Biopsie et vitrification humaines de Blastocyst

L’objectif principal de l’embryologie humaine moderne est de maximiser le nombre de naissances vivantes par cycle stimulé et de réduire les coûts, le temps et les efforts pour atteindre une grossesse. Pour atteindre cet objectif, des approches validées pour la sélection des embryons devraient être utilisées pour identifier les embryons compétents en matière de reproduction au sein d’une cohorte obtenue au cours d’un cycle de FIV. Selon les dernières preuves, la culture blastocyste¹ combinée à des tests chromosomiques complets et au transfert d’embryons euploïdes vitrifiés (ET) est le cadre le plus efficace pour augmenter l’efficacité de la FIV². De toute évidence, le dépistage de l’anéuploïde nécessite un spécimen embryonnaire, qui est actuellement principalement représenté à partir de quelques cellules extraites du trophectoderm (TE), c’est-à-dire la section du blastocyste qui donne naissance aux annexes embryonnaires (par exemple, le placenta) pendant la grossesse . Au-delà de l’analyse karyotype, des mutations génétiques uniques pourraient également être évaluées à partir d’une biopsie TE dans le cadre d’une stratégie clinique connue sous le nom de test génétique préimplantatoire (PGT; -A pour les anéuploidies, -SR pour les réarrangements chromosomiques structurels, -M pour les maladies monogéniques). D’autres méthodes de biopsie d’ovocyte/embryon ont été théorisées et adoptées cliniquement au cours des dernières décennies, à savoir la biopsie des corps polaires et la biopsie blastomere. Cependant, leur utilisation est réduite de nos jours puisque leurs inconvénients procéduraux (p. ex., charge de travail et risque accrus d’impact sur la reproduction) et leurs limitations diagnostiques (p. ex., problèmes d’analyse cellulaire unique) entravent implicitement un équilibre suffisant entre les coûts, les risques et les avantages (pour un examen voir³).

Dans cet article, l’un des protocoles principaux pour la biopsie de TE est soigneusement décrit avec les procédures suivantes de vitrification, de réchauffement et de transfert exigées. Le flux de travail décrit ici est idéal pour une unité DE TGP occupée.

Comme déjà décrit précédemment par notre groupe^4,5, la procédure implique l’ouverture séquentielle de la pellucida zona de blastocystes entièrement élargis et l’élimination de quelques cellules TE (en moyenne 7-8). Comparée à la méthode de biopsie blastocyste à base d’éclosion laser-assistée³6, cette procédure pourrait faciliter le programme quotidien d’une unité de FIV où les procédures délicates, telles que la biopsie blastocyste et la vitrification, doivent être exécutées en temps opportun. Dès que le blastocyste atteint sa pleine expansion, la biopsie peut être effectuée en sélectionnant les cellules TE à enlever, empêchant ainsi le risque d’hernie de la masse cellulaire interne (ICM), ce qui rendrait autrement la procédure difficile. Dans la littérature, un troisième protocole de biopsie blastocyste a également été décrit, qui implique l’éclosion au laser assistée étant effectuée une fois que l’embryon a déjà atteint le stade blastocyste, quelques heures avant la procédure^5,7. Cependant, cette approche prend plus de temps et convient principalement aux unités de FIV qui mettent en œuvre la biopsie TE entre les mains d’opérateurs peu expérimentés et en raison d’une charge de travail quotidienne modérée-faible.

L’injection de spermatozoïdes intracytoplasmatic (ICSI)⁸ devrait être une technique consolidée si l’objectif de mener des analyses génétiques dans la FIV. De même, un système de culture approprié pour récolter en toute sécurité les embryons au stade blastocyste est crucial pour la mise en œuvre de la stratégie de biopsie TE. Un nombre suffisant d’incubateurs, ainsi que l’utilisation de faible tension d’oxygène sont des conditions préalables clés à cette fin, de ne pas compromettre le taux de blastocyste⁹. En même temps, un programme de cryoconservation efficace est nécessaire pour gérer en toute sécurité un cycle pgT. Au cours de la dernière décennie, la mise en œuvre de la vitrification a augmenté les taux de cryo-survie des embryons, même jusqu’à 99 %^10,11. Cela a fourni suffisamment de temps pour effectuer des tests génétiques et reporter le transfert d’embryons au cycle menstruel suivant, sur un endomètre non stimulé et probablement plus réceptif¹².

La biopsie TE et la vitrification exigent des tâches exigeantes et leur efficacité peut varier d’un opérateur inexpérimenté à l’autre. Une période de formation spécifique est donc préconisée avant de permettre à chaque opérateur d’effectuer ces interventions cliniquement; en outre, le maintien des compétences des opérateurs devrait être évalué périodiquement en surveillant les indicateurs de performance clés (KPI) pour les procédures de cryoconservation et de biopsie. Chaque clinique de FIV doit définir les indicateurs de la santé interne à cette fin, qui doivent se rapprocher de ceux publiés par les consortiums internationaux et/ou des résultats publiés par les laboratoires de référence.

La biopsie TE, le réchauffement de la vitrification et les procédures de témoignage sont des techniques validées dans notre unité, qui ont été normalisées dans tous les opérateurs impliqués comme indiqué dans trois publications précédentes^11,13,14 .