성인 마우스 숫자 절단 및 재생 : 포유류 블라스터 마 형성 및 intramembranous Ossification을 조사하는 간단한 모델

포유동물은 인간 및 마우스를 포함하며, 말단 지골(P3)의 말단 절단 후 그들의 자릿수의 팁을 재생할 수 있는 능력을 가지며,^2,3. 마우스에서, 재생 반응은 절단 수준 의존; 점점 근위 수 자릿수 절단P3 네일 매트릭스^4,5,6에 절단 시절단에서 완전한 재생 실패까지 점진적으로 감쇠 재생 반응을 표시 ^{, 7명 , 8.}P3 재생은 절단된 구조물을 재생하기 위해 형태 형성을 겪는 증식 세포의 집단으로서 정의되는 블라스마의 형성에 의해 매개된다^9. 절단에 의해 손실 된 구조를 재생하는 블라스테마의 형성, 프로세스 는 상형 재생이라고, 부상 후 기존의 조직 수리에서 다조직 수준의 P3 재생 반응을 구별^{6, 10}. P3 재생은 상처 치유^11,12,뼈 증^11,12,및 12를 포함한 복잡한 재생 과정을 조사하는 재현 가능하고 절차적으로 간단한 모델입니다. 혈관신생^13,말초신경재생14, 골수변환을 통한 골수변환(15).

면역성 화학을 이용한 이전 연구는 블라마가 이질성, 혈관, 저산소성 및 매우 증식성^{11,13,15,16임을}입증했다. 말단 P3 절단 에 이어, 초기 블라스트마는 처음에 P3 골막 및 내분과 연관되며 뼈^{표면(15)에}인접한 강력한 증식 및 초기 골형성을 특징으로 한다. 뼈 분해 및 상처 폐쇄 후, 이질적인 blastema는 후피오스텔스와 내분과 관련된 세포의 병합에 의해 형성되고, 그 다음에는 인트라엠브라우스 골화를 ^{통해 뼈를 포함한 골반 성분의 분화가 뒤따릅니다. 15}.

상해에 응하여 뼈 수리는 전형적으로 endochondral 골화에 의해, 즉 후속 뼈 형성을 위한 템플릿을 형성하는 초기 연골 굳은 살을 통해 발생합니다^17,18. 긴 뼈 intramembranous 골화, 즉, 연골 중간체없이 뼈 형성, 일반적으로 복잡한 산만 장치 또는 수술 고정을 사용하여 유도^19,20. 자리 재생 반응은 기존의 intramembranous ossification 모델에 비해 이점을 제공하는 전 임상 모델입니다: 1) intramembranous ossification을 자극하기 위하여 외부 또는 내부 고정 포스트 상해를 요구하지 않습니다, 2) 각 동물의 4자리 숫자를 사용하여 수행하여 동물 사용을 최소화하면서 샘플을 최대화하고 3) 생체 내 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (μCT) 분석을 쉽고 빠르게 수행 할 수 있습니다.

본 연구에서, 우리는 재현 가능하고 강력한 재생 반응을 달성하기 위해 표준화 된 P3 절단 평면을 보여줍니다. 또한, 파라핀 섹션을 사용하여 파라핀 섹션을 사용하여 파라페증 형성, 재생의 맥락에서의 재혈관화, 인트라엠브러스를 통한 뼈로의 배반 변환을 시각화하는 최적화된 형광 면역조직 화학 프로토콜을 시연합니다. 고성화. 우리는 또한 재생 과정에서 동일한 숫자의 뼈 형태, 부피 및 길이의 변화를 식별하기 위해 순차적 인 생체 내 μCT의 사용을 보여줍니다. 이 프로토콜의 목적은 절단 후 포유류 배증마 형성을 조사하고 2 가지 기술, 형광 면역 조직 화학 및 생체 내 순차적 μCT를 입증하는 것입니다.