Summary

Создание Крыса Модель Высшего Стрельца-Синус окклюзии с помощью метода thread-Embolism

Published: July 04, 2021
doi:

Summary

Здесь мы устанавливаем новую крысиную модель Sprague-Dawley (SD) превосходного тромбоза сагиттала (SSS) с помощью метода эмболизации резьбы, и была проверена стабильность и надежность модели.

Abstract

Механизмы, способствующие естественному наступлению тромбоза венозной пазухи головного мозга (CVST), в основном неизвестны, и в течение заболевания задействованы различные неконтролируемые факторы, что приводит к большим ограничениям в клинических исследованиях. Таким образом, создание стабильных моделей животных CVST, которые могут стандартизировать различные неконтролируемые смешанные факторы, помогло обойти недостатки в клинических исследованиях. В последние десятилетия были построены различные модели животных CVST, но результаты, основанные на этих моделях, были непоследовательными и неполными. Поэтому для дальнейшего изучения патофизиологических механизмов CVST необходимо создать новую и высокосовеченную модель животных, которая имеет важное практическое значение и научное значение для диагностики и лечения CVST. В настоящем исследовании, роман Спраг-Доули (SD) крыса модель превосходного sagittal пазухи (SSS) тромбоз был создан с помощью метода эмболизации резьбы, и стабильность и надежность модели были проверены. Кроме того, мы оценили изменения в венозном кровотоке головного мозга у крыс после образования CVST. В совокупности модель SD-rat SSS-тромбоза представляет собой новую модель CVST животных, которая легко устанавливается, сводит к минимуму травмы, дает хорошую стабильность, и позволяет точно контролировать ишемическое время и местоположение.

Introduction

Тромбоз венозной пазухи головного мозга (CVST) является редким заболеванием венозной системы головного мозга, что составляет лишь 0,5-1,0% всех причин инсульта, но имеет относительно высокий уровень возникновения у детей и молодыхвзрослых 1. Во время вскрытия, CVST было установлено, что причиной 10% цереброваскулярных заболеваний смертей2. Тромбоз может возникнуть в любой части внутричерепной венозной системы. Превосходный sagittal пазухи (SSS) является одним из наиболее часто пострадавших районов в CVST и может включать в себя несколько кровеносных сосудов. Из-за стеноза или окклюзии венозных пазух внутричерепных венозных возвращений блокируется, что часто сопровождается повышенным внутричерепнымдавлением 3. Клинические проявления CVST сложны и меняются с течением времени; хотя симптомы не хватает, наиболее распространенными симптомами являются головная боль (77,2%), судороги (42,7%) и неврологический дефицит (39,9%). В тяжелых случаях кома и даже смерть могутпроизойти 4,5. В последние годы в связи с общим улучшением медицинских и медико-санитарной норм и осведомленности общественности в области здравоохранения доля связанных с этим факторов риска изменилась, доля травм и инфекций снизилась, а доля CVST, вызванного беременностью, puerperium, оральными контрацептивами и другими причинами,постепенно увеличилась на 5.

В настоящее время патогенез CVST до сих пор не до сих пор хорошо изучен. Для углубленного изучения CVST необходимы дальнейшие патофизиологические исследования. Тем не менее, большинство из этих методов исследования являются инвазивными и, следовательно, трудно реализовать клинически. Из-за многочисленных ограничений клинических исследований модели животных имеют незаменимые преимущества с точки зрения фундаментальных и трансляционных исследований.

Причина CVST является сложной, так как его первоначальное начало часто не признается и расположение образования тромба является весьма переменной. К счастью, модели животных могут лучше контролировать эти факторы. За последние несколько десятилетий было создано множество моделей животных CVST, и каждая модель имеет свои недостатки. Согласно различным методам производства, они могут быть примерно разделены на следующие категории: простая модель SSS-перевязки6,7; SSS внутренне-инъекционный ускоритель модели8; феррик-хлорид-индуцированной SSS тромбоз модели9; фотохимический индуцированный тромбоз ССЗ модель10; и самодельные эмболии-окклюзии SSS модель11. Тем не менее, большинство из этих моделей не в состоянии обойти инвазивные повреждения коры головного мозга животного и не в состоянии точно контролировать ишемическое время и местоположение. В некоторых моделях тромб будет реканализировать спонтанно; в других моделях, SSS становится постоянно закрыты. Кроме того, сложные операции и/или серьезные травмы могут повлиять на последующие патофизиологические выводы в этих моделях.

В настоящем исследовании, вилка потока была вставлена в SSS крыс Sprague-Dawley (SD) для успешного создания модели CVST, которая минимизировала ущерб, позволила точно контролировать и дала хорошую стабильность. Кроме того, для проверки эффективности модели были объединены магнитно-резонансная томография (МРТ) и лазерная визуализация кровотока. Мы оценивали изменения мозгового кровотока до и после создания нашей модели, а также оценивали стабильность нашей модели, закладывая основу для дальнейших исследований, исследующих возникновение, развитие и связанные с ней патофизиологические механизмы CVST.

Protocol

Процедуры с участием животных были одобрены Комитетом по медицинским нормам и этике Медицинского университета Вэньчжоу и соответствуют китайскому законодательству об использовании и уходе за лабораторными животными. 1. Подготовка нити штепсельной вилки, SD крыс и экспер…

Representative Results

Для создания модели SD-rat SSS-тромбоза с помощью метода шва, швы должны быть подготовлены заранее(рисунок 1A), и оборудование, необходимое для эксперимента(рисунок 1B) должны быть подготовлены. В связи с деликатным характером операции, подготовка модели должн?…

Discussion

В этом исследовании, новый тип модели CVST был успешно создан путем вставки самодельных нить плагин в SSS SD крыс. Кроме того, лазерно-пятнистая визуализация кровотока и МРТ мелкого животного были объединены для мониторинга изменений кровотока на поверхности мозга крыс SD до и после эмболиз?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Это исследование было поддержано грантом Научно-исследовательский фонд для талантов высокого уровня, Фуцзяньский университет традиционной китайской медицины (X2019002-таланты).

Materials

2 mL syringe Becton,Dickinson and Company 301940
brain stereotaxic instrument Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd 68025
dissecting microscope Wuhan SIM Opto-technology Co. SIM BFI-HR PRO
high-speed skull drill Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd 78046
laser-speckle blood-flow imaging system Wuhan SIM Opto-technology Co. SIM BFI-HR PRO
needle holder Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F31022-12
needle thread Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F33303-08
scissors Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd S13029-14
silica gel Heraeus Kulzer 302785
small animal anesthesia machine Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd R540
small-animal MRI Bruker Medical GmbH Biospec 94/30 USR
tweezers Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F11029-11
vascular forceps Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F22003-09

Referências

  1. Bousser, M. G., Ferro, J. M. Cerebral venous thrombosis: an update. Lancet Neurology. 6 (2), 162-170 (2007).
  2. Guenther, G., Arauz, A. Cerebral venous thrombosis: A diagnostic and treatment update. Neurologia. 26 (8), 488-498 (2011).
  3. Stam, J. Thrombosis of the cerebral veins and sinuses. New England Journal of Medicine. 352 (17), 1791-1798 (2005).
  4. Einhäupl, K., et al. EFNS guideline on the treatment of cerebral venous and sinus thrombosis in adult patients. European Journal of Neurology. 17 (10), 1229-1235 (2010).
  5. Coutinho, J. M., Zuurbier, S. M., Stam, J. Declining mortality in cerebral venous thrombosis: a systematic review. Stroke. 45 (5), 1338-1341 (2014).
  6. Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion. Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).
  7. Miyamoto, K., Heimann, A., Kempski, O. Microcirculatory alterations in a mongolian gerbil sinus-vein thrombosis model. Journal of Clinical Neuroscience. 8 (4), (2001).
  8. Ungersböck, K., Heimann, A., Kempski, a. O. Cerebral Blood Flow Alterations in a Rat Model of Cerebral Sinus Thrombosis. Stroke. 24 (4), (1993).
  9. Röttger, C., et al. A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes. Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).
  10. Chen, C., et al. Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis. Neurociência. 306, 39-49 (2015).
  11. Yang, H., Meng, Z., Zhang, C., Zhang, P., Wang, Q. Establishing a new rat model of central venous sinus thrombosis and analyzing its pathophysiological and apoptotic changes. Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 130-135 (2012).
  12. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  13. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).
  14. Wang, E., et al. Mapping tissue pH in an experimental model of acute stroke – Determination of graded regional tissue pH changes with non-invasive quantitative amide proton transfer MRI. Neuroimage. 191, (2019).
  15. Liu, C., et al. Identification of Vigilin as a Potential Ischemia Biomarker by Brain Slice-Based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment. Analytical Chemistry. 91 (10), 6675-6681 (2019).

Play Video

Citar este artigo
Jiang, W., Jin, C., Xu, W., Li, Y., Lin, Y., Liang, S., Wang, W. Establishment of a Rat Model of Superior Sagittal-Sinus Occlusion via a Thread-Embolism Method. J. Vis. Exp. (173), e62118, doi:10.3791/62118 (2021).

View Video