人間の概日のフェノタイピングと現実世界での日系性能試験

ここに記載されているすべての方法は、バーミンガム大学研究倫理委員会によって承認されています. 1. 参加者のスクリーニングと実験計画 ヘルシンキ宣言に従って、適切な倫理的承認に従ってすべての方法を実行し、関与する前にすべての参加者から書面によるインフォームド・コンセントを得る。 睡眠、神経疾患または精神疾患の事前診断を持たない参加者を募集し、睡眠、メラトニンまたはコルチゾールリズムに影響を与える薬を服用せずに。 参加者がシフトワーカーでなく、参加者が過去1ヶ月以内に2つ以上のタイムゾーンを移動しておらず、研究に参加することができます(つまり、アクティウォッチの着用にコミットし、「自由な日」に唾液サンプルを提供し、特定の時間にパフォーマンステストのために出席することができます(セクション2.1を参照)。 同意を得るために最初の設定の会議に出席する参加条件を通過した参加者を招待し、アンケートデータを収集し、自宅で唾液サンプルを収集する訓練を受け、アクティグラフィーデバイスと睡眠日記を設定します。この会議では、参加者に生理学的サンプリングプロトコルを理解し、必要な内容を理解してもらいます(セクション3を参照)。 参加者に、睡眠/覚醒変数の個人差と仕事と自由日3の光暴露を評価するミュンヘンChronoTypeアンケート(MCTQ)を完了するように依頼します。これにより、クロノタイプのマーカーとして使用される空き日(MSFsc)での修正されたミッドスリープ時間の計算が可能になります。 2. アクティグラフィーと睡眠日記 少なくとも2週間19(研究の目的に応じて長い期間を取ることができる)は、参加者に手首活動モニターまたは「アクティグラフ」を着用し、休息/活動パターンを収集し、研究期間を通じて光(1〜32,000ルクス)データを収集するよう依頼する。 入浴/シャワー(防水ではない場合)の取り外しや、光データを収集できるようにそれらを覆う袖を防ぐなど、アクティグラフの使用方法の詳細を各参加者に提供します。非支配的な手首にアクティグラフが着用されていることを確認します。 アクティグラフィーと組み合わせて、アクティグラフィーデータから得られた睡眠/覚醒分析を容易にするために、各参加者に毎日完了する睡眠日記を与えます。就寝時間、睡眠時間、夜間の目覚め、目覚めの時間、睡眠の質、昼寝、アクティグラフが取り除かれた時間など、質問が寄せられることを確認してください。 必要に応じてパラメータを返す休息/活動分析のための活動データを収集します(この研究では、30Hzサンプリング周波数と中感度設定を使用)。毎日の就寝時間の詳細を抽出し、睡眠日記から起き上がる時間とメーカーのソフトウェアまたは代替手段への入力(例えば、研究に関連するアクティグラフィ変数を得るためにオープンソース検証コード)。 3. 生理的サンプリング ポリプロピレンコレクションチューブまたはサリベットにラベルを付けてサンプリングパックを事前準備します(この研究では7 mLプラスチックビジョを使用してください)。参加者ID番号、朝または夕方、および個々のサンプリング番号でチューブにラベルを付けます。間違いの場合に使用する「予備の」チューブを含めます。 朝と夕方の両方のプロトコルのサンプル収集レコード シートを準備して、サンプルが採取されたときに参加者がタイムスタンプを取得できるようにします (たとえば、朝のサンプル 1、所要時間 = hh:mm、朝のサンプル 2、所要時間 = hh:mm)。参加者ID番号、季節情報の日付、およびフォト期間を計算するための場所を含めます。注:午前/午後に問題がないことを確認するために軍事時間を使用することが重要です。 自宅/職場環境で唾液サンプルを採取する方法のトレーニング中に、参加者に生理学的サンプリングと事前に作られたパックの関連プロトコルを与えます。 参加者が希望の時間(アラームを必要とせずに)寝て目を覚ますことができる自由な日にサンプルを収集する必要があることを参加者に知らせます。DLMOの信頼性の高い計算を確実にするために、参加者は習慣的な就寝時間を過ぎて目を覚まし続ける必要があるため、パフォーマンステストの前日に夕方の唾液サンプリングプロトコルを実行しないでください。 参加者に、唾液サンプルを与えることにコミットできる調査の第2週の間に、ある朝と1晩(同じ日に)を割り当てるように頼みます。同じ日に朝のサンプルを収集し、その後に夕方のサンプルを収集するように参加者にアドバイスします。注:睡眠時間の変化が結果に影響を与えないように、サンプリング(朝と夕方)の順序に従う必要があります(夕方のサンプルが最初に習慣的な就寝時間を過ぎて目を覚ます必要がある場合、翌日に採取した場合、朝のサンプルに影響を与える可能性があります)。 コルチゾール覚醒応答のための朝のサンプリングプロトコル 唾液サンプルが最初の目覚めの時点(ベッドにいる間)、最初の1時間ごとに15分ごとに収集され、次の1〜2時間は30分ごとに、適切にラベル付けされたバイアル(No.1、2、3など)に唾液サンプルを吸い込んで採取します。 この期間中、参加者は、アルコール飲料、人工着色料と食品を含む飲み物をテスト期間中は控え、サンプリング期間中は歯磨き粉の有無にかかわらず歯磨き粉の有無を控えます。 すべてのサンプルが提供されたら、参加者が研究チームによって収集されるまで-20°Cで自分のサンプルを冷凍庫に保管することを確認してください。注:可能であれば冷凍サンプルを保存することをお勧めしますが、翌日収集されるまで冷蔵庫に保管すると、そのまま残ります。ヒト組織法(HTA)2004では、分析を行う機関がHTAライセンスを保有していない限り、収集後7日以内にサンプルを収集して処理して細胞を失う必要があります。 薄暗いメラトニン発症のための夜のサンプリングプロトコル 唾液サンプルは、習慣的就寝時間の3~4時間前から、習慣的就寝時間の1~2時間後まで30分ごとに採取されるようにします(例えば、習慣的就寝時間が22:00の場合、参加者は18:00/19:00 hから23:00/00:00まで開始します)。適切にラベル付けされたバイアル(1から始まり、2、3など)に唾液サンプルを入れて採取します。 この期間中、参加者は、習慣的な就寝時間の6時間前からカフェイン入りの飲み物(例えば、紅茶、コーヒー、コカコーラ)を控えるようにしてください(例えば、習慣的な就寝時間が22:00時間の場合、カフェインの消費量は収集日の16:00時間に停止する必要があります)。 参加者が薄暗い光の中で屋内に座っていることを確認してください(<10ルクス、例えば、単一のテーブルランプが好ましくは赤い光で、部屋の反対側に、オーバーヘッドライトなし、電子スクリーンなし、カーテンが閉まっています)。参加者は、アルコールや人工着色料を含む飲料を飲むことを避け、サンプリング期間中に歯磨き粉の有無にかかわらず歯を掃除することを控えるようにしてください。 参加者が何かを食べたい場合は、トイレに行くか、カフェインのない飲み物を作り、サンプルの採取直後に行い、次のサンプルが採取される前に15分間再び着席してみてください。サンプル間で食品が消費される場合は、参加者が次のサンプルの収集の15分前に水で口を洗い流すことを確認してください。 他のすべての部屋が同じ光条件を持っていることを確認して、参加者がサンプリング期間の間薄暗い光(できれば赤色の光)にとどまるようにします。 すべてのサンプルが提供されたら、参加者が研究チームによって収集されるまで-20°Cで自分のサンプルを冷凍庫に保管することを確認してください。注: 参加者が薄暗い光のプロトコルに従うことは重要です。可能な場合、研究者は強度とスペクトル組成を監視するために光の状態を測定する必要があります。 4. 放射免疫測定 ヒト唾液中のメラトニンおよびコルチゾールのRIAまたはELISAを実行し、各時点で相対濃度を決定する。注:これらの代表的な結果の手順は、ヨウ素(125I)放射性標識トレーサーと固相分離とRIAを使用しました。このプロトコルは、英国サリー大学クロノバイオロジー研究所で日常的に採用されています。 メラトニン濃度が 3 つの基準メジャー (最初の 3 つのサンプル) の 2 つの標準偏差を超える時点として、個々の DLMO を計算します。注: この方法は、定格濃度14を使用する場合と比較して、個々のベースラインの違いを調整します。他の方法は、サンプリングで使用される時間ポイントに応じて使用することができる(例えば、完全プロファイル14のための24時間の期間にわたって)。 朝コルチゾール覚醒応答中に記録された最高のコルチゾール濃度の時間としてコルチゾールピークを計算します。. 5. 日系性能試験 注:このプロトコルで使用された措置は、精神運動警戒タスク(PVT)21、およびカロリンスカ眠気スケール(KSS)22です。22しかし、研究の目的に応じて同じ設計を維持する他のテストを使用することができます(例えば、研究が概日表現型が作業記憶に及ぼす影響を調査していた場合、メモリタスクが必要になります)。 セットアップに慣れるテストの前の週に、少なくとも 1 つの (タスクに応じて) 練習試用を実行するように参加者に依頼します。注: 監視されている場合は、練習トライアルをリモートで実行できます。模擬試験の数は、スタディで使用されているタスクに基づいて調整する必要があります。たとえば、より複雑なエグゼクティブ機能タスクでは、単純なタスクに比べて、いくつかの練習テストが必要になることがあります。 特定のクロックタイムで調査されているタイム ポイントの数に基づいて、調査の仮説に従ってテスト セッションを配置します。注: 研究の設計に応じて、パフォーマンステストは家庭または研究室で行うことができます。プロトコルの時間に敏感な性質上、家庭環境でパフォーマンステストを行う場合、コンプライアンスを監視して、参加者が自分で実施していることを確認し、日時にスタンプを押す必要があります。 関連するデバイスでテストを実施します(この調査では、DQ67OW、i7-2600プロセッサ、4GB RAM、標準キーボードとマウスを備えた32ビットデスクトップを使用)。注:ラップトップ、iPad、またはその他のデバイスがテストに必要な場合は、マウスとトラックパッドとタッチスクリーンからの応答の変動の可能性があるため、すべての参加者と各テストセッションで同じデバイスと設定が使用されていることを確認してください。 6. 分析 収集された5つの変数の値に基づいて概日表現型グループを分類する:MSFsc、起目時間、コルチゾール覚醒応答のピーク時間、DLMOおよび睡眠発症(カットオフは表1に示される)。 各参加者に対して、変数ごとにスコアを割り当てます。変数は、ECP カテゴリー内にある場合は 0、ICP カテゴリー内にある場合は 1、LCP カテゴリー内にある場合は 2 が割り振られます。たとえば、参加者がすべての変数の LCP カテゴリに属している場合、10 のスコアが蓄積されます。0-10の合計スコアのうち、参加者はEPS(0-3)、ISP(4-6)、LMP(7-10)として識別されます。 総スコアから、概日表現型のサブカテゴリは、0 = 極端な ECP、1 = 明確な ECP、2 = 中程度の ECP、3 = 軽度の ECP、4 = 初期 ICP、5 = ICP、6 = 後期 ICP、7 = 軽度の LCP、8 = 中程度の LCP、9 = 明確なように決定できます。注:統計分析は、個々の研究のための研究の質問に基づいて決定する必要があります。非パラメトリック検定は、データが正規分布に従わない場合に使用する必要があります。一日の効果の時間を決定するために、後の一時的なテストを実行する必要があります。多くのパラメータを測定する場合、複数比較のさらなる補正(例えば、p値のFDR補正)を行う必要があります。