Na última década, inúmeros estudos foram focados no recém-identificado subconjunto de células CD4⁺ T, subconjunto de células Tfh, por suas funções essenciais no desenvolvimento do Centro Germinal (GC) B. Linfoma de célula B 6 (Bcl6), que é considerado principalmente como um repressor genético, é o fator definidor de linhagem das células Tfh para a evidência de que a expressão ectópica de Bcl6 é suficiente para impulsionar a diferenciação de Tfh enquanto a deficiência de Bcl6 resulta na diferenciação Tfh desaparecida^1,2,3. Ao contrário de outros subconjuntos de ajuda CD4⁺ T que executam sua função de efeitos por migração para os locais de inflamação, as células Tfh fornecem ajuda da célula B principalmente na zona folicular de células B de baço e linfonodo. Moléculas co-estimulatórias ICOS e CD40L, desempenham papéis significativos na interação entre as células Tfh e GC B. Durante a diferenciação do Tfh, o ICOS transmite sinais necessários de células B coginadas e também atua como um receptor recebendo sinais de migração de células B espectadores para localização da zona de célula B^4,5. CD40L é um mediador de sinais de células Tfh para proliferação e sobrevivência de células B⁶. Outro fator que desempenha o papel semelhante ao CD40L é o citocina IL21, que é principalmente secretado por células Tfh. O IL21 regula diretamente o desenvolvimento e a produção de células GC B de anticorpos de alta afinidade, mas seu papel na diferenciação do Tfh ainda é controverso^7,8. PD-1 e CXCR5, que agora são mais utilizados na identificação de células Tfh na análise de citometria de fluxo, também desempenham papéis significativos na diferenciação e função deste subconjunto. CXCR5 é o receptor de quimiocina folicular de células B e media a localização de células Tfh em folículos de células B⁹. O PD-1 agora é identificado para não só ter a função de orientação folicular, mas também transmitir sinais críticos no processo de maturação de afinidade de afinidade de células GC B¹⁰. Com base nesses achados, avaliar a expressão dessas moléculas poderia basicamente refletir a maturação e função das células Tfh.

GC é uma estrutura microanatomical transitória induzida em órgãos linfoides secundários e altamente dependente das células Tfh, sendo assim uma leitura perfeita para avaliar a resposta Tfh. Em GC, após receber sinais mediados por citocinas e moléculas co-estimulantes, as células B estão sujeitas a troca de classe e hipermutação somática para gerar anticorpos de alta afinidade¹¹. A troca diferencial da classe anticorpo ocorre no nicho diferencial de citocina, no qual il4 e IL21 induzem a troca de classe IgG1 enquanto IFNγ induz a comutação da classe IgG2¹². As células plasmáticas são os produtores de anticorpos secretos e são células terminais diferenciadas. Como as células Tfh, o desenvolvimento de células B em GC está associado à expressão dinâmica de muitas moléculas significativas. Com base no presente estudo, as células GC B podem ser identificadas como B220⁺PNA⁺Fas⁺ ou B220⁺GL7⁺Células Fas⁺ e células plasmáticas, em comparação com seus precursores, expressão de baixa regulação de B220 e expressão CD138¹³. Além disso, ambas as características podem ser detectadas na análise de citometria de fluxo e imunofluorescência, sendo assim a avaliação adequada da resposta gc.

Respostas celulares robustas e humorais são induzidas na infecção pelo vírus da gripe, com células Tfh e Th1 dominando a resposta celular CD4⁺ T^14,o que o torna um modelo perfeito para o estudo de diferenciação de células Tfh. Influenza A/Porto Rico/8/34 H1N1(PR8), que é uma cepa comumente usada adaptado ao rato, é frequentemente utilizada neste estudo^14,15,16. Aqui, descrevemos alguns protocolos básicos do ensaio relevante do estudo Tfh na infecção pelo vírus da gripe: 1) inoculação intranasal do vírus PR8; 2) células Tfh específicas de antígeno, células GC B e plasma e detecção de IL21 com citometria de fluxo; 3) visualização histológica de GC; 4) detecção de titulação de anticorpos específicas de antígeno em soro com ELISA. Esses protocolos fornecem as técnicas necessárias para novos pesquisadores no estudo associado ao Tfh.