Summary

Målrettet neuronal skade for ikke-invasiv afbrydelse af hjernen kredsløb

Published: September 27, 2020
doi:

Summary

Målet med protokollen er at give en metode til fremstilling af ikke-invasive neuronale læsioner i hjernen. Metoden udnytter Magnetic Resonance-guidet Fokuseret ultralyd (MRgFUS) til at åbne Blodhjernen Barrier i en forbigående og fokal måde, for at levere en cirkulerende neurotoksin til hjernen parenkym.

Abstract

Kirurgisk indgreb kan være ganske effektiv til behandling af visse typer af medicinsk uhåndterlige neurologiske sygdomme. Denne fremgangsmåde er især nyttig for lidelser, hvor identificerbare neuronal kredsløb spiller en central rolle, såsom epilepsi og bevægelsesforstyrrelser. I øjeblikket tilgængelige kirurgiske modaliteter, mens effektiv, generelt indebærer en invasiv kirurgisk procedure, som kan resultere i kirurgisk skade på ikke-målvæv. Derfor ville det være af værdi at udvide rækken af kirurgiske tilgange til at omfatte en teknik, der er både ikke-invasiv og neurotoksisk.

Her præsenteres en metode til fremstilling af fokale, neuronale læsioner i hjernen på en ikke-invasiv måde. Denne tilgang udnytter lav intensitet fokuseret ultralyd sammen med intravenøse mikrobobler til forbigående og focally åbne Blood Brain Barrier (BBB). Perioden med forbigående BBB åbning udnyttes derefter til at focally levere en systemisk administreret neurotoksin til et målrettet hjerneområde. Neurotoksinokvinolinsyre (QA) er normalt BBB-uigennemtrængelig og tåler det godt, når den administreres intraperitoneally eller intravenøst. Men, Når QA får direkte adgang til hjernevæv, Det er giftigt for neuroner. Denne metode er blevet brugt i rotter og mus til at målrette specifikke hjerneregioner. Umiddelbart efter MRgFUS bekræftes en vellykket åbning af BBB ved hjælp af kontrastforøget T1-vægtet billeddannelse. Efter proceduren, T2 billeddannelse viser skade begrænset til det målrettede område af hjernen og tabet af neuroner i det målrettede område kan bekræftes post-mortem udnytte histologiske teknikker. Især, dyr injiceres med saltvand i stedet for QA demonstrere åbning af BBB, men dot ikke udviser skade eller neuronal tab. Denne metode, der betegnes præcis intracerebral ikke-invasiv guidet kirurgi (PING) kunne give en ikke-invasiv tilgang til behandling af neurologiske lidelser forbundet med forstyrrelser i neurale kredsløb.

Introduction

Formålet med denne metode er at give et middel til at producere ikke-invasive neuronal læsioner i en målrettet region af hjernen. Begrundelsen for at udvikle en sådan tilgang er at afbryde neuronal kredsløb bidrager til neurologiske lidelser. For eksempel kan kirurgi være ganske effektiv til behandling af visse medicinsk uhåndterlige neurologiske lidelser, såsom resistent epilepsi (DRE)1. Men, hver af de tilgængelige kirurgiske modaliteter besidder begrænsninger med hensyn til at producere uønskede følgeskader på hjernen. Traditionel resektiv kirurgi kan være meget invasiv med risiko for blødning, infektion, blodpropper, slagtilfælde, anfald, hævelse af hjernen, og nerveskader2. Alternativer til resektiv kirurgi, der er minimalt invasive eller ikke-invasive omfatter laser interstitiel termisk terapi og radiokirurgi, som også har vist sig at være effektiv til at undertrykke anfald i DRE. For nylig, termiske læsioner produceret af høj intensitet fokuseret ultralyd (HIFU) har vist lovende i at reducere anfald. HIFU er ikke-invasiv; men, dens behandling vindue er i øjeblikket begrænset til mere centrale områder af hjernen på grund af risikoen for termisk skade på ikke-målvæv placeret i nærheden af kraniet. På trods af sådanne begrænsninger, fordelene ved kirurgi ofte opvejer de potentielle risici. For eksempel, selv kirurgi for DRE kan producere følgeskader hjerneskade, dens gavnlige virkninger i at undertrykke anfald og forbedre livskvaliteten typisk forrang over de kirurgiske risici.

Den metode, der er beskrevet heri, Præcis Intracerebral Ikke-invasiv Guidet kirurgi (PING), blev udviklet med henblik på at afbryde neurale kredsløb, samtidig med at begrænse sikkerhedsstillelse hjerneskade. Metoden udnytter lav intensitet fokuseret ultralyd kombineret med intravenøs injektion af mikrobobler til at åbne BBB, for at levere en neurotoksin. Denne fremgangsmåde producerer ikke termiske læsioner tilhjernen 3,,4,,5,6,7, og perioden med BBB åbning kan udnyttes til at levere BBB-uigennemtrængelige forbindelser til hjernen parenkym. Åbningen af BBB er forbigående og kan fremstilles på en målrettet måde ved hjælp af magnetisk resonansbilleddannelsesvejledning. I vores undersøgelser, perioden med BBB åbning er blevet udnyttet til at levere en cirkulerende neurotoksin til et målrettet område af hjernen parenkym i rotter og mus8,9. Quinolininsyre er en neurotoksin, der tåles veltolereret, når det indgives intravenøst10, intraarterialt10eller intraperitoneally8,9,11. Manglen på kvalitetssikringstoksicitet skyldes dens dårlige BBB-permeabilitet, som er blevet rapporteret at være ubetydelig10. I modsætning hertil, direkte injektion af QA i hjernen parenkym producerer neuronal læsioner, der skåner tilstødendeaxoner 12,,13. Således, når cirkulerende QA får adgang til hjernen parenkym i det målrettede område af BBB åbning, neuronal død produceres8,9. Den nuværende metode producerer således fokal neuronal tab på en præcist målrettet og ikke-invasiv måde.

Protocol

Alle metoder, der er beskrevet her, er blevet godkendt af University of Virginia Animal Care and Use Committee. 1. Fremstilling af reagenser På dagen for operationen, forberede 6.0 ml injicerbar quinolinsyre (QA). 450 mg QA opløses i 4,0 ml 1,0 N NaOH. Der tilsættes 0,6 ml 10x PBS, pH til 7,4, og der tilbrings et endeligt volumen på 6,0 ml med dH2O. Filter gennem 0,22 μm sprøjtefilter. Opløsningen er stabil i 2 uger ved 4 °C. Forbered en vandig dispersion…

Representative Results

Dette afsnit beskriver virkningen af PING på neuroner placeret i en neocortisk dysplasi. Væv dysplasi er et fælles træk i hjernen hos patienter med resistent epilepsi, og kirurgisk fjernelse af beslaglæggelse-genic dysplasis kan give fremragende kontrol af anfald15. Definition af pings virkning på dysplastisk hjernevæv er derfor en vigtig prioritet. En rotte model af genetisk kortikale dysplasi, den tish rotte, blev udvalgt til at studere dette problem, fordi tish hjernen udviser dysplastis…

Discussion

PING-metoden er designet til at producere ikke-invasive, målrettede neuronale læsioner. Metoden stammer fra et stærkt og voksende fundament af forskning inden for fokuseret ultralyd3,,4,,5,,6,7. Evnen til at give fokal adgang til specifikke områder af hjernen parenkym via forbigående åbning af BBB har skabt en vej til at levere en bred vifte af agenter, …

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Forfatterne anerkender Rene Jack Roy for hans fremragende tekniske støtte inden for MR. Dette arbejde blev støttet af National Institutes of Health (R01 NS102194 til KSL og R01 CA217953-01 til MW), Chester Fund (KSL) og Focused Ultralyd Foundation (KSL og JW).

Materials

7T-ClinScan MRI System Bruker Biospin, Ettinglen, Germany MR Image Acquisition
Acoustic Gel Litho CLEAR 11-601 High Viscosity Accoustic Transmission Gel
DPX Mounting Medium Electron Microscopy Sciences 13512 Resin Based Cover Glass Mountant
Fluoro-Jade B EDM Millipore AG310 High Affinity Stain For Degenerating Neurons
Fluovac anesthetic adsorber Harvard Apparatus 34-0388 Organic Anaesthesia Scavenger
FUS System Image Guided Therapy, Pessac, France LabFUS MR Compatible Small Animal Focused Ultrasound System
Gadodiamide GE Healthcare AS, Oslo, Norway Omniscan MR Contrast Agent
Heparin SAGENT NDC2502140010 Anti-Coagulant
Hypodermic needle 30G x 1/2 Becton-Dickinson 26027 Tail Vein Catheterization
Insulin syringe 28G1/2 (1ml) EXEL 26027 Administration of Injectables to Tail Vein Catheter
Isofluorane atomizer SurgiVet VCT302 Anaesthesia Administration
Isoflurane Henry Schein NDC1169567762 Anaesthesia
KMnO4 Sigma 223468 Reagent Used in Fluoro-Jade B Staining
Microbubbles Produced internally: A. Klibanov 305106 Blood Brain Barrier Disrupting Agent
Microbubbles (commercial source) Lantheus Medical Imaging, North Billerica, MA Definity microbubbles Blood Brain Barrier Disrupting Agent
Monitoring & Gating System Small Animal Instruments Model 1030 Respiration Monitoring
Multisizer 3 Coulter counter Beckman-Coulter, Hialeah, FL Multisizer 3 Used to Determine Average Size of Microbubbles
Optixcare EYE LUBE CLC MEDICA, Ontario, Canada 11611 Corneal Protectant-Eye Lube
PE10 tubing Becton-Dickinson 427401 Tail Vein Catheter Component
Quinolinic Acid Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX CAS 89-00-9 Neurotoxin
Sprague-Dawley Rats Taconic Biosciences SD-M Rat Model
Syringe Pump Carnegie Medicin CMA 100 Controlled Delivery of Quinolinic Acid
Thermoguide Software Image Guided Therapy, Pessac, France Thermoguide Drives Lab FUS System
Tish Rats In-house colony Rat Model
Veet depilatory cream Reckitt Benckiser Removal of Scalp Hair

Referências

  1. Wiebe, S., Eliasziw, M., Matijevic, S. I. Changes in quality of life in epilepsy: How large must they be to be real. Epilepsia. 42, 113-118 (2001).
  2. McClelland, S., Guo, H., Okuyemi, K. S. Population-based analysis of morbidity and mortality following surgery for intractable temporal lobe epilepsy in the United States. Archives of Neurology. 68, 725-729 (2011).
  3. Hynynen, K., McDannold, N., Vykhotseva, N., Jolesz, F. A. Noninvasive MR imaging-guided focal opening of the blood-brain barrier in rabbits. Radiology. 220, 640-646 (2001).
  4. McDannold, N., Vykhodtseva, N., Raymond, S., Jolesz, F. A., Hynynen, K. MRI-guided targeted blood-brain barrier disruption with focused ultrasound: histological findings in rabbits. Ultrasound in Medicine & Biology. 31, 1527-1537 (2005).
  5. Park, J., Zhang, Y., Vykhodtseva, N., Jolesz, F. A., McDannold, N. J. The kinetics of blood brain barrier permeability and targeted doxorubicin delivery into brain induced by focused ultrasound. Journal of Controlled Release. 162 (1), 134-142 (2012).
  6. Sheikov, N., McDannold, N., Vykhodtseva, N., Jolesz, F., Hynynen, K. Cellular mechanisms of the blood-brain barrier opening induced by ultrasound in the presence of microbubbles. Ultrasound in Medicine & Biology. 30, 979-989 (2004).
  7. Vlachos, F., Tung, Y. S., Konofagou, E. E. Permeability assessment of the focused ultrasound-induced blood-brain barrier opening using dynamic contrast-enhanced MRI. Physics in Medicine and Biology. 55 (18), 5451-5466 (2010).
  8. Zhang, Y., et al. focal disconnection of brain circuitry using magnetic resonance-guided low-intensity focused ultrasound to deliver a Neurotoxin. Ultrasound in Medicine & Biology. 42 (9), 2261-2269 (2016).
  9. Zhang, Y., et al. Testing different combinations of acoustic pressure and doses of quinolinic acid to induce focal-neuron loss in mice using transcranial low-intensity focused ultrasound. Ultrasound in Medicine & Biology. 45, 129-136 (2018).
  10. Foster, A. C., Miller, L. P., Oldendorf, W. H., Schwarcz, R. Studies on the disposition of quinolinic acid after intracerebral or systemic administration in the rat. Experimental Neurology. 84, 428-440 (1984).
  11. Beskid, M., Różycka, Z., Taraszewska, A. Quinolinic acid: effect on the nucleus arcuatus of the hypothalamus in the rat (ultrastructural evidence). Experimental and Toxicologic Pathology. 49, 477-481 (1997).
  12. Schwarcz, R., Köhler, C. Differential vulnerability of central neurons of the rat to quinolinic acid. Neuroscience Letters. 38, 85-90 (1983).
  13. Schwarcz, R., Whetsell, W. O., Mangano, R. M. Quinolinic acid: an endogenous metabolite that produces axon-sparing lesions in rat brain. Science. 219, 316-318 (1983).
  14. Klibanov, A. L. Microbubble contrast agents: targeted ultrasound imaging and ultrasound-assisted drug-delivery applications. Investigative Radiology. 41 (3), 354-362 (2006).
  15. Agari, T., et al. Successful treatment of epilepsy by resection of periventricular nodular heterotopia. Acta Medica Okayama. 66 (6), 487-492 (2012).
  16. Lee, K. S., et al. A genetic animal model of human neocortical heterotopia associated with seizures. The Journal of Neuroscience. 17 (16), 6236-6242 (1997).
  17. Schottler, F., Couture, D., Rao, A., Kahn, H., Lee, K. S. Subcortical connections of normotopic and heterotopic neurons in sensory and motor cortices of the tish mutant rat. The Journal of Comparative Neurology. 395 (1), 29-42 (1998).
  18. Schottler, F., et al. Normotopic and heterotopic cortical representations of mystacial vibrissae in rats with subcortical band heterotopia. Neurociência. 108 (2), 217-235 (2001).
  19. Zhang, Y., et al. Effects of non-invasive, targeted, neuronal lesions on seizures in a mouse model of temporal lobe epilepsy. Ultrasound in Medicine and Biology. 46, 1224-1234 (2020).
  20. Holmes, E. W. Determination of serum kynurenine and hepatic tryptophan dioxygenase activity by high-performance liquid chromatography. Analytical Biochemistry. 172, 518-525 (1988).
  21. Shibata, K., Ohno, T., Sano, M., Fukuwatari, T. The urinary ratio of 3-hydroxykynurenine/3-hydroxyanthranilic acid is an index of predicting the adverse effects of D-trytophan in rats. Journal of Nutritional Science and Vitaminology. 60, 261-268 (2014).
  22. Aubry, J. -. F., Tanter, M. MR-guided transcranial focused ultrasound. Therapeutic Ultrasound. , 97-111 (2016).
  23. Elias, W. J., et al. A Randomized trial of focused ultrasound thalamotomy for essential tremor. New England Journal of Medicine. 375, 730-739 (2016).
  24. Ghanouni, P., et al. Transcranial MR-guided focused ultrasound: a review of the technology and neuro applications. American Journal of Roentgenology. 205, 150-159 (2015).
  25. Martin, E., Jeanmonod, D., Morel, A., Zadicario, E., Werner, B. High-intensity focused ultrasound for noninvasive functional neurosurgery. Annals of Neurology. 66, 858-861 (2009).
  26. Monteith, S., et al. Transcranial magnetic resonance-guided focused ultrasound for temporal lobe epilepsy: a laboratory feasibility study. Journal of Neurosurgery. 12, 1-8 (2016).
check_url/pt/61271?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Wang, W., Zhang, Y., Anzivino, M. J., Bertram, E. H., Woznak, J., Klibanov, A., Dumont, E., Wintermark, M., Lee, K. S. Targeted Neuronal Injury for the Non-Invasive Disconnection of Brain Circuitry. J. Vis. Exp. (163), e61271, doi:10.3791/61271 (2020).

View Video