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Comportamento

쥐에 있는 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I를 위한 만성 포스트 허혈 고통 모형

Published: January 21, 2020
doi:
10.3791/60562
, , , , , , ,
1Department of Neurobiology and Acupuncture Research, The Third Clinical Medical College, Zhejiang Chinese Medical University,Key Laboratory of Acupuncture and Neurology of Zhejiang Province, 2Academy of Chinese Medical Sciences,Zhejiang Chinese Medical University

Summary

여기에 제공된 프로토콜은 만성 허혈 후 통증(CPIP)의 동물 모델을 확립하는 단계를 상세히 설명합니다. 이것은 인간 복잡한 지역 고통 증후군 유형-I를 모방하는 잘 인식된 모형입니다. 기계적 및 열적 과민성은 CPIP 래트 모델에서 관찰된 캡사이신 유도 노시펜스 거동뿐만 아니라 추가로 평가된다.

Abstract

복잡한 국부적인 통증 증후군 유형-I(CRPS-I)는 환자 들 사이에서 심한 통증을 일으키는 신경 질환이며 해결되지 않은 상태로 남아 있습니다. 그러나 CRPS-I의 기본 메커니즘은 아직 밝혀지지 않았습니다. 허혈/재관류는 CRPS-I를 일으키는 주요 요인 중 하나인 것으로 알려져 있습니다. 연장된 허혈 및 뒷다리의 재관류에 의해, 쥐 만성 허혈 후 통증(CPIP) 모델은 CRPS-I를 모방하기 위해 확립되었다. CPIP 모델은 CRPS-I의 메커니즘을 연구하기 위한 잘 알려진 동물 모델이 되었습니다. 이 프로토콜은 마취를 포함하여 CPIP의 쥐 모델의 확립에 관련된 상세한 절차를 설명하고 뒷다리의 허혈 / 재관류를 수행합니다. 랫트 CPIP 모델의 특성은 급성 캡사이신 주입에 대한 항성 반응뿐만 아니라 뒷다리의 기계적 및 열적 과민성을 측정함으로써 더욱 평가된다. 쥐 CPIP 모델은 설립 후 초기 단계에서 뒷다리 부종 및 충혈을 포함한 여러 CRPS-I-유사 증상을 나타내며, 지속적인 열 및 기계적 과민성, 급성 캡사이신 주사에 대한 노시펜성 반응을 증가시켰다. 이러한 특성은 CRPS-I에 관여하는 메커니즘의 추가 조사에 적합한 동물 모델을 렌더링합니다.

Introduction

복잡한 국소 통증 증후군(CRPS)은 골절, 외상, 수술, 허혈 또는 신경손상으로인한 복합및 만성 통증 증상을1,2,3. CRPS는 2개의 하위 범주로 분류됩니다: CRPS 유형 I 및 타입-II (CRPS-I 및 CRPS-II)4. 역학 연구는 CRPS의 보급이 대략 이었다는 것을 밝혔습니다 1:20005. 명백한 신경 손상을 보이지 않는 CRPS-I는 만성 통증을 초래할 수 있으며 환자의 삶의 질에 극적으로 영향을 미칩니다. 현재 사용 가능한 치료는 부적절한 치료 효과를 보여줍니다. 그러므로, CRPS-I는 아직도 해결될 필요가 있는 중요하고 도전적인 임상 문제 남아 있습니다.

CRPS-I를 모방한 전임상 동물 모델을 확립하는 것은 CRPS-I의 근본적인 메커니즘을 탐구하는 데 매우 중요합니다. 이 문제를 해결하기 위해 Coderre 등은 CRPS-I6을다시 하기 위해 뒷다리에 장기간 허혈 및 재관류를 적용하여 쥐 모델을 설계했습니다. 허혈/재관류 손상은 CRPS-I7의주요 원인 중 하나인 것으로 알려져 있습니다. 랫트 CPIP 모델은 모델 설립 후 초기 단계에서 뒷다리 부종 및 충혈을 포함하는 많은 CRPS-I-유사 증상을 나타내며, 지속적인 열 및 기계적 과민성6. 이 모델의 도움으로 중앙 통증 감작, 말초 TRPA1 채널 활성화 및 반응성 산소 종 생성 등이 CRPS-I8,9,10에기여하는 것이 제안된다. 우리는 최근에 성공적으로 CPIP 쥐 모델을 설치하고 영향을받는 뒷발(11)을중화시키는 등뿌리 중추 (DRGs)의 RNA 시퀀싱을 수행했습니다. 우리는 CRPS-I11의고통 과민증을 중재하는 데 아마도 관여하는 몇 가지 잠재적 인 메커니즘을 발견했습니다. 우리는 또한 CRPS-I12의기계적 및 열 과민성에 중요한 기여로 DRG 뉴런에서 일시적인 수용체 전위 바닐로이드 1 (TRPV1) 채널을 확인했습니다.

이 연구에서는, 우리는 CPIP의 쥐 모형의 설치에 관련시킨 상세한 절차를 기술했습니다. 우리는 또한 급성 capsaicin 도전에 그것의 반응성 뿐만 아니라 기계및 열 과민성 측정하 여 쥐 CPIP 모형을 평가했습니다. 우리는 쥐 CPIP 모델이 CRPS-I에 관여하는 메커니즘의 추가 조사를 위한 신뢰할 수 있는 동물 모델이 될 수 있음을 제안한다.

Protocol

동물 프로토콜은 절강 중국 의과 대학 동물 윤리위원회에 의해 승인되었다. 1. 동물 상하이 실험실 동물 센터에서 수컷 스프라그-도울리(SD) 쥐(280-320g, 8-10주)를 획득하십시오. 저장 성 중국 의과 대학 실험실 동물 센터에서 동물을 집. 사육 조건에는 12 h / 2h 의 빛 / 어두운 사이클이 포함되어야하며 온도를 24 °C에서 일정하게 유지해야합니다. 물과 음식 광고 libitum을<…

Representative Results

발목에 O-링을 배치한 후, 동측 뒷발 피부는 청색증, 조직 저산소증의 표시를나타냈다(도 1A). O-링을 절단 한 후, ipsilateral 뒷발은 혈액으로 채우기 시작하고 충혈의 강렬한 징후를 보여 강력한 붓기를 보였다(그림 1A). 발 붓기가 점차 감소하고 허혈성 / 재관류 절차 후 정상 48 시간으로 돌아왔다 (시닥 후- 혹 테스트와 양방향 ANOV…

Discussion

이 프로토콜은 쥐의 뒷다리에 허혈/재관류를 적용하여 쥐 CPIP 모델을 확립하기 위한 상세한 방법을 설명합니다. 그것은 뒷다리 외관의 평가를 포함, 부 종, 기계/열 과민성, 그리고 capsaicin 주입에 대 한 응답에서 급성 nocifensive 거 동.

사지 허혈/재관류는 인간 환자12에서CRPS-I에 기여하는 일반적인 인자이다. 이 프로토콜은 인간 CRPS-I6을다시 ?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 프로젝트는 중국 국립 자연 과학 재단 (81873365 및 81603676), 저명한 젊은 학자를위한 절강 성 자연 과학 기금 (LR17H270001) 및 절강 중국 의과 대학의 연구 기금 () 후원했다 Q2019J01, 2018ZY37, 2018ZY19).

Materials

1.5 ml Eppendorf tube Eppendorf 22431021
DMSO Sigma-Aldrich D1435
Capsaicin APEXBIO A3278
Digital caliper Meinaite NA
O-ring O-Rings West Nitrile 70 Durometer 7/32 in.
internal diameter
Plantar Test Apparatus UGO Basile, Italy 37370
von Frey filaments UGO Basile, Italy NC12775
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Keywords: CRPS IChronic Post-ischemia PainRat ModelHindlimb EdemaHyperemiaThermal HyperalgesiaMechanical AllodyniaVon Frey FilamentsHargreaves Method
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Citar este artigo
Hu, Q., Zheng, X., Chen, R., Liu, B., Tai, Y., Shao, X., Fang, J., Liu, B. Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats. J. Vis. Exp. (155), e60562, doi:10.3791/60562 (2020).
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