हम नवजात कार्डियक मैक्रोफेज जुदाई और प्रत्यारोपण के लिए एक वयस्क माउस दिल में एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं, जो हृदय की मरम्मत को बढ़ावा देने का एक आशाजनक तरीका हो सकता है।
एक घायल नवजात मायोकार्डियम में, मैक्रोफेज कार्डियोमायोसाइट प्रसार और एंजियोजेनेसिस की सुविधा प्रदान करते हैं और हृदय उत्थान को बढ़ावा देते हैं। वर्तमान अध्ययन से पता चलता है कि चोट द्वारा भर्ती नवजात कार्डियक मैक्रोफेज का प्रत्यारोपण हृदय समारोह और कार्डियोमायोसाइट प्रसार में सुधार के साथ मायोकार्डियल इंफेक्शन के बाद वयस्क हृदय उत्थान को बढ़ावा देता है । परिणामों से संकेत मिलता है कि नवजात कार्डियक मैक्रोफेज प्रत्यारोपण हृदय की चोट के इलाज के लिए एक आशाजनक रणनीति हो सकती है । यहां, हम तकनीकी विवरण प्रदान करते हैं, जिसमें एपिकल रिसेक्शन-घायल नवजात माउस दिलों से नवजात हृदय मैक्रोफेज का अलगाव, मायोकार्डियल-इनफार्केक्टेड वयस्क चूहों में मैक्रोफेज का प्रत्यारोपण, और मैक्रोफेज ग्राफ्टेड ग्राफ्ट के बाद हृदय उत्थान का अनुमान शामिल है।
हृदय की चोट के बाद हृदय कार्य को ठीक करने और हृदय की विफलता से बचाने के लिए हृदय उत्थान एक आशाजनक रणनीति है1,2,3. मायोकार्डियल चोट के बाद, मैक्रोफेज घायल हृदय में घुसपैठ करते हैं और नवजात हृदय उत्थान 4 ,5,6 के दौरानप्रमुख कारकों के रूप मेंखोजेगए हैं। नेक्रोटिक सेलुलर मलबे को साफ करने और सूजन को प्रेरित करने के अलावा, मैक्रोफेज नवजात चूहों मायोकार्डियल इंफेक्शन के बाद एंजियोजेनेसिस5 और कार्डियोमायोसाइट प्रसार7 को बढ़ावा देते हैं।
हमारा पिछला अध्ययन दिखाता है कि घायल नवजात हृदय से अलग नवजात हृदय मैक्रोफेज का प्रत्यारोपण वयस्क हृदय उत्थान को बढ़ाता है7,यह दर्शाता है कि नवजात हृदय मैक्रोफेज प्रत्यारोपण हृदय की चोट के इलाज के लिए एक आशाजनक रणनीति हो सकती है । यहां हम तकनीकी विवरण प्रदान करते हैं, जिसमें एपिकल रिसेक्शन-घायल नवजात माउस दिलों से नवजात हृदय मैक्रोफेज का अलगाव, मायोकार्डियल-इनफार्केक्टेड वयस्क चूहों में मैक्रोफेज का प्रत्यारोपण, और मैक्रोफेज ग्राफ्ट(चित्र 1)के बाद हृदय उत्थान का अनुमान शामिल है।
यहां, हम वयस्क माउस हार्ट पुनर्जनन को बढ़ावा देने के लिए नवजात हृदय मैक्रोफेज तैयार करने, प्राप्त करने और प्रत्यारोपण करने के लिए एक प्रभावी दृष्टिकोण प्रदान करते हैं।
एपिकल रिसेक्शन दिल के उत्थान को प्रोत्साहित करने के लिए एक सरल और प्रभावी ऑपरेशन है। हमने ऑपरेशन10में शामिल जानवरों के अधिकतम जीवित रहने की दर सुनिश्चित करने के लिए एपिकल रिसेक्शन का विवरण अनुकूलित किया है । संज्ञाहरण समय 3 मिनट से अधिक समय नहीं होना चाहिए, जो हाइपोथर्मिया-प्रेरित मौत का कारण बनता है, या 2 मिनट से कम होता है, जो ऑपरेशन के दौरान अत्यधिक रक्तस्राव का कारण बनता है। मानक एपिकल रिसेक्शन को शीर्ष ऊतक के लगभग 1.5 मिमी व्यास को काटना चाहिए था। हालांकि, यहां ऑपरेशन का उद्देश्य हृदय उत्थान प्रक्रिया के दौरान प्रचुर मात्रा में मैक्रोफेज घुसपैठ को प्रोत्साहित करना था। 1.5 मिमी से कम व्यास का रीसेक्शन स्वीकार्य था क्योंकि यह एक ही समय में अधिकतम जीवित रहने की दर और प्रभावी मैक्रोफेज भर्ती की गारंटी दे सकता था। केवल ऑपरेटर की कुशलता ने जीवित रहने की दर को प्रभावित किया, और संचालित चूहे लंबे समय तक ऑपरेशन अवधि से बच नहीं सके। ऑपरेटर को 5 मिनट के भीतर पूरी प्रक्रिया पूरी करनी चाहिए।
हमारे पूर्व अध्ययन में, हमने पाया कि तीव्र सूजन नवजात हृदय उत्थान को बढ़ावा दिया । इम्यूनोजेनिक जाइमोसन के इंट्रामायोकार्डियल माइक्रोइंजेक्शन नवजात माउस हार्ट में एक कण कार्डियोमायोसाइट प्रसार को बढ़ावा देता है6. हाल ही में, मोल्केन्टिन एट अल ने दावा किया कि मैक्रोफेज घुसपैठ जो zymosan ए, सेल मलबे के इंट्राकार्डिएक इंजेक्शन से उत्तेजित होती है, और फ्रीज/गल मारे गए कोशिकाएं हृदय की मरम्मत को बढ़ावा दे सकती हैं, इस बात की पुष्टि करती हैं कि कार्डियोमायोसाइट्स11में अंतर करने वाली स्टेम कोशिकाओं के बजाय कार्डियक रिपेयर में तीव्र सूजन और मैक्रोफेज आवश्यक हैं । सैडेक एट अल5 ने बताया कि मैक्रोफेज एंजियोजेनेसिस के माध्यम से नवजात हृदय उत्थान को बढ़ावा पहुंचा सकता है। हमारे हालिया अध्ययन से पता चला है कि नवजात हृदय मैक्रोफेज इंजेक्शन वयस्क हृदय उत्थान को बढ़ावा दे सकता है और वयस्क कार्डियोमायोसाइट प्रसार की क्षमता को बढ़ा सकता है1,7. नवजात हृदय मैक्रोफेज प्रत्यारोपण वयस्क माउस हृदय उत्थान को बढ़ावा देने के लिए एक आशाजनक रणनीति हो सकती है । यहां हम पुनर्योजी आवेदन विकास पर अधिक शोधकर्ताओं की मदद करने और हृदय उत्थान तंत्र का पता लगाने के लिए प्रोटोकॉल पेश करते हैं।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को चाइनीज एकेडमी ऑफ मेडिकल साइंसेज इनोवेशन फंड फॉर मेडिकल साइंसेज (सीआईएफएमएस, 2016-I2M-1-015), नेशनल की रिसर्च एंड डेवलपमेंट प्रोजेक्ट ऑफ चाइना (2019YFA0801500), नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (एनएसएफसी: 81970243, 81770308), बीजिंग नेचुरल साइंस फाउंडेशन (7172183, 7182140) ने सपोर्ट किया ।
Anti-mouse alpha actinin | Abcam | Ab9465 | |
Anti-phospho-Histone H3 | Millipore | 06-570 | |
Anti-rabbit Aurora B | Abcam | Ab239837 | |
Anti-rabbit Ki67 | Abcam | Ab15580 | |
gentleMACS Octo Dissociator | Miltenyi Bio Tech, Teterow, Germany | N/A | |
Goat anti-mouse Alexa Fluor 555 | Invitrogen | A-21137 | |
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A-11008 | |
Neonatal Heart Dissociation Kit | Miltenyi Bio Tech, Teterow, Germany | 130-098-373 |