מאמר זה מציג שיטה של בקיעה ללא שימוש קליפת ביצה למחקרים טוקסיקולוגיים של מזהמי חלקיקים כגון מיקרופלסטיק.
מיקרופלסטיק הוא סוג מזהם עולמי מתפתח המהווה איום בריאותי גדול על בעלי חיים בשל ספיגתם והעברתם ברקמות ובאיברים של בעלי חיים. השפעות אקולוגיות של מיקרופלסטיק על התפתחות עוברים ציפורים אינן ידועות. ביצת הציפור היא מערכת פיתוח ותזונה מלאה, וכל התפתחות העובר מתרחשת על קליפת הביצה. לכן, תיעוד ישיר של התפתחות העובר ציפור תחת הלחץ של מזהמים כגון מיקרופלסטיק מוגבל מאוד על ידי קליפת ביצה אטומה בקיעה המסורתית. במחקר זה, ההשפעות של מיקרופלסטיק על התפתחות עובר שליו היו מנוטרים חזותית על ידי בקיעה ללא קליפת ביצה. השלבים העיקריים כוללים ניקוי וחיטוי של ביצים מופרות, דגירה לפני החשיפה, הדגירה לטווח קצר לאחר החשיפה, ואת מיצוי המדגם. התוצאות מראות כי בהשוואה לקבוצת הביקורת, המשקל הרטוב ואורך הגוף של הקבוצה החשופה למיקרופלסטיק הראו הבדל סטטיסטי ושיעור הכבד של כל הקבוצה החשופה גדל באופן משמעותי. בנוסף, הערכנו גורמים חיצוניים המשפיעים על הדגירה: טמפרטורה, לחות, זווית סיבוב ביצה, ותנאים אחרים. שיטה ניסיונית זו מספקת מידע רב ערך על האקוטוקסיולוגיה של מיקרופלסטיק ודרך חדשנית לחקור את ההשפעות השליליות של מזהמים על התפתחות העוברים.
ייצור פסולת הפלסטיק היה כ-6,300 הרים בשנת 2015, עשירית ממנו מוחזר, והשאר נשרף או נקבר מתחת לאדמה. ההערכה היא כי כ -12,000 הר של פסולת פלסטיק ייקבר מתחת לאדמה עד 20501. עם תשומת הלב של הקהילה הבינלאומית לפסולת פלסטיק, תומפסון הציע לראשונה את הרעיון של מיקרופלסטיק בשנת 20042. מיקרופלסטיק (MPs) מתייחס פלסטיק חלקיקים קטנים עם קוטר חלקיקים פחות מ 5 מ”מ. כיום, חוקרים זיהו את נוכחותם בכל מקום של חברי פרלמנט בקו החוף של יבשות שונות, האיים האטלנטיים, האגמים היבשתיים, הקוטב הצפוני ובתי גידול במעמקי הים3,4,5,6,7. לכן, חוקרים נוספים החלו לחקור את הסיכונים הסביבתיים של חברי פרלמנט.
אורגניזמים יכולים לבלוע חברי פרלמנט בסביבה. חברי פרלמנט נמצאו במערכת העיכול של 233 אורגניזמים ימיים ברחבי העולם (כולל 100% מיני צבים, 36% מיני כלבי ים, 59% מיני לווייתנים, 59% מיני עופות ים, 92 סוגים של דגי ים ו -6 סוגים של חסרי חוליות)8. יתר על כן, חברי פרלמנט עשויים לחסום את מערכת העיכול של האורגניזמים, לצבור ולעבור בבובות שלהם9. נמצא כי חברי פרלמנט ניתן להעביר באמצעות שרשרת המזון, ואת צריכתם שונה עם השינויים של בית הגידול, שלב הצמיחה, הרגלי האכלה, ומקורותמזון 10. כמה חוקרים דיווחו על קיומם של חברי פרלמנט גללים של עופותים 11, כלומר עופות ים לפעול כנשא של חברי פרלמנט. בנוסף, בליעה של חברי פרלמנט יכולה להשפיע על בריאותם של אורגניזמים מסוימים. לדוגמה, חברי פרלמנט יכולים להסתבך במערכת העיכול, ובכך להגדיל את התמותה של cetaceans12.
חברי פרלמנט לבדם יש השפעות רעילות על אורגניזמים, כמו גם השפעות רעילות משותפות על אורגניזמים עם מזהמים אחרים. בליעה של ריכוזים הקשורים לסביבה של פסולת פלסטיק עלולה להפריע לתפקוד המערכת האנדוקרינית של דגים בוגרים13. גודל המיקרופלסטיק הוא אחד הגורמים החשובים המשפיעים על ספיגתם והצטברותם על ידי אורגניזמים14,15. הפלסטיק בגודל קטן, במיוחד הפלסטיק בגודל ננו, נוטים אינטראקציה עם תאים ואורגניזמים עם רעילות גבוהה16,17,18,19. למרות ההשפעות המזיקות של מיקרופלסטיק בגודל ננו-חלקיקים על אורגניזמים עולה על רמת המחקר הנוכחית, זיהוי וכימות של מיקרופלסטיק עם גדלים פחות מכמה מיקרומטרים, במיוחד תת מיקרו מיקרומטר / ננו-פלסטיק בסביבה, הוא עדיין אתגר גדול. בנוסף, ננו-פלסטיק יש גם כמה השפעות על עוברים. פוליסטירן יכול לפגוע בהתפתחות עוברים של קיפודי ים על ידי ויסות פרופילי חלבון וגנים20.
כדי לחקור את ההשפעה הפוטנציאלית של חברי פרלמנט על אורגניזמים, ערכנו את המחקר הזה. בשל הדמיון בין עוברים ציפורים ועוברים אנושיים, הם משמשים בדרך כלל במחקר ביולוגי התפתחותי21 כולל אנגיוגנזה ו antiangiogenesis, הנדסת רקמות, שתל ביו חומרי, וגידולים במוח22,23,24. לעוברי ציפורים יש את היתרונות של עלות נמוכה, מחזור תרבות קצר ותפעול קל25,26. לכן, בחרנו עוברים שליו עם מחזור צמיחה קצר כחיה ניסיונית במחקר זה. בו זמנית, אנו יכולים לצפות ישירות בשינויים המורפולוגיים של עוברים שליו שנחשפו לחברי פרלמנט במהלך שלב ההתפתחות העוברית באמצעות טכנולוגיית בקיעה ללא קליפת ביצה. החומרים הניסיוניים בהם נעשה שימוש היו פוליפרופילן (PP) ופוליסטירן (PS). מכיוון ש- PP ו- PS27 מהווים את השיעור הגדול ביותר של סוגי פולימרים המתקבלים משקעים וגופי מים ברחבי העולם, סוגי הפולימר הנפוצים ביותר המופקים מאורגניזמים ימיים שנתפסו הם אתילן ופרופילן28. פרוטוקול ניסיוני זה מתאר את כל התהליך להערכה חזותית של השפעות טוקסיקולוגיות של חברי פרלמנט על עוברים שליו שנחשפו לחברי פרלמנט. אנו יכולים בקלות להרחיב שיטה זו כדי לבחון רעילות של מזהמים אחרים להתפתחות העובר של בעלי חיים אחרים.
מאמר זה מספק תוכנית ניסיונית יעילה להערכת התפתחות העובר שליו על ידי זיהוי מדדי הפיתוח הבסיסיים. עם זאת, יש עדיין כמה מגבלות לניסוי זה.
ראשית, התמותה של עוברים שליו בשלב מאוחר יותר של הבקיעה גבוהה יותר בגלל הבקיעה ללא קליפה. ישנם גורמים בלתי נשלטים באופן מלאכותי כגון הרס של י?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי פרויקטים מרכזיים של מחקר ופיתוח באזור האוטונומי שינג’יאנג אויגור (2017B03014, 2017B03014-1, 2017B03014-2, 2017B03014-3).
Multi sample tissue grinder | Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd. | Tissuelyser-24 | Grind large-sized plastics into small-sized ones at low temperature |
Electronic balance | OHAUS corporation | PR Series Precision | Used for weighing |
Fertilized quail eggs | Guangzhou Cangmu Agricultural Development Co., Ltd. | Quail eggs for hatching without shell | |
Fluorescent polypropylene particles | Foshan Juliang Optical Material Co., Ltd. | Types of plastics selected for the experiment | |
Incubator | Shandong, Bangda Incubation Equipment Co., Ltd. | 264 pc | Provide a place for embryo growth and development |
Nanometer-scale polystyrene microspheres | Xi’an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. | 100 nm, 200 nm, 500 nm | Types of plastics selected for the experiment |
Steel ruler | Deli Group | 20 cm | Used to measure length |
Vertical heating pressure steam sterilizer | Shanghai Shenan Medical Instrument Factory | LDZM-80KCS-II | Sterilize the experimental articles |