使用碘电磷诱导红血球中的红血球

红细胞中的程序性细胞死亡，也称为红斑病，在许多临床条件和血液学疾病中很常见。脂质增，与细胞收缩和细胞血浆膜^1、2磷脂不对称的丧失有关。不对称性丧失导致磷脂酰丝氨酸（PS）的易位，这种脂质通常位于内侧传单^3，4，到细胞外传单，信号到巨噬细胞到噬菌体和去除有缺陷的红细胞^{5，6，7，8。}在红细胞正常寿命结束时，通过巨噬细胞去除红细胞可确保循环中的红细胞平衡。然而，在疾病条件下，如刀状细胞疾病和地中海贫血^{9，10，11，}增强性红斑狼疮可能导致严重的贫血^2。由于其在血液病学中的重要性，研究诱导或抑制红斑病的因素以及这一过程背后的分子机制具有极大的兴趣。

健康红细胞的血浆膜是不对称的，不同的磷脂在外部和内侧分布。膜不对称主要受膜酶作用的调节。氨磷脂转氯酶通过将这些脂质引导到细胞内部传单，促进氨磷脂、PS和磷脂酰胺（PE）的运输。另一方面，软体酶将含有磷脂、磷脂酰胆碱（PC）和斯芬戈米林（SM）的胆碱从细胞膜的内侧输送到外膜^12。然而，与健康细胞不同，红斑红细胞的膜被搅乱。这是由于第三种酶，scramblase的作用，它通过促进氨磷脂的双向传输^{13，14，15，16}破坏磷脂不对称。斯兰布拉斯由^Ca2+细胞内水平升高激活。因此，促进^Ca2+在细胞膜¹²间运输的电泳钙是红斑狼疮的有效诱因。

碘霉素，一种电磷钙，已广泛用于诱导红细胞^{12，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26}的红斑狼疮。碘霉素同时具有亲水性和疏水性组，这些组是结合和捕获Ca²⁺离子，并将其输送到细胞空间^27、28、29所必需的。这导致scramblase的激活和PS的易位到外传单，这可以很容易地检测使用附件-V，一种细胞蛋白与^PS12高度亲和力。虽然通常报道用碘霉素引发红斑狼疮，但文献中存在相当大的方法差异（表1）。经历红斑狼疮的红细胞群取决于不同的因素，如电离度浓度、电离磷的治疗时间以及细胞外环境的糖含量（葡萄糖消耗激活阳离子通道，并便利Ca²⁺进入细胞空间）^30，31。然而，这些因素在文献中几乎没有一致性，使得在体外难以进行红斑狼疮的排斥性。

在这个协议中，我们提出了一个分步程序，以诱导红细胞中的红细胞。检查影响成功红斑狼疮的因素，包括Ca²⁺浓度、电离浓度、治疗时间和葡萄糖耗尽缓冲液的预孵育，并报告最佳值。此过程表明，与含葡萄糖缓冲液相比，无葡萄糖缓冲液中红细胞的预孵育可显著增加红细胞分百分比。该协议可用于实验室生产各种应用的红细胞红细胞。