Summary

電気生理学的フィールド記録によるインターラメラ海馬CA1における長期シナプス可塑性の調査

Published: August 11, 2019
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Summary

我々は、長手方向海馬脳スライスの記録と刺激電極を使用し、生体内の背中海馬における縦方向に位置決めされた記録および刺激電極を用いて、細胞外のポストシナプスの可能性を呼び起こし、実証した。縦方向の中間ラメラCA1に沿った長期シナプス可塑性。

Abstract

海馬におけるシナプス可塑性の研究は、CA3-CA1ラメラネットワークの使用に焦点を当てている。縦方向のインターラメラCA1-CA1ネットワークにはあまり注意が払われていない。しかし最近,CA1-CA1ピラミッド型ニューロン間の関連性が示されている.したがって、海馬の縦方向インターラメラCA1-CA1ネットワークがシナプス可塑性をサポートしているかどうかを調る必要がある。

我々は、生体内およびインビトロの両方の電気生理学的フィールド記録を用いて、海馬間CA1ネットワークにおける長期シナプス可塑性の有無を調査するプロトコルを設計した。生体内細胞外の記録では、記録および刺激電極を縦方向の角度で後部海馬の中枢側軸に配置し、フィールド興奮ポストシナプス電位を呼び起こす。インビトロ細胞外視野記録では、海馬縦断スライスを中時間平面と平行に切断した。記録および刺激電極は、縦軸に沿って海馬の地層ラジエータム(S.O)および地層放射(S.R)に配置した。これにより、誘発された興奮性ポストシナピティの方向性と層特異性を調べ取ることを可能にした。既に確立されたプロトコルは、インビボとインビトロの両方で長期増強(LTP)および長期うつ病(LTD)を誘導するために使用された。我々の結果は、縦方向の中間ラメラCA1ネットワークが指向性または層特異性なしでN-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)受容体依存性長期増強(LTP)をサポートすることを実証した。しかし、横断ラメラネットワークとは対照的に、インターラメラネットワークは有意な長期うつ病(LTD)を有しなかった。

Introduction

海馬は認知研究1、2、3で広く使用されている。横軸の海馬ラメラネットワークは、歯状のジャイル、CA3、およびCA1領域から構成される三シナプス回路を形成する。ラメラネットワークは、平行で独立したユニット4、5であると考えられている。このラメラの視点は、海馬の生体内およびインビトロ電気生理学的研究の両方に対する横方向と横スライスの使用に影響を与えました。新しい研究に照らして、ラメラ仮説は6を再評価され、海馬の中間ラメラネットワークにも注意が払われています。海馬間ネットワークに関しては、CA3領域は長い間調査されてきた7、8、9、10、しかし、縦方向のCA1海馬領域は受け取った最近まで比較的注意が払わなされなくなっき。CA1インターラメラネットワークに関しては、ラットのドルソベンストラ縦海馬CA1軸に沿った短期的なシナプス特性が11変化することが示されている。また、ラットにおける海馬の縦軸に沿って系統的に配置された相及び場所に応答する海馬細胞のクラスターが、短期記憶タスク12を受けていることが判明した。また、てんかん発作活動は、縦軸13に沿って海馬全体に沿って同期していることが判明した。

しかし、縦方向のCA1海馬領域のほとんどの研究は、CA3からCA1領域への入力利用している11、14、15.独自のプロトコルを使用して縦方向の脳スライスを作成し、我々の前の研究は、縦軸に沿ったCA1ピラミッド状ニューロンの関連性を実証し、ニューロンシグナル伝達を効果的に処理する能力16を関与した。しかし、横入力のない縦軸に沿ったCA1ピラミッド状ニューロンが長期シナプス可塑性をサポートできるかどうかを判断する必要がある。この知見は海馬に関する神経学的問題の調査に別の角度を追加することができます。.

情報伝達の有効性を適応させるニューロンの能力は、シナプス可塑性として知られています。シナプス可塑性は、学習および記憶17、18、19、20などの認知プロセスの基礎となるメカニズムとして関与している。長期シナプス可塑性は、神経応答の強化を表す長期増強(LTP)、または神経応答の弱体化を表す長期うつ病(LTD)のいずれかとして実証される。海馬の横軸では長期シナプス可塑性が研究されている。しかし、これはCA1ピラミッド型ニューロンの海馬縦軸における長期シナプス可塑性を実証する最初の研究である。

Yang et al.16によって使用されるプロトコルから構築し、CA1 ピラミッド型ニューロンの海馬縦軸で LTP および LTD を実証するプロトコルを設計しました。我々は、インビトロ実験のために5〜9週齢と生体内実験のために6-12週齢の間の年齢を有するC57BL6雄マウスを使用した。この詳細な記事は、インビトロ記録のためにマウスから得られた縦海馬脳スライスの方法と、生体内記録が縦軸に記録された方法を示す。インビトロ録音では、海馬の中隔末端と時間的な末端を標的にして縦方向CA1シナプス可塑性の指向性特異性を調べた。また、海馬の地層オリエンスと地層放射体からの記録により、縦方向CA1シナプス可塑性の層特異性を調べました。生体内記録では、海馬の長方向に最も適した角度を調べました。

インビボとインビトロ細胞外視野の両方を用いて、LTPではなくLTPで提示された縦方向に接続されたCA1ピラミッドニューロンを観察した。ただし、CA3 ニューロンと CA1 ニューロンの両方を含む横方向は、LTP と LTD の両方をサポートします。海馬の横方向と縦方向のシナプス機能の区別は、その機能的接続性の違いを推測的に示す可能性がある。シナプス能力の違いを解読するには、さらなる実験が必要です。

Protocol

すべての動物は、国立衛生研究所の動物ケアと使用のガイドラインと規制に従って治療されました。ここに記載されているすべての方法は、香港市立大学と仁川国立大学の機関動物管理利用委員会(IACUC)によって承認されています。 1. インビボフィールド記録 動物の準備 ウレタン(25g当たり0.06g)を食後に注射し、マウスを麻酔する。アトロピンの筋肉内注射?…

Representative Results

我々は、生体内とインビトロの両方の細胞外記録を用いて海馬の縦CA1ピラミッド型ニューロンの長期シナプス可塑性を調べた。LTPおよびLTDは、海馬の横軸において一方向であることが実証されている長期シナプス可塑性のファセットである。 ここでは、縦方向海馬脳スライスを用いて、海馬のCA1縦軸にLTPがあることを示した。横のスライスに対して垂直である中立軸に?…

Discussion

このプロトコルは、インビトロの海馬の縦方向CA1-CA1軸における脳スライスと同様に、生体内での長期シナプス可塑性を誘導する方法を示す。概要を説明した手順は、実験者が縦方向の海馬CA1-CA1接続でLTPとLTDを調査するのに十分な詳細を与える。フィールドの興奮性の可能性を正常に記録するために必要なスキルを磨くためには、練習が必要です。

練習が必要なだけでな…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この研究は仁川国立大学(国際協同組合)研究助成金の支援を受けています。データ収集を手伝ってくださったチョイさんに感謝申し上げます。

Materials

Atropine Sulphate salt monohydrate, ≥97% (TLC), crystalline Sigma-Aldrich 5908-99-6 Stored in Dessicator
Axon Digidata 1550B
Calcium chloride Sigma-Aldrich 10035-04-8
Clampex 10.7
D-(+)-Glucose ≥ 99.5% (GC) Sigma-Aldrich 50-99-7
Eyegel Dechra
Isoflurane RWD Life Sciences R510-22
Magnesium chloride hexahydrate, BioXtra, ≥99.0% Sigma-Aldrich 7791-18-6
Matrix electrodes, Tungsten FHC 18305
Multiclamp 700B Amplifier
Potassium chloride, BioXtra, ≥99.0% Sigma-Aldrich 7447-40-7
Potassium phosphate monobasic anhydrous ≥99% Sigma-Aldrich 7778-77-0 Stored in Dessicator
Pump Longer precision pump Co., Ltd T-S113&JY10-14
Silicone oil Sigma-Aldrich 63148-62-9
Sodium Bicarbonate, BioXtra, 99.5-100.5% Sigma-Aldrich 144-55-8
Sodium Chloride, BioXtra, ≥99.5% (AT) Sigma-Aldrich 7647-14-5
Sodium phosphate monobasic, powder Sigma-Aldrich 7558-80-7
Sucrose, ≥ 99.5% (GC) Sigma-Aldrich 57-50-1
Temperature controller Warner Instruments TC-324C
Tungsten microelectrodes FHC 20843
Urethane, ≥99% Sigma-Aldrich 51-79-6
Vibratome Leica VT-1200S
Water bath Grant Instruments SAP12

Referências

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Citar este artigo
Tetteh, H., Lee, J., Lee, J., Kim, J. G., Yang, S. Investigating Long-term Synaptic Plasticity in Interlamellar Hippocampus CA1 by Electrophysiological Field Recording. J. Vis. Exp. (150), e59879, doi:10.3791/59879 (2019).

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