לנטינגינה ג'ין מתווכת השתקה האדם פסאודו איון מוכן לוחות מצורף נמוך

ההפסד של מסה תא ביתא פונקציונלי הוא הפתולוגיה המרכזית עבור שני סוג 1 וסוכרת סוג 2¹. בעוד תאי ביתא הם המפיקים של האינסולין באיים הלבלב, תקשורת בין תאי ביתא ותאים שאינם ביתא ממלא תפקיד קריטי בוויסות הפרשת האינסולין². בנוסף, דיסתקנה של הפרשת גלוקגון תורמת להירגליקמיה בסוכרת³. כך, יש עניין חזק לווסת את הביטוי הגנטי של תאים בתוך איונים הלבלב כדי לטפל במנגנון מאחורי התפתחות של התפקוד של איון בסוכרת. מגוון רחב של גישות כולל עכברים טרנסגניים זמינים כדי לווסת את הביטוי הגנטי של איונים של העכבר. עם זאת, איונים אנושיים ועכברים להראות אינבציה שונה, התפלגות התא, היחס של ביתא לתאי אלפא, ואת התגובה הסוד⁴. לכן, הערכה ישירה של הפונקציה גנטי באיים האנושיים הוא חשוב מאוד להבנת הפתופסולוגיה של איולי הלבלב האנושי.

וקטור אדנונגיפי הוא וקטור ויראלי הנפוץ ביותר כדי לשנות את איולי הלבלב בחוץ בגלל היעילות הגבוהה של התמרה בתאים שאינם מפרידים. עם זאת, אדנווירוס לא לחדור לליבה של איונים ביעילות, במיוחד באיים האנושיים⁵, ו ציטוטוקסינים במינון גבוה⁶. יחסית, וקטור לנטינגיל הוא פחות ציטוטוקסיני ומספק גנים אקסוגניים לצמיתות לתוך כרומוזום של התאים post-mitotic, מה שהופך אותו רכב נבדק נרחב עבור טיפול גנטי⁷. עם זאת, את היכולת של הנגיף כדי לחדור את הליבה של איים אנושיים שלמים הוא גם מוגבל, ובכך דורשים פיזור חלקי על ידי העיכול אנזימטי כדי להגביר את יעילות התמרה⁸. האזהרה עם הפיזור של איים אנושיים שלמים היא ההפרעה של תא תא ותקשורת תא מטריקס, אשר מתפשר על הרגולציה הדינמית של הפרשת אינסולין קריטית לתחזוקת הומאוסטזיס גלוקוז בבני אדם⁹. לכן, זה כבר מאתגר להעריך את ההשפעה של אפנון גנטי על הרגולציה הדינמית של הפונקציה איון במודל של איונים אנושיים.

זה כבר ידוע כי מפוזרים תאים איון מ בני אדם מכרסמים באופן עצמאי מחדש לתוך מבנים כמו איון שנקרא “פסבדו”. פסאודו איים להראות ביתא ולא התפלגות תא ביתא דומה הילידים^10,11. בנוסף, לאחר תרבות ארוכת טווח, האיים המקומיים מאבדים בהדרגה את הפרשת האינסולין הראשונית בשלב הראשון^5,10,¹¹,¹². עם זאת, פסבדו-מוח הפגינו שימור טוב יותר של הפרשת האינסולין בשלב הראשון בתגובה לגלוקוז לעומת איונים מקומיים לאחר אותה תקופה של תרבות⁵. בנוסף לשימור טוב יותר של הפרשת אינסולין, לצבור מבוקר גודל של תאים איון האדם בלוחות מצורף נמוך¹¹ מספק חלון של הזדמנות להציג וקטורים וירוס לפני הצבירה שלהם לתוך . מאוד מאיים מספר מחקרים הוכיחו את כלי השירות של הפסבדו בשילוב עם התמרה מתווכת. Caton ואח ‘¹³ דיווחו כי המבוא של חלבון פלורסנט ירוק (gfp) הביעה הבעה וירוס היתה השפעה קטנה על הפרשת אינסולין תוך השגת ביטוי הומוגנית של gfp ב מדומה לחולדה לעומת שליטה לא נגוע. הם גם הפגינו את ההשפעה הספציפית של connexins שונים על הפרשת אינסולין על ידי הבעת היתר connexins 32, 36, ו 43 באמצעות הנגיף¹³. מדומה האנושי הכין עם מסחרית זמין 96-ובכן אולטרה נמוך מצורף צלחת הראו כי הבעה ויראלי-מתווכת הביטוי של שעתוק גורם SIX3 משפר את הפרשת האינסולין המוערך על ידי דגירה סטטי¹⁴. לאחרונה, מדומה של האדם שהוכן בלוח ההחזקות ה96-והטוב אולטרה-נמוך, שימשו לצמצום השימוש בגלוקינאז דרך רנ א קצר ויראלי (שרין) כהוכחה לעיקרון כדי להראות כי הפרשת אינסולין מגורה מופחתת, בעוד הפרשת אינסולין מאולצת נשמרה ב^-5. המחקר הראה גם כי מדומה האנושי דומים לאיונים מקומיים בביטוי גנים ופרופילי הפרשה, תמיכה נוספת של השירות של פסאודו האדם כדי לנתח את הרגולציה של הפונקציה איון⁵. למרות הפריזיה לא בוצעה, צלחת תרבות המיקרוגל ביולוגי שלאחרונה הפך להיות זמין מסחרית, דווח גם להיות תואם התמרה ויראלית והפיק מדומה ומיוצר האנושי הציג אינסולין מעולה הפרשה במבחנה ובvivo לאחר השתלת¹¹. באופן קולקטיבי, היווצרות מדומה האדם בשילוב עם התמרה ויראלית היא גישה פשוטה ויעילה כדי לחקור את האי האנושי פתופסולוגיה, מתן כלי רב ערך לבצע מחקרים מכניסטיים באיונים אנושיים.

בדוח הנוכחי, פרוטוקול ליצירת מגוון מדומה של האדם עם וירוס באמצעות שתי פלטפורמות זמינות מסחרית, a 96-היטב אולטרה מצורף לוחית החיבור ולוח תרבות המיקרוגל מוצג. שניהם להשיג אפנון יעיל של ביטוי גנים וליצור מדומה אנושי התואמים הערכות במורד הזרם כולל דגירה סטטי הפריזיה.