وينقل حليب الثدي فيروس نقص المناعة البشرية، على الرغم من أن حوالي 15 في المائة فقط من الرضع الذين يرضعون رضاعة طبيعية من الأمهات المصابات بفيروس نقص المناعة البشرية يصابون بالعدوى. الرضع الذين يرضعون رضاعة طبيعية تناول ~ 105−108 الكريات البيض الأمومية يوميا، على الرغم من أن هذه الخلايا هي أقل دراسة. هنا نقوم بوصف عزل ة حليب الثدي الكريات البيض وتحليل قدرتها الفصوتية.
وحتى في غياب العقاقير المضادة للفيروسات العكوسة، فإن حوالي 15 في المائة فقط من الرضع الذين ترضعهم الأمهات المصابات بفيروس نقص المناعة البشرية يصابون بالعدوى، مما يشير إلى وجود تأثير وقائي قوي لحليب الثدي. وما لم يكن الحصول على المياه النظيفة وحليب الرضع المناسب موثوقاً به، فإن منظمة الصحة العالمية لا توصي بوقف الرضاعة الطبيعية للأمهات المصابات بفيروس نقص المناعة البشرية. ومن المرجح أن تعمل عوامل عديدة جنبا إلى جنب للحد من انتقال BM. الرضع الذين يرضعون رضاعة طبيعية تناول ~ 105−108 الكريات البيض الأمومية يوميا، على الرغم من أن ما لا يزال غير واضح إلى حد كبير هو مساهمة هذه الخلايا في الصفات المضادة للفيروسات من BM. في الوقت الحاضر كنا نهدف إلى عزل الخلايا من BM الإنسان من أجل قياس الفيغوسيات الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة (ADCP)، وهي واحدة من الاستجابات المناعية الفطرية الأكثر أهمية وانتشاراً، من قبل خلايا الفيغاسضدية BM ضد أهداف فيروس نقص المناعة البشرية. تم عزل الخلايا من 5 عينات BM البشرية التي تم الحصول عليها في مراحل مختلفة من الرضاعة. تم إجراء العزلة عن طريق الطرد المركزي لطيف تليها إزالة دقيقة من الدهون الحليب والغسيل المتكرر من بيليه الخلية. وقد استخدمت حبات الفلورسنت المغلفة بغلاف فيروس نقص المناعة البشرية (Env) كأهداف لتحليل ADCP. كانت الخلايا ملطخة بعلامة سطح CD45 لتحديد الكريات البيض. وتبين أن نشاط برنامج مكافحة المخدرات كان كبيرا فوق تجارب المراقبة ويمكن قياسه بشكل قابل للقياس باستخدام جسم مضاد خاص بفيروس نقص المناعة البشرية 830A.
يتكون حليب الثدي البشري (BM) من خلايا الأمومة التي هي > 90٪ قابلة للحياة1. يتأثر تكوين الخلية بشدة بمرحلة الرضاعة، والحالة الصحية للأم والرضيع، والتباين الفردي، الذي لا يزال غير مفهومبشكلجيد1،2،3،4. وبالنظر إلى أن BM يحتوي على ~ 103−105 الكريات البيض / مل، يمكن تقدير أن الرضع الذين يرضعون رضاعة طبيعية تناول ~ 105−108 الكريات البيض الأم يوميا5. وقد أظهرت دراسات مختلفة في الجسم الحي أن الكريات البيض الأمومية توفر مناعة حرجة للطفل وتعمل بشكل جيد خارج هذه المواقع من الابتلاع الأولي5و6و7و8 ،9،10،11. جميع الخلايا المشتقة من الأمومة التي ابتلعها الرضيع لديها القدرة على أداء وظائف المناعة جنبا إلى جنب أو للتعويض عن الكريات البيض الخاصة بالرضيع12.
ولا يزال انتقال فيروس نقص المناعة البشرية من الأم إلى الطفل يشكل أزمة في البلدان المحدودة الموارد. وبما أن أمراض الإسهال والجهاز التنفسي مسؤولة عن معدلات كبيرة من الوفيات بين الرضع في البلدان المحدودة الموارد، وهذه الأمراض تنخفض بدرجة كبيرة عن طريق الرضاعة الطبيعية الخالصة، والفوائد التي تعود على الأمهات المصابات بفيروس نقص المناعة البشرية من الرضاعة الطبيعية تفوق بكثير المخاطر13،14،15. وما لم يكن الحصول على المياه النظيفة وحليب الرضع المناسب موثوقاً به، فإن منظمة الصحة العالمية لا توصي بوقف الرضاعة الطبيعية للأمهات المصابات بفيروس نقص المناعة البشرية16. ويحدث سنوياً ما يقرب من 000 100 طن متري من الـ MTCT عن طريق BM؛ حتى الآن، فقط ~ 15٪ من الرضع الرضاعة الطبيعية من قبل أمهاتهم المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية تصبح مصابة، مما يشير إلى تأثير وقائي قوي من BM17،18،19،20،21. ومن المرجح أن تعمل عوامل عديدة جنبا إلى جنب لمنع انتقال العدوى. والأهم من ذلك أن الأجسام المضادة الخاصة بفيروس نقص المناعة البشرية (Abs) في BM قد ارتبطت بانخفاض انتقال العدوى من الأم إلى الطفل و/أو انخفاض وفيات الرضع بسبب الإصابة بفيروس نقصالمناعةالبشرية22و23. ما لا يزال غير واضح إلى حد كبير هو مساهمة الجزء الخلوي من BM لصفاته المضادة للفيروسات.
العديد من Abs تسهيل مجموعة متنوعة من الأنشطة المضادة للفيروسات بوساطة المنطقة ‘ثابتة’ من جزيء الغلوبولين المناعي، والجزء القابل للتبلور (Fc)، عن طريق التفاعل مع مستقبلات Fc (FcRs) وجدت على جميع الخلايا المناعية الفطرية تقريبا، وكلها تقريبا موجودة في الإنسان BM24. وقد ثبت أن الفيغوسياتوsات الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة (ADCP) ضرورية لإزالة العدوى الفيروسية، وقد تم دراسة ناقصة في حالة الوقاية من انتقال الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية25،26،27، 28 , 29.نظرا لندرة المعرفة حول المساهمة المحتملة لنشاط ADCP من قبل phagocytes BM للوقاية من انتقال انتقال الإصابة من الأم إلى الطفل من فيروس نقص المناعة البشرية، كنا نهدف إلى تطوير طريقة صارمة لعزل الخلايا من BM البشرية من أجل إجراء دراسة للADCP بوساطة الخلايا من BM التي تم الحصول عليها في مراحل مختلفة من الرضاعة.
وقد وُصفت لأول مرة في عام 201130 تقنية قياس التدفق القائم على قياس السيتومترية لقياس نشاط ADCP الوارد وصفها هنا، وقد ثبت منذ ذلك الحين أنها قوية واستشهد بها في أكثر من 80 دراسة. البروتوكول الموصوف هنا يتكيف مع هذه التقنية للاستخدام مع خلايا BM الأولية للمرة الأولى. كانت الدراسات السا…
The authors have nothing to disclose.
نشكر الدكتورة سوزان زوللا بازنر في قسم الطب وقسم الأحياء الدقيقة في كلية إيكان للطب في جبل سيناء على مراجعة المخطوطات. وقدمت المؤسسة الوطنية للصحة/المعهد الوطني للصحة/المعهد الوطني للصحة/المركز الوطني للصحة/المركز الوطني للصحة/اللجنة الوطنية للصحة/اللجنة الوطنية للصحة/اللجنة الوطنية للصحة/اللجنة الوطنية للصحة/اللجنة الوطنية للصحة/اللجنة الوطنية للصحة/اللجنة الوطنية للصحة والقضاء على تنفيذ القدرات تمويلاً لهذا المشروع في إطار المنحة رقم R21 HD0 وبالإضافة إلى ذلك، تلقى ر. باول الدعم من أموال من قسم الطب، شعبة الأمراض المعدية، كلية إيكان للطب في جبل سيناء.
1 µm FluoSpheres NeutrAvidin-Labeled Microspheres | Thermo Fisher | F8776 | |
BD Pharmingen PE Mouse Anti-Human CD45 | BD | 560975 | |
Bovine serum Albumin | MP Biomedicals | 8810025 | |
Corning V-bottom polystyrene 96-well plate | Corning | 3894 | |
Cytochalasin D | Sigma | 22144-77-0 | |
EZ-Link NHS-LC-LC-Biotin kit | Thermo Fisher | 21338 | |
Falcon 15mL Conical Centrifuge Tubes | Corning | 352196 | |
Falcon 50mL Conical Centrifuge Tubes | Corning | 352070 | |
Fixable Viability Stain 450 | BD | 562247 | |
Formaldehyde solution | Sigma | 252549 | |
HBSS without Calcium, Magnesium or Phenol Red | Life Technologies | 14175-095 | |
Human BD Fc Block | BD | 564219 | |
Human Serum Albumin | MP Biomedicals | 2191349 | |
Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipers | Kimberly-Clark Professional | 34120 | |
PBS 1x pH 7.4 | Thermo Fisher | 10010023 | |
Polystyrene 10mL Serological Pipettes | Corning | 4488 | |
Protein Concentrators PES, 3K MWCO, 0.5 mL | Pierce | 88512 |