Summary

Erhvervelse af Resting-State Funktionel Magnetisk Resonans Imaging Data i Rat

Published: August 28, 2021
doi:

Summary

Denne protokol beskriver en metode til at opnå stabile hviletilstandsfunktionelle magnetisk resonansbilleddannelsesdata (rs-fMRI) fra en rotte ved hjælp af lavdosisisofluran i kombination med lavdosis dexmedetomidin.

Abstract

Hviletilstand funktionel magnetisk resonansbilleddannelse (rs-fMRI) er blevet en stadig mere populær metode til at studere hjernefunktion i en hvilende, ikke-opgavetilstand. Denne protokol beskriver en præklinisk overlevelsesmetode til indhentning af rs-fMRI-data. Kombinationen af lavdosisisoflurane med kontinuerlig infusion af α2 adrenergic receptor agonist dexmedetomidin giver en robust mulighed for stabil dataopsamling af høj kvalitet, samtidig med at hjernens netværksfunktion bevares. Desuden giver denne procedure mulighed for spontan vejrtrækning og næsten normal fysiologi hos rotten. Yderligere billedsekvenser kan kombineres med hviletilstandserhvervelse, der skaber eksperimentelle protokoller med bedøvelsesstabilitet på op til 5 timer ved hjælp af denne metode. Denne protokol beskriver opsætningen af udstyr, overvågning af rottefysiologi i fire forskellige faser af anæstesi, erhvervelse af hviletilstandsscanninger, kvalitetsvurdering af data, genopretning af dyret og en kort diskussion af efterbehandlingsdataanalyse. Denne protokol kan bruges på tværs af en bred vifte af prækliniske gnavermodeller for at hjælpe med at afsløre de resulterende hjernenetværksændringer, der opstår i hvile.

Introduction

Hviletilstand funktionel magnetisk resonansbilleddannelse (rs-fMRI) er et mål for det blod-ilt-niveau-afhængige (FED) signal, når hjernen er i hvile og ikke er involveret i nogen bestemt opgave. Disse signaler kan bruges til at måle korrelationer mellem hjerneregioner for at bestemme den funktionelle forbindelse inden for neurale netværk. rs-fMRI anvendes i vid udstrækning i kliniske undersøgelser på grund af dets ikke-invasivitet og den lave indsats, der kræves af patienter (sammenlignet med opgavebaseret fMRI), hvilket gør det optimalt for forskellige patientpopulationer1.

De teknologiske fremskridt har gjort det muligt at tilpasse rs-fMRI til brug i gnavermodeller for at afdække mekanismer, der ligger til grund for sygdomstilstande (se reference2 til revision). Prækliniske dyremodeller, herunder sygdoms- eller knockoutmodeller, tillader en bred vifte af eksperimentelle manipulationer, der ikke kan anvendes hos mennesker, og undersøgelser kan også gøre brug af post mortem-prøver til yderligere at forbedre forsøg2. Ikke desto mindre, på grund af vanskelighederne med både at begrænse bevægelse og formildende stress, udføres MR-erhvervelse hos gnavere traditionelt under anæstesi. Bedøvelsesmidler, afhængigt af deres farmakokinetik, farmakodynamik og molekylære mål, påvirker hjernens blodgennemstrømning, hjernens stofskifte og potentielt påvirker neurovaskulære koblingsveje.

Der har været mange bestræbelser på at udvikle anæstesiprotokoller, der bevarer neurovaskulær kobling og hjernenetværksfunktion3,4,5,6,7,8. Vi har tidligere rapporteret en bedøvelse regime, der anvendes en lav dosis af isoflurane sammen med en lav dosis af α2 adrenergic receptor agonist dexmedetomidin9. Rotter under denne anæstesimetode udviste robuste FED-reaktioner på whisker stimulation i regioner i overensstemmelse med etablerede projektionsveje (ventrolateral og ventromedial thalamic nuclei, primær og sekundær somatosensorisk cortex); store hviletilstandshjernenetværk, herunder standardtilstandsnetværket10,11 og salience-netværk12, er også konsekvent blevet opdaget. Desuden giver denne bedøvelsesprotokol mulighed for gentagen billeddannelse på det samme dyr, hvilket er vigtigt for overvågningen af sygdomsprogressionen og effekten af eksperimentelle manipulationer i længderetningen.

I denne undersøgelse beskriver vi de eksperimentelle opsætnings-, dyreforberedelses- og fysiologiske overvågningsprocedurer, der er involveret. Vi beskriver især de specifikke anæstesifaser og erhvervelse af scanninger i hver fase. Datakvaliteten vurderes efter hver hviletilstandsscanning. En kort oversigt over analyse efter scanningen er også inkluderet i diskussionen. Laboratorier, der er interesseret i at afdække potentialet ved at anvende rs-fMRI hos rotter, vil finde denne protokol nyttig.

Protocol

Alle eksperimenter blev udført på en 9,4 T MR-scanner, og blev godkendt af den institutionelle Animal Care and Use Committee på Dartmouth College. Yderligere godkendelse blev opnået for at optage og vise de dyr, der anvendes i videoen og tallene nedenfor. 1. Præparater før scanning Subkutan infusionslinje Fjern delvist en 23 G nål fra pakken, så nålepunktet forbliver sterilt. Hold nålens nav sikkert, og brug et barberblad til at score nåleskakten, hvor d…

Representative Results

Efter hver hviletilstandsscanning vurderes stabiliteten ved hjælp af en uafhængig komponentanalyse (ICA; eksempelscript, der er inkluderet i supplerende filer). Figur 6 viser eksempler på komponentoutput fra scanninger i hviletilstand. Figur 6a viser en signalkomponent fra en scanning med høj stabilitet. Bemærk, at komponenten geografisk har høj regionalitet. Inden for tidsforløbet under den rumlige komponent er signalet stabilt og ikke f…

Discussion

Dyrets stabilitet, både fysisk og fysiologisk, er nøglen til at opnå hviletilstandsdata af høj kvalitet. Denne protokol opnår stabilitet ved at bevæge sig gennem fire forskellige faser af anæstesi. Det er bydende nødvendigt, at dyret har opfyldt de fastsatte fysiologiske tærskler, før det går videre til næste fase af anæstesi; da denne metode er afhængig af fysiologiske autoregulatoriske mekanismer, kan individuelle dyr kræve lidt forskellige mængder tid i hver anæstesifase. Det er vores erfaring, at det…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dette arbejde blev støttet af midler fra National Institute of Health (NIH)’s National Institute on Drug Abuse (NIDA) [DJW, EDKS, og EMB blev støttet af Grant R21DA044501 tildelt Alan I. Green og DJW blev støttet af Grant T32DA037202 til Alan J. Budney] og National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA) [Grant F31AA028413 til Emily D. K. Sullivan]. Yderligere støtte blev ydet gennem Alan I. Greens begavede fond som Raymond Sobel professor i psykiatri i Dartmouth.

Hanbing Lu støttes af National Institute on Drug Abuse Intramural Research Program, NIH.

Forfatterne ønsker at anerkende og takke den afdøde Alan I. Green. Hans urokkelige dedikation til området for samforekomne lidelser bidrog til at etablere samarbejde mellem forfatterne. Vi takker ham for hans mentorskab og vejledning, som vil blive savnet.

Materials

9.4T MRI Varian/Bruker Varian upgraded with Bruker console running Paravision 6.0.1 software
Air-Oxygen Mixer Sechrist Model 3500CP-G
Analysis of Functional NeuroImages (AFNI) NIMH/NIH Version AFNI_18.3.03 Freely available at: https://afni.nimh.nih.gov/
Animal Cradle RAPID Biomedical LHRXGS-00563 rat holder with bite bar, nose cone and ear bars
Animal Physiology Monitoring & Gating System SAII Model 1025 MR-compatible system including oxygen saturation, temperature, respiration and fiber optic pulse oximetry add-on
Antisedan (atipamezole hydrochloride) Patterson Veterinary 07-867-7097 Zoetis, Manufacturer Item #10000449
Ceramic MRI-Safe Scissors MRIequip.com MT-6003
Clippers Patterson Veterinary 07-882-1032 Wahl touch-up trimmer combo kit, Manufacturer Item #09990-1201
Dexmedesed (dexmedetomidine hydrochloride) Patterson Veterinary 07-893-1801 Dechra Veterinary Products, Manufacturer Item#17033-005-10
Digital Rectal Thermometer Covers Medline MDS9608
FMRIB Software Library FMRIB MELODIC Version 3.15 Freely available at: https://fsl.fmrib.ox.ac.uk/fsl/fslwiki
Heating Pad Cara Inc. Model 50
Hemostat forceps, straight Kent Scientific INS750451-2
Isoflurane Patterson Veterinary 07-893-1389 Patterson Private Label, Manufacturer Item #14043-0704-06
Isoflurane Vaporizer VetEquip Inc. 911103
Lab Tape, 3/4" VWR International 89097-990
Needles, 23 gauge BD 305145 plastic hub removed
Parafilm Laboratory Film Patterson Veterinary 07-893-0260 Medline Industries Inc., Manufacturer Item #HSFHS234526A
Planar Surface Coil Bruker T12609 2cm
Polyethylene Tubing Braintree Scientific PE50 50FT 0.023" (inner diameter), 0.038" (outer diameter)
Puralube Ophthalmic Ointment Patterson Veterinary 07-888-2572 Dechra Veterinary Products, Manufacturer Item #211-38
Sprague Dawley Rats Charles River 400 SAS SD
Sterile 0.9% Saline Solution Patterson Veterinary 07-892-4348 Aspen Vet, Manufacturer Item #14208186
Sterile Alcohol Prep Pads Medline MDS090735
Surgical Tape, 1" (3M Durapore) Medline MMM15381Z 3M Healthcare, "wide medical tape"
Surgical White Paper Tape, 1/2" (3M Micropore) Medline MMM15300 3M Healthcare
Syringes, 1 mL w/ 25 gauge needle BD 309626
Syringes, 3 mL BD 309657
Vented induction and scavenging system VetEquip Inc. 942102 2 liter induction chamber with active scavenging
411724 omega flowmeter
931600 scavenging cube, "vacuum"
921616 nose cone, non-rebreathing

Referências

  1. Smitha, K. A., et al. Resting state fMRI: A review on methods in resting state connectivity analysis and resting state networks. The Neuroradiology Journal. 30 (4), 305-317 (2017).
  2. Gorges, M., et al. Functional connectivity mapping in the animal model: Principles and applications of resting-state fMRI. Frontiers in Neurology. 8, (2017).
  3. Paasonen, J., Stenroos, P., Salo, R. A., Kiviniemi, V., Gröhn, O. Functional connectivity under six anesthesia protocols and the awake condition in rat brain. NeuroImage. 172, 9-20 (2018).
  4. Pawela, C. P., et al. A protocol for use of medetomidine anesthesia in rats for extended studies using task-induced BOLD contrast and resting-state functional connectivity. NeuroImage. 46 (4), 1137-1147 (2009).
  5. Jonckers, E., et al. Different anesthesia regimes modulate the functional connectivity outcome in mice. Magnetic Resonance in Medicine. 72 (4), 1103-1112 (2014).
  6. Williams, K. A., et al. Comparison of alpha-chloralose, medetomidine and isoflurane anesthesia for functional connectivity mapping in the rat. Magnetic Resonance Imaging. 28 (7), 995-1003 (2010).
  7. Zhurakovskaya, E., et al. Global functional connectivity differences between sleep-like states in urethane anesthetized rats measured by fMRI. PloS One. 11 (5), 0155343 (2016).
  8. Fukuda, M., Vazquez, A. L., Zong, X., Kim, S. -. G. Effects of the α2-adrenergic receptor agonist dexmedetomidine on neural, vascular and BOLD fMRI responses in the somatosensory cortex. The European Journal of Neuroscience. 37 (1), 80-95 (2013).
  9. Brynildsen, J. K., et al. Physiological characterization of a robust survival rodent fMRI method. Magnetic Resonance Imaging. 35, 54-60 (2017).
  10. Lu, H., et al. Rat brains also have a default mode network. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (10), 3979-3984 (2012).
  11. Lu, H., et al. Low- but not high-frequency LFP correlates with spontaneous BOLD fluctuations in rat whisker barrel cortex. Cerebral Cortex. 26 (2), 683-694 (2016).
  12. Tsai, P. -. J., et al. Converging structural and functional evidence for a rat salience network. Biological Psychiatry. 88 (11), 867-878 (2020).
  13. Murphy, K., Bodurka, J., Bandettini, P. A. How long to scan? The relationship between fMRI temporal signal to noise ratio and necessary scan duration. NeuroImage. 34 (2), 565-574 (2007).
  14. Birn, R. M., et al. The effect of scan length on the reliability of resting-state fMRI connectivity estimates. NeuroImage. 83, 550-558 (2013).
  15. Lu, H., et al. Synchronized delta oscillations correlate with the resting-state functional MRI signal. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (46), 18265-18269 (2007).
  16. Lu, H., et al. Registering and analyzing rat fMRI data in the stereotaxic framework by exploiting intrinsic anatomical features. Magnetic Resonance Imaging. 28 (1), 146-152 (2010).
  17. Cox, R. W. AFNI: software for analysis and visualization of functional magnetic resonance neuroimages. Computers and Biomedical Research. 29 (3), 162-173 (1996).
  18. Ash, J. A., et al. Functional connectivity with the retrosplenial cortex predicts cognitive aging in rats. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (43), 12286-12291 (2016).
  19. Hsu, L. -. M., et al. Intrinsic insular-frontal networks predict future nicotine dependence severity. The Journal of Neuroscience. 39 (25), 5028-5037 (2019).
  20. Li, Q., et al. Resting-state functional MRI reveals altered brain connectivity and its correlation with motor dysfunction in a mouse model of Huntington’s disease. Scientific Reports. 7, (2017).
  21. Lu, H., et al. Abstinence from cocaine and sucrose self-administration reveals altered mesocorticolimbic circuit connectivity by resting state MRI. Brain Connectivity. 4 (7), 499-510 (2014).
  22. Seewoo, B. J., Joos, A. C., Feindel, K. W. An analytical workflow for seed-based correlation and independent component analysis in interventional resting-state fMRI studies. Neuroscience Research. 165, 26-37 (2021).
  23. Broadwater, M. A., et al. Adolescent alcohol exposure decreases frontostriatal resting-state functional connectivity in adulthood. Addiction Biology. 23 (2), 810-823 (2018).
  24. Jaime, S., Cavazos, J. E., Yang, Y., Lu, H. Longitudinal observations using simultaneous fMRI, multiple channel electrophysiology recording, and chemical microiontophoresis in the rat brain. Journal of Neuroscience Methods. 306, 68-76 (2018).
check_url/pt/62596?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Wallin, D. J., Sullivan, E. D. K., Bragg, E. M., Khokhar, J. Y., Lu, H., Doucette, W. T. Acquisition of Resting-State Functional Magnetic Resonance Imaging Data in the Rat. J. Vis. Exp. (174), e62596, doi:10.3791/62596 (2021).

View Video