,12,14,16. इसके बाद, उद्देश्य लेंस रिले लेंस की शीर्ष सतह से दृश्य क्षेत्र को आवर्धित और प्रसारित कर सकता है (चित्र 1A2). दूसरी ओर, हटाने योग्य उद्देश्य ग्रिन लेंस डिजाइन अधिक लचीला है, जिसका अर्थ है कि मस्तिष्क में रिले लेंस का प्रीइम्प्लांटेशन अनिवार्य नहीं है (चित्र 1B2)6,7,11,13,15. हटाने योग्य उद्देश्य लेंस डिजाइन के आधार पर एक मिनीस्कोप का उपयोग करते समय, शोधकर्ताओं को अभी भी लक्षित मस्तिष्क क्षेत्र में एक लेंस प्रत्यारोपित करने की आवश्यकता होती है लेकिन वे या तो एक उद्देश्य लेंस प्रत्यारोपित कर सकते हैं6,7,11,13,15 या मस्तिष्क में एक रिले लेंस6,7. आरोपण के लिए एक उद्देश्य या रिले लेंस का विकल्प मिनीस्कोप कॉन्फ़िगरेशन को निर्धारित करता है जिसे शोधकर्ता को उपयोग करना चाहिए। उदाहरण के लिए, वी 3 यूसीएलए मिनिस्कोप एक हटाने योग्य उद्देश्य ग्रिन लेंस डिजाइन पर आधारित है। शोधकर्ता या तो रुचि के मस्तिष्क क्षेत्र में सीधे एक उद्देश्य लेंस प्रत्यारोपित करने और उद्देश्य लेंस पर “खाली” मिनीस्कोप को माउंट करने का विकल्प चुन सकते हैं6,7,11,13,15 (एक लेंस प्रणाली; चित्र 1B2) या मस्तिष्क में एक रिले लेंस प्रत्यारोपित करने और एक मिनीस्कोप को माउंट करने के लिए जो एक उद्देश्य लेंस के साथ पूर्वनिर्धारित है6,7 (एक दो-लेंस प्रणाली; चित्र 1B1). मिनीस्कोप तब आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड कैल्शियम संकेतक द्वारा उत्पादित न्यूरोनल फ्लोरेसेंस की लाइवस्ट्रीम छवियों को कैप्चर करने के लिए एक प्रतिदीप्ति कैमरे के रूप में काम करता है1,2,3. मिनीस्कोप के कंप्यूटर से कनेक्ट होने के बाद, इन फ्लोरेसेंस छवियों को कंप्यूटर में स्थानांतरित किया जा सकता है और वीडियो क्लिप के रूप में सहेजा जा सकता है। शोधकर्ता कुछ विश्लेषण पैकेजों के साथ प्रतिदीप्ति में सापेक्ष परिवर्तनों का विश्लेषण करके न्यूरोनल गतिविधि का अध्ययन कर सकते हैं20,21 या भविष्य के विश्लेषण के लिए उनके कोड लिखें।
वी 3 यूसीएलए मिनिस्कोप उपयोगकर्ताओं को यह निर्धारित करने के लिए लचीलापन प्रदान करता है कि एक या दो-लेंस सिस्टम 7 के साथ न्यूरोनल गतिविधि की छवि बनानीहै या नहीं। रिकॉर्डिंग सिस्टम की पसंद लक्ष्य मस्तिष्क क्षेत्र की गहराई और आकार पर आधारित है। संक्षेप में, एक लेंस प्रणाली केवल एक ऐसे क्षेत्र की छवि बना सकती है जो सतही (लगभग 2.5 मिमी से कम गहरा) और अपेक्षाकृत बड़ा (लगभग 1.8 x 1.8 मिमी2 से बड़ा) है क्योंकि निर्माता केवल उद्देश्य लेंस के एक निश्चित आकार का उत्पादन करते हैं। इसके विपरीत, एक दो-लेंस प्रणाली को किसी भी लक्ष्य मस्तिष्क क्षेत्र पर लागू किया जा सकता है। हालांकि, बेसप्लेट को चिपकाने के लिए दंत सीमेंट उद्देश्य और रिले लेंस के बीच एक परिवर्तित दूरी के साथ गलत संरेखण का कारण बनता है, जिसके परिणामस्वरूप छवि की गुणवत्ता खराब होती है। यदि दो-लेंस प्रणाली का उपयोग किया जा रहा है, तो इष्टतम इमेजिंग गुणवत्ता (चित्रा 1 ए) प्राप्त करने के लिए दो कामकाजी दूरी को ठीक से लक्षित करने की आवश्यकता है। ये दो महत्वपूर्ण कार्य दूरी रिले लेंस के न्यूरॉन्स और निचली सतह के बीच हैं, और रिले लेंस की शीर्ष सतह और उद्देश्य लेंस की निचली सतह के बीच हैं (चित्रा 1 ए 1)। कामकाजी दूरी के बाहर लेंस के किसी भी गलत संरेखण या गलत स्थान के परिणामस्वरूप इमेजिंग विफलता होती है (चित्रा 1 सी 2)। इसके विपरीत, एक-लेंस प्रणाली को केवल एक सटीक कार्य दूरी की आवश्यकता होती है। हालांकि, उद्देश्य लेंस का आकार गहरे मस्तिष्क क्षेत्रों की निगरानी के लिए इसके आवेदन को सीमित करता है (उद्देश्य लेंस जो मिनीस्कोप को फिट करता है वह लगभग 1.8 ~ 2.0 मिमी 6,11,13,15 है)। इसलिए, एक उद्देश्य लेंस का आरोपण सतह और अपेक्षाकृत बड़े मस्तिष्क क्षेत्रों के अवलोकन के लिए सीमित है, जैसे कि चूहोंमें कॉर्टेक्स 6,15 और पृष्ठीय कॉर्नू एम्मोनिस 1 (सीए 1) 11,13। इसके अलावा, पृष्ठीयसीए 1 11,13 को लक्षित करने के लिए कॉर्टेक्स के एक बड़े क्षेत्र को एस्पिरेटेड किया जाना चाहिए। एक-लेंस कॉन्फ़िगरेशन की सीमा के कारण जो गहरे मस्तिष्क क्षेत्रों की इमेजिंग को रोकता है, वाणिज्यिक मिनीस्कोप सिस्टम केवल एक संयुक्त उद्देश्य लेंस / रिले लेंस (दो-लेंस) डिजाइन प्रदान करते हैं। दूसरी ओर, वी 3 यूसीएलए मिनीस्कोप को एक-लेंस या दो-लेंस प्रणाली में संशोधित किया जा सकता है क्योंकि इसका उद्देश्य लेंसहटाने योग्य 6,11,13,15 है। दूसरे शब्दों में, वी 3 यूसीएलए मिनीस्कोप उपयोगकर्ता मस्तिष्क में प्रत्यारोपित करके (एक लेंस प्रणाली बनाकर), सतही मस्तिष्क अवलोकन (गहराई में 2.5 मिमी से कम) से जुड़े प्रयोगों का प्रदर्शन करते समय, या इसे मिनीस्कोप में प्रीएंचोर करके और मस्तिष्क में रिले लेंस प्रत्यारोपित करके (दो-लेंस सिस्टम बनाकर) हटाने योग्य लेंस का लाभ उठा सकते हैं। गहरे मस्तिष्क अवलोकनों से जुड़े प्रयोगों का प्रदर्शन करते समय। दो-लेंस प्रणाली को मस्तिष्क को सतही रूप से देखने के लिए भी लागू किया जा सकता है, लेकिन शोधकर्ता को उद्देश्य लेंस और रिले लेंस के बीच सटीक कामकाजी दूरी को जानना चाहिए। एक-लेंस प्रणाली का मुख्य लाभ यह है कि दो-लेंस प्रणाली की तुलना में कामकाजी दूरी को याद करने की संभावना कम हो जाती है, यह देखते हुए कि दो-लेंस सिस्टम (चित्रा 1 ए) में इष्टतम इमेजिंग गुणवत्ता प्राप्त करने के लिए दो कामकाजी दूरी को ठीक से लक्षित करने की आवश्यकता होती है। इसलिए, हम सतही मस्तिष्क अवलोकनों के लिए एक लेंस प्रणाली का उपयोग करने की सलाह देते हैं। हालांकि, यदि प्रयोग को गहरे मस्तिष्क क्षेत्र में इमेजिंग की आवश्यकता होती है, तो शोधकर्ता को दो लेंसों के गलत संरेखण से बचना सीखना चाहिए।
प्रयोगों के लिए मिनीस्कोप के दो-लेंस कॉन्फ़िगरेशन के लिए मूल प्रोटोकॉल में लेंस आरोपण और बेसप्लेटिंग 8,10,16,17 शामिल हैं। बेसप्लेटिंग एक जानवर के सिर पर बेसप्लेट का चिपकना है ताकि मिनोस्कोप को अंततः जानवर के शीर्ष पर लगाया जा सके और न्यूरॉन्स के प्रतिदीप्ति संकेतों को वीडियोटेप किया जा सके (चित्रा 1 बी)। इस प्रक्रिया में खोपड़ी पर बेसप्लेट को गोंद करने के लिए दंत सीमेंट का उपयोग करना शामिल है (चित्रा 1 सी), लेकिन दंत सीमेंट का संकोचन प्रत्यारोपित रिले लेंस और उद्देश्य लेंस 8,17 के बीच की दूरी में अस्वीकार्य परिवर्तन कर सकता है। यदि दो लेंसों के बीच स्थानांतरित दूरी बहुत बड़ी है, तो कोशिकाओं को ध्यान में नहीं लाया जा सकता है।
मिनीस्कोप का उपयोग करके गहरे मस्तिष्क कैल्शियम इमेजिंग प्रयोगों के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल पहले ही प्रकाशित किए जा चुके हैं8,10,16,17. इन प्रोटोकॉल के लेखकों ने इन्सकॉपिक्स सिस्टम का उपयोग किया है8,10,16 या अन्य अनुकूलित डिजाइन17 और वायरल चयन, सर्जरी और बेसप्लेट अटैचमेंट के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं का वर्णन किया है। हालांकि, उनके प्रोटोकॉल को अन्य ओपन-सोर्स सिस्टम, जैसे कि वी 3 यूसीएलए मिनोस्कोप सिस्टम, एनआईएनस्कोप पर सटीक रूप से लागू नहीं किया जा सकता है6, और फिंचस्कोप19. खोपड़ी में बेसप्लेट को सीमेंट करने के लिए उपयोग किए जाने वाले दंत सीमेंट के प्रकार के कारण यूसीएलए मिनोस्कोप के साथ दो-लेंस विन्यास में रिकॉर्डिंग के दौरान दो लेंसों का गलत संरेखण हो सकता है8,17 (चित्र 1C). वर्तमान प्रोटोकॉल की आवश्यकता है क्योंकि बेसप्लेटिंग प्रक्रिया के दौरान दंत सीमेंट के अवांछनीय संकोचन के कारण प्रत्यारोपित रिले लेंस और उद्देश्य लेंस के बीच की दूरी बदलने की संभावना है। बेसप्लेटिंग के दौरान, प्रत्यारोपित रिले लेंस और उद्देश्य लेंस के बीच इष्टतम कार्य दूरी को मिनीस्कोप और रिले लेंस के शीर्ष के बीच की दूरी को समायोजित करके पाया जाना चाहिए, और बेसप्लेट को तब इस आदर्श स्थान पर चिपकाया जाना चाहिए। उद्देश्य लेंस और प्रत्यारोपित रिले लेंस के बीच सही दूरी निर्धारित होने के बाद, सेलुलर रिज़ॉल्यूशन पर अनुदैर्ध्य माप प्राप्त किया जा सकता है (चित्र 1B; in vivo रिकॉर्डिंग)। चूंकि रिले लेंस की कामकाजी दूरी की इष्टतम सीमा छोटी है (50 – 350 μm)4,8इलाज के दौरान अत्यधिक सीमेंट संकोचन उद्देश्य लेंस और प्रत्यारोपित रिले लेंस को उचित सीमा के भीतर रखना मुश्किल बना सकता है। इस रिपोर्ट का समग्र लक्ष्य संकोचन समस्याओं को कम करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करना है8,17 जो बेसप्लेटिंग प्रक्रिया के दौरान होता है और दो-लेंस कॉन्फ़िगरेशन में फ्लोरेसेंस सिग्नल की मिनीस्कोप रिकॉर्डिंग की सफलता दर को बढ़ाने के लिए होता है। सफल मिनीस्कोप रिकॉर्डिंग को स्वतंत्र रूप से व्यवहार करने वाले जानवर में व्यक्तिगत न्यूरॉन्स के प्रतिदीप्ति में ध्यान देने योग्य सापेक्ष परिवर्तनों के लाइवस्ट्रीम की रिकॉर्डिंग के रूप में परिभाषित किया गया है। यद्यपि दंत सीमेंट के विभिन्न ब्रांडों में अलग-अलग संकोचन दर होती है, शोधकर्ता एक ब्रांड का चयन कर सकते हैं जिसे पहले परीक्षण किया गया है6,7,8,10,11,12,13,14,15,16,22. हालांकि, चिकित्सा सामग्री के लिए आयात नियमों के कारण कुछ देशों / क्षेत्रों में हर ब्रांड प्राप्त करना आसान नहीं है। इसलिए, हमने उपलब्ध दंत सीमेंट की संकोचन दरों का परीक्षण करने के तरीके विकसित किए हैं और महत्वपूर्ण रूप से एक वैकल्पिक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं जो संकोचन समस्या को कम करता है। वर्तमान बेसप्लेटिंग प्रोटोकॉल पर लाभ उपकरण और सीमेंट के साथ कैल्शियम इमेजिंग की सफलता दर में वृद्धि है जिसे प्रयोगशालाओं में आसानी से प्राप्त किया जा सकता है। यूसीएलए मिनीस्कोप का उपयोग एक उदाहरण के रूप में किया जाता है, लेकिन प्रोटोकॉल अन्य मिनीस्कोप पर भी लागू होता है। इस रिपोर्ट में, हम एक अनुकूलित बेसप्लेटिंग प्रक्रिया का वर्णन करते हैं और यूसीएलए मिनीस्कोप टू-लेंस सिस्टम को फिट करने के लिए कुछ रणनीतियों की भी सिफारिश करते हैं (चित्र 2A). यूसीएलए मिनीस्कोप के साथ दो-लेंस विन्यास के लिए सफल आरोपण (एन = 3 चूहों) और असफल आरोपण (एन = 2 चूहों) के दोनों उदाहरण सफलताओं और विफलताओं के कारणों के लिए चर्चा के साथ प्रस्तुत किए गए हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
वर्तमान रिपोर्ट दो-लेंस यूसीएलए मिनीस्कोप प्रणाली का उपयोग करने वाले शोधकर्ताओं के लिए एक विस्तृत प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल का वर्णन करती है। हमारे प्रोटोकॉल में डिज़ाइन किए गए उपकरण किसी भी प्रयोगशाल…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय, ताइवान (108-2320-बी-002-074, 109-2320-बी-002-023-एमवाई 2) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| 0.7-mm drill bit | #19008-07 | Fine Science Tools; USA | for surgery |
| 0.1–10 μl pipette tips | 104-Q; QSP | Fisher Scientific; Singapore | for testing dental cement |
| 20 G IV cathater | #SR-OX2032CA | Terumo Corporation; Tokyo, Japan | for surgery |
| 27 G needle | AGANI, AN*2713R | Terumo Corporation; Tokyo, Japan | for surgery |
| AAV9-syn-jGCaMP7s-WPRE | #104487-AAV9; 1.5*10^13 | Addgene viral prep; MA, USA | for viral injection |
| Atropine sulfate | Astart; Hsinchu, Taiwan | for surgery/dummy baseplating/baseplating | |
| Baseplate | V3 | http://miniscope.org | for dummy baseplating/baseplating |
| BLU TACK | #30840350 | Bostik; Chelsea, Massachusetts, USA | Reusable adhesive clay; for surgery/dummy baseplating/baseplating |
| Bone Rongeur Friedman | 13 cm | Diener; Tuttlingen, Germany | for baseplating |
| Buprenorphine | INDIVIOR; UK | for surgery | |
| Carprofen | Rimadyl | Zoetis; Exton, PA | analgesia |
| Ceftazidime | Taiwan Biotech; Taiwan | prevent infection | |
| Data Acquisition PCB for UCLA Miniscope | purchased on https://www.labmaker.org/collections/neuroscience/products/data-aquistion-system-daq | for baseplating | |
| Dental cement set | Tempron | GC Corp; Tokyo, Japan | for testing dental cement |
| Dental cement set | Tokuso Curefast | Tokuyama Dental Corp.; Tokyo, Japan | for testing dental cement/surgery/dummy baseplating/baseplating |
| Dual Lab Standard with Mouse and Rat Adaptors | #51673 | Stoelting Co; Illinois, USA | for surgery/dummy baseplating/baseplating |
| Duratear ointment | Alcon; Geneva, Switzerland | for surgery/dummy baseplating/baseplating | |
| Ibuprofen | YungShin; Taiwan | analgesia | |
| Isoflurane | Panion & BF Biotech INC.; Taoyuan, Taiwan | for surgery/dummy baseplating/baseplating | |
| Inscopix | nVista System | Inscopix; Palo Alto, CA | for comparison with V3 UCLA Miniscope |
| Ketamine | Pfizer; NY, NY | for euthanasia | |
| Normal saline | for surgery | ||
| Micro bulldog clamps | #12.102.04 | Dimedo; Tuttlingen, Germany | for lens implantation |
| Microliter Microsyringes, 2.0 µL, 25 gauge | #88400 | Hamilton; Bonaduz, Switzerland | for viral injection |
| Molding silicone rubber | ZA22 Thixo | Zhermack; Badia Polesine, Italy | for dummy baseplating |
| Objective Gradient index (GRIN) lens | #64519 | Edmund Optics; NJ, USA | for dummy baseplating/baseplating |
| Parafilm | #PM996 | Bemis; Neenah, USA | for dummy baseplating |
| Portable Suction | #DF-750 | Doctor's Friend Medical Instrument Co., Inc., Taichung, Taiwan | for surgery |
| Relay GRIN lens | #1050-002177 | Inscopix; Palo Alto, CA, USA | for dummy baseplating/baseplating |
| Stainless steel anchor screws | 1.00 mm diameter, total length 3.00 mm | for surgery | |
| Stereo microscope | #SL720 | Sage Vison; New Taipei City, Taiwan | for surgery/dummy baseplating/baseplating |
| Stereotaxic apparatus | #51673 | Stoelting; IL, USA | for surgery/dummy baseplating/baseplating |
| UV Cure Adhesive | #3321 | Loctite; Düsseldorf, Germany | for testing dental cement |
| V3 UCLA Miniscope | purchased on https://www.labmaker.org/products/miniscope-complete-set-of-components | for surgery/dummy baseplating/baseplating | |
| Xylazine | X1126 | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | for euthanasia |
| Xylocaine pump spray 10% | AstraZeneca; Södertälje, Sweden | for surgery |
Referências
- Tian, L., Hires, S. A., Looger, L. L. Imaging neuronal activity with genetically encoded calcium indicators. Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (6), 647-656 (2012).
- Grienberger, C., Konnerth, A. Imaging calcium in neurons. Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).
- Dana, H., et al. High-performance calcium sensors for imaging activity in neuronal populations and microcompartments. Nature Methods. 16 (7), 649-657 (2019).
- Campos, P., Walker, J. J., Mollard, P. Diving into the brain: deep-brain imaging techniques in conscious animals. Journal of Endocrinology. 246 (2), 33-50 (2020).
- Ghosh, K. K., et al. Miniaturized integration of a fluorescence microscope. Nature Methods. 8 (10), 871-878 (2011).
- de Groot, A., et al. NINscope, a versatile miniscope for multi-region circuit investigations. Elife. 9, 49987 (2020).
- Aharoni, D., Hoogland, T. M. Circuit investigations with open-source miniaturized microscopes: past, present and future. Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 141 (2019).
- Resendez, S. L., et al. Visualization of cortical, subcortical and deep brain neural circuit dynamics during naturalistic mammalian behavior with head-mounted microscopes and chronically implanted lenses. Nature Protocols. 11 (3), 566-597 (2016).
- Aharoni, D., Khakh, B. S., Silva, A. J., Golshani, P. All the light that we can see: a new era in miniaturized microscopy. Nature Methods. 16 (1), 11-13 (2019).
- Lee, H. S., Han, J. H. Successful in vivo calcium imaging with a head-mount miniaturized microscope in the amygdala of freely behaving mouse. Journal of Visualized Experiments. (162), e61659 (2020).
- Cai, D. J., et al. A shared neural ensemble links distinct contextual memories encoded close in time. Nature. 534 (7605), 115-118 (2016).
- Chen, K. S., et al. A hypothalamic switch for REM and Non-REM sleep. Neuron. 97 (5), 1168-1176 (2018).
- Shuman, T., et al. Breakdown of spatial coding and interneuron synchronization in epileptic mice. Nature Neuroscience. 23 (2), 229-238 (2020).
- Jimenez, J. C., et al. Anxiety cells in a hippocampal-hypothalamic circuit. Neuron. 97 (3), 670-683 (2018).
- Hart, E. E., Blair, G. J., O’Dell, T. J., Blair, H. T., Izquierdo, A. Chemogenetic modulation and single-photon calcium imaging in anterior cingulate cortex reveal a mechanism for effort-based decisions. Journal of Neuroscience. , 2548 (2020).
- Gulati, S., Cao, V. Y., Otte, S. Multi-layer cortical Ca2+ imaging in freely moving mice with prism probes and miniaturized fluorescence microscopy. Journal of Visualized Experiments. (124), e55579 (2017).
- Zhang, L., et al. Miniscope GRIN lens system for calcium imaging of neuronal activity from deep brain structures in behaving animals. Current Protocols in Neuroscience. 86 (1), 56 (2019).
- Corder, G., et al. An amygdalar neural ensemble that encodes the unpleasantness of pain. Science. 363 (6424), 276-281 (2019).
- Liberti, W. A., Perkins, L. N., Leman, D. P., Gardner, T. J. An open source, wireless capable miniature microscope system. Journal of Neural Engineering. 14 (4), 045001 (2017).
- Lu, J., et al. MIN1PIPE: A miniscope 1-photon-based calcium imaging signal extraction pipeline. Cell Reports. 23 (12), 3673-3684 (2018).
- Giovannucci, A., et al. CaImAn an open source tool for scalable calcium imaging data analysis. Elife. 8, 38173 (2019).
- Lee, A. K., Manns, I. D., Sakmann, B., Brecht, M. Whole-cell recordings in freely moving rats. Neuron. 51 (4), 399-407 (2006).
- Burger, C., et al. Recombinant AAV viral vectors pseudotyped with viral capsids from serotypes 1, 2, and 5 display differential efficiency and cell tropism after delivery to different regions of the central nervous system. Molecular Therapy. 10 (2), 302-317 (2004).
- Royo, N. C., et al. Specific AAV serotypes stably transduce primary hippocampal and cortical cultures with high efficiency and low toxicity. Brain Research. 1190, 15-22 (2008).
- Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).
- Ziv, Y., et al. Long-term dynamics of CA1 hippocampal place codes. Nature Neuroscience. 16 (3), 264-266 (2013).
- Gargiulo, S., et al. Mice anesthesia, analgesia, and care, Part I: anesthetic considerations in preclinical research. ILAR journal / National Research Council, Institute of Laboratory Animal Resources. 53 (1), 55-69 (2012).
