מטרת פרוטוקול זה היא ליצור ארובות הידרותרמיות מדומות באמצעות ניסויים בהזרקת גינה כימית ולהציג שיפוע תרמי על פני קרום המשקעים הלא אורגני, באמצעות מדחוס 3D להדפסה שניתן לשחזר למטרות חינוכיות.
פתחי אוורור הידרותרמיים במעמקי הים הם משקעים המארגנים את עצמם שנוצרו מפירוק גיאוכימי והוצעו כתפאורה אפשרית להופעת החיים. הצמיחה של ארובות הידרותרמיות בסביבה שיפועית תרמית בתוך מערכת אוורור מוקדמת של כדור הארץ דומה בהצלחה באמצעות סימולנטים הידרותרמיים שונים, כגון נתרן גופרתי, אשר הוזרקו לתוך סימולנט אוקיינוס כדור הארץ מוקדם המכיל ברזל ברזל מומס. יתר על כן, מנגנון פותח כדי לקרר מספיק את סימולנט האוקיינוס קרוב 0 °C (5 °F) בכלי עיבוי שקוע באמבט מים קרים תוך הזרקת פתרון גופרתי בטמפרטורות חמות לחדר, למעשה יצירת מבנה ארובה מלאכותית בסביבה שיפוע טמפרטורה על פני תקופה של כמה שעות. ניסויים כאלה עם כימיה שונה ושיפועי טמפרטורה משתנים הביאו למגוון מורפולוגיות במבנה הארובה. השימוש בסימולנטים של נוזלים ימיים והידרותרמיים בטמפרטורת החדר הביא לארובות אנכיות, בעוד שהשילוב של נוזל הידרותרמי חם וסימולנט אוקיינוס קר מנע היווצרות של מבני ארובות חזקים. המרוכז המודפס בתלת-ממד הניתן להתאמה אישית שנוצר עבור מחקר זה משמש ככלי תגובה ז’קט שניתן לשנות בקלות ולהשתמש בו על ידי חוקרים שונים. זה יאפשר שליטה זהירה של קצב הזרקה הרכב כימי של סימולנטים אוורור ואוקיינוס, אשר אמור לעזור לדמות במדויק תגובות פרה-ביוטיות במערכות ארובות עם שיפועים תרמיים דומים לאלה של מערכות טבעיות.
ארובות הידרותרמיות הן משקעי גינה כימיים המארגנים את עצמם המופקים מדיסקווילבריה גיאוכימית בסביבות אוורור במעמקי הים, כאשר נוזל מחומם ומשתנה הידרותרמית מחלחל לאוקיינוס קר יותר. בתרחיש מוקדם של כדור הארץ, הוצע כי הארובות נוצרו בפתחי פתחים אלקליין עתיקים, וכי מעבר pH / redox / כימי שיפועים יכול היה להניע תגובות לקראת הופעת חילוף החומרים1,2,3,4,5,6. פתחי אוורור הידרותרמיים הונחו גם על כוכבי לכת אחרים, כולל עולמות האוקיינוס, אירופה ואנצלדוס7,8,9,10. ניסויים שונים נערכו כדי לדמות היבטים של הכימיה ההידרותרמית ההידרותרמית הקדם-ביוטית המוצעת, כולל משקעים של מינרלים זרזליטיים מברזל גופרתי שיכולים להפחית CO211,12, סינתזה אורגנית מונעת שיפוע13,14,15,ושילוב של אורגנים לתוך מבני ארובה16. ביצירת מערכים ניסיוניים לחיקוי פתחי אוורור הידרותרמיים, בין אם בכדור הארץ או בעולמות אחרים, חיוני לשקול את השיפועים הגיאוכימיים ואת האופי הפתוח, רחוק משיווי המשקל של המערכת כדי לייצר סימולציות מציאותיות.
בנוסף pH, redox, ושיפועים כימיים, פתחים הידרותרמיים גם לכפות שיפוע תרמי על פני קרום הארובה / הקיר בשל הזנה של נוזל אוורור מחומם לסביבת קרקעית ים קרה. טמפרטורות האוקיינוס בקרקעית הים הקרה יכולות להשתנות כפונקציה של עומק, חדירה סולארית ומליחות; עומק האוקיינוס הממוצע בקרקעית הים באתרי אוורור (בעיקר ברכסי אמצע האוקיינוס) נמצאים בטווח של 0-4 מעלותצלזיוס. בהתאם לסוג פתח האוורור, השיפוע התרמי בין האוקיינוס לנוזל האוורור יכול להשתנות באופן דרמטי – מהשיפועים המתונים יותר של פתחי האוורור האלקליין, כגון Lost City18,19 או השדה ההידרותרמי סטריטן שבו נוזל האוורור הוא 40-90 °C(20°F),21, למעשנים השחורים בקרקעית הים העמוקה שבהם נוזל האוורור יכול להגיע לכמה מאות מעלות צלזיוס22, 23,24,25. מנקודת מבט של מקור החיים, סימולציה של שיפועים תרמיים במערכות הידרותרמיות היא משמעותית שכן הם יכולים להשפיע על מינרלוגיה ותגובה כימית של משקעים ארובות3,13 ו / או יכול להשפיע על מגורים כמו ארובות הידרותרמיות מארחים חיידקים שלוקחים אלקטרונים ישירות ממשטחים מינרליים26. בשיפוע על פני קיר הארובה, מגוון של תנאי טמפרטורה יהיה נוכח על פני מרחק קצר, וקיר הארובה מייצג שילוב של מינרלים ותגובות האופייניים לכל המשטרים התרמיים האלה.
ארובות הידרותרמיות שגודלו במעבדה בשיפועים תרמיים דומות כדי לחקור את ההשפעות של האוקיינוס הקר והנוזל ההידרותרמי החם על הסביבה הקדם-ביוטית הפוטנציאלית הזו. בדרך כלל, מכיוון שגידול ארובות הידרותרמיות מדומות באמצעות שיטת הזרקה עם פנים מחוממת וחוץ קר מציב אתגרים מעשיים, ניסויי הארובה הנגישים ביותר נעשים בלחץ סביבתי (ולכן אינם דורשים כורים יקרים ומסובכים). ניסיונות קודמים בארובות שגודלו במעבדה בשיפוע תרמי לא הצליחו לייצר גם נוזל הידרותרמי חם/חם וגם אוקיינוס קר. במאמץ לשמור על הארובה כולה בטמפרטורה גבוהה למשך זמן רב כדי ליצור מינרלים תגובתיים שיכולים לגרום לתגובות אורגניות, כמה מחקרים חיממו את כל הניסוי (אוקיינוס ונוזל הידרותרמי) ל ~ 70 מעלות צלזיוס באמצעות ז’קט חימום או אמבטיה חמה13,14. סוג אחר של ניסוי היווצרות מזרז ארובה, במנגנון “תא דלק”, יצר את קיר הארובה סימולנט על תבנית ממברנה שטוחה; ניסויים אלה גם התחממו בכמויות גדולות על ידי טביעת מנגנון שיפוע תא הדלק באמבט מים חמים27,28. מחקרים קודמים יצרו ארובות הידרותרמיות מדומות מנוזלים הידרותרמיים חמים (מחומם לכ -70 מעלות צלזיוס בשיטות שונות) מוזרק לתוך אוקיינוס בטמפרטורת החדר3,12; עם זאת, לא נעשה ניסיון לאוקיינוס קר.
עבודה זו מקדמת שיטות לסימולציות מעבדת צמיחת ארובות פרה-ביוטיות 4 כדי ליצור שיפועתרמי מציאותי מאוקיינוס קר (0-5 מעלות צלזיוס) לנוזל הידרותרמי מחומם שבו לסנתז חומרי ארובה ולבדוק תכונות מעניינות. עד כה, לא נערכו ניסויי ארובה פרה-ביוטיים בהצלחה עם שיפוע טמפרטורה מציאותי לפתחי אוורור אלקליין: עם פתרון האוורור הפנימי המוחזק ב- ~ 70 מעלות צלזיוס ופתרון האוקיינוס החיצוני מקורר לכ – 5 מעלות צלזיוס. יתר על כן, בניסויי הארובה המחוממים המעטים שנערכו, ההתקנה הניסיונית מורכבת ויכולה להיות יקרה. לניסויי גנים כימיים יש פוטנציאל גדול להניב תובנות על התהליכים שאולי התרחשו בפתחי אוורור הידרותרמיים על כדור הארץ המוקדם. לפיכך, היכולת להגדיר במהירות וריאציות מרובות של ניסוי ארובה היא יתרון, כמו גם את היכולת יש מנגנון פשוט כי הוא זול, לא שביר, שונה בקלות, ואידיאלי עבור התלמידים לעבוד עם. מוצג כאן מנגנון חדשני (איור 1) שנועד להקל על צמיחת ארובה הידרותרמית מדומה תוך שמירה וניטור שיפוע תרמי מציאותי בין האוקיינוס הקר לבין סימולנט נוזל הידרותרמי מחומם. מנגנון ניסיוני זה דומה בעיצובו לכור ז’קט, אך הוא מחזק מודפס תלת מימדי (תלת מימדי) שניתן לייצר בקלות על ידי כל קבוצת מחקר המעוניינת לערוך ניסויים דומים (ראה קובץ הניתן להדפסה משלימה ). באמצעות מחזק מודפס תלת-ממדי זה, נערכו ניסויי ארובה הדרגתית תרמית כדי לבדוק את התועלת של מנגנון זה לשמירה על שיפועי טמפרטורה חזקים ולבחון את ההשפעות של שיפועי טמפרטורה על מבנה הארובה והמורפולוגיה.
ההשפעה של שיפועים תרמיים על צמיחת ארובות מדומה: מנגנון ניסיוני זה הניב מספר וריאציות מורפולוגיות ארובות שנבעו ממספר פרמטרים ניסיוניים. ארובות של ברזל גופרתי וברזל הידרוקסיד יצרו מבנים זקופים גבוהים בטמפרטורת החדר, אך יצרו משקעים קלושים יותר, מחוספסים או תלוליות שטוחות בניסויים השיפוע התרמי. זה היה עולה בקנה אחד עם הממצאים של הרשי ואח ‘שבו משקעים ארובה דקיקים, לא זקופים נוצרו מנוזל הידרותרמי מחומם ל 70-80 °C (70 °F) והוזרק לתוך סימולנט האוקיינוס בטמפרטורת החדר33. ישנם הסברים אפשריים שונים לכך: העברת חום קונבקטיבית יכולה לגרום לכוחות ציפה טבעיים יותר (יחד עם שאיבת הזריקה הכפויה) כדי לגרום למזרז לזרום במהירות לכיוון החלק העליון של כלי הים כפי שהוא נוצר. לחלופין, חימום נוזל המזרק הופך את הסימולנט ההידרותרמי לפחות צפוף ולכן נוטה יותר לעלות אנכית מאשר לייצב על גבי נקודת ההזרקה. ייתכן כי השפעה זו יכולה להיות מקלה על ידי שינוי קצב הזרקת המזרק לשיעורים איטיים יותר כדי לאפשר צמיחה של מבנה יציב יותר. לבן ואח ‘ בדק צמיחת ארובת ברזל גופרתית עם סימולנט הידרותרמי מוזרק בקצבים איטיים מאוד (0.08 מ”ל / שעה), ולמרות הארובה לקח ימים להתמזג, זה היה יציב מבחינה מבנית13. כמו הרשי ואח ‘ בשימוש משאבות peristaltic בקצבי הזרקה של 10-120 mL / h, שהוא כמה סדרי גודל מהר יותר מאשר השיעורים המשמשים בניסויים שיפוע תרמי שלנו, זה לא מפתיע כי הם גם ייצרו מבני ארובה דמויי מחרוזת33.
ריכוזים גבוהים יותר של מגיבים מזרזים באוקיינוס ופתרונות אוורור יכולים גם להניב ארובות חזקות יותר בשיפועים תרמיים. ריכוזים כימיים גבוהים יותר של יונים מזרזים (גופרתי או הידרוקסיד) בנוזל הידרותרמי או בסימולנט האוקיינוס יכולים להוביל למסה גבוהה יותר של משקעים, ובכך ליצור מבנה חזק יותר. כמו הרשי ואח ‘ ו White et al. השתמשו בריכוזים נמוכים יותר של גופרית בנוזל הידרותרמי (10 מ”מ), המבנים שלהם היו קטנים יותר מאלה המיוצרים בעבודה זו באמצעות ריכוזי גופרית גבוהים יותר (20-50 מ”מ). בנוסף, כמה מחקרים של צמיחת ארובת ברזל גופרתית כללו גם סיליקה בנוזל ההידרותרמי יחד עם נתרן גופרתי, אשר יכול לעזור לייצר ארובות חזקות יותר3,13,33. מבני גן כימיים סיליקה שימשו גם כדי לדמות היבטים של צמיחת ארובה הידרותרמית34, ואלה נוטים לייצר מבנים חזקים מאוד שניתן להסיר מן הצינור / בקבוקון לניתוח פיזי. עם זאת, ההשפעות של שיפועי טמפרטורה על מבני הזרקת סיליקה אינם ידועים ויהיו תחום של מחקר נוסף.
שיקולים לניסויי סימולציה עתידיים של ארובה: המנדייזר המודפס בתלת-ממד שנוצר במחקר זה כדי לקרר את כלי השיט של האוקיינוס פעל כמו כלי תגובה מכוער, אך עם כמה שיפורים מעשיים: 1) החלק העליון הפתוח אפשר דגימה של הארובה ושמירה על מרחב הראש של האוקיינוס האנוקסי; 2) החלק המודפס בתלת-ממד העניק יכולת רבייה קלה; 3) מכיוון שניתן לערוך את העיצובים באופן דיגיטלי, ניתן לשנות במהירות את המנגנון ולהדפיס אותו מחדש אם תרצה; ו-4) השימוש בחומרים זולים הפך כל מחזק לחסכוני יותר מכלי התגובה עם מעיל הזכוכית בפועל. מעבים מודפסים בתלת-ממד אלה הם מנגנון ניסיוני גמיש ומשותף בקלות שיכול להיות דרך שימושית לתקנן פלטפורמות לניסויי ארובות הידרותרמיים מדומים בקבוצות מחקר שונות, ומאפשר השוואה טובה יותר של דגימות ונתונים. ניתן לשלוח קבצים של המעיב לעמיתים כדי להדפיס בכוחות עצמם למטרותיהם החינוכיות או המדעיות (ראה קובץ הדפסה תלת-ממדי משלים של המעיב המשמש בעבודה זו). התקנה זולה זו יכולה לשמש גם כניסוי מעבדה לתואר ראשון עבור גנים כימיים או כימותרפיה29,35.
לסיכום, עבודה זו מתארת מנגנון ניסיוני חדשני באמצעות הדפסת תלת-ממד כדי להקל על הצמיחה של ארובות הידרותרמיות מדומות בסביבות שיפוע טמפרטורה. המדחוס המודפס בתלת-ממד מסוגל לקרר את סימולנט האוקיינוס לטמפרטורות כמעט קפואות, בדומה למי הים ליד מערכות הידרותרמיות בקרקעית הים. בינתיים, מזרק מחומם שימש כדי לדמות את הנוזל ההידרותרמי בטמפרטורה גבוהה מוזרק לתוך האוקיינוס הקר הזה. המורפורוגיות והמבנים של ארובות ברזל גופרתיות וברזל הידרוקסיד הושפעו מהשיפוע התרמי: כאשר גם האוקיינוס וגם סימולנט הנוזל ההידרותרמי היו בטמפרטורת החדר, הארובות יצרו מבנים מכוונים אנכית, אך כאשר הנוזל ההידרותרמי היה מחומם והאוקיינוס התקרר, היווצרות מבני ארובה חזקים התעכבה. כדי לדמות במדויק תגובות פרה-ביוטיות במערכות ארובות כאלה עם שיפועים תרמיים הדומים לאלה של מערכות טבעיות, יהיה צורך לשלוט בקפידה בפרמטרים כגון קצב הזרקה והרכב כימי של סימולנטים אוורור ואוקיינוס. המרוכז המודפס בתלת-ממד המותאם אישית והזול שנוצר עבור מחקר זה דומה בתפקודו לכלי תגובה מכובס וניתן לשנות ולהפיץ אותו בקלות אלקטרונית לקבוצות מחקר וחינוך שונות לשימוש בסוגים רבים של ניסויים כימותרפיים.
The authors have nothing to disclose.
מחקר זה בוצע במעבדה להנעה סילונית, המכון הטכנולוגי של קליפורניה, תחת חוזה עם נאס”א, בתמיכת המכון האסטרוביולוגי של נאס”א, עולמות קרח. ד”ר גבריאל לבלנק נתמך בחלקו על ידי מענק חניכה מחקר (2017-34) באמצעות הסכם שיתוף הפעולה EPSCoR של אוקלהומה נאס”א (NNX15AK42A). ברצוננו להודות להת’ר וייטהד על הסיוע עם עיצוב המרוכז המודפס בתלת-ממד, קאלינד קרפנטר על הסיוע בהדפסת תלת-ממד, ג’ון-פול ג’ונס לדיון מועיל על כלי עיבוי, לורה רודריגז לעזרה בניתוח נתוני טמפרטורה, ואריקה פלורס בסיוע מעבדה. זכויות יוצרים 2020 המכון הטכנולוגי של קליפורניה.
3/8-Inch Clear Vinyl Tubing | Watts | SVIG10 | Cut to desired length for experiment |
40-pin Male to Female Wire Jumper Multicolored Ribbon Cables | EDGELEC | ED-DP_L30_Mix_120pcs | These wires will require stripping of plastic ends and carefully removing one of the 2 plastic casings |
Aluminum seals | Fisher | 0337523C | Thermo Scientific National Headspace 20 mm Crimp Seals |
Ferric chloride hexahydrate | Fisher | I88-100 | Ferric Chloride Hexahydrate (Lumps/Certified ACS) |
Ferrous chloride tetrahydrate | Fisher | I90500 | Ferrous Chloride Tetrahydrate (Crystalline/Certified) |
Gear Hose Clamps | Glarks | 40Pcs | |
Gray butyl stoppers | Fisher | 0337522AA | Thermo Scientific National 20 mm Septa for Headspace Vials |
Pipette tips | VWR | 53511-682 | pipette tips 0.5-10 microliters |
Serum bottles | Sigma-Aldrich | 33110-U | Vials, crimp top, serum bottle, size 100 mL, clear glass, outer diameter x height 51.7 mm x 94.5 mm. For these experiments, the bottom of the serum bottle should be cut off. |
Sodium hydroxide | Sigma-Aldrich | S5881 | reagent grade, ≥98%, pellets (anhydrous) |
Sodium sulfide nonahydrate | Fisher | S425212 | Sodium Sulfide Nonahydrate (Crystalline/Certified ACS). Store at -20 °C. Only open in a glove box or fume hood. Releases toxic H2S gas; all sulfide-containing solutions must be kept in a glove box or fume hood. |
syringe heater | Syringepump.com | HEATER-KIT-5SP | Clamp gear hose clamps around heating blanket |
Syringe needles (16 gauge) | Fisher | 14-826-18B | BD General Use and PrecisionGlide Hypodermic Needles, 16 G x 1.5 in. (38 mm) |
Syringe Pump | Syringepump.com | NE-4000 | Dual or multiple channel, depending on desired number of simultaneous experiments |
Syringes (10 mL) | Fisher | 14-823-16E | BD Syringe with Luer-Lok Tips (Without Needle) |
Tubing | Cole Parmer | EW-06407-71 | Tygon Lab Tubing, Non-DEHP, 1/16" internal diameter X 1/8" outer diameter |
Water Circulation Pump | Bayite | BYT-7A015 | May need two people to help prime pump |