Her presenterer vi en protokoll for å ta blodprøver fra arteria vene av mus.
Musen er den fremste pattedyr modellen for å studere menneskelig sykdom og menneskers helse. Imidlertid er blodprøve samling fra mus utfordrende i forskningsarbeid. Hale blod samling er en populær metoden når en liten beløpet av blod eksemplar er behøvde. Orbital arterien kan vurderes hvis en stor mengde blod er nødvendig, men dette blod innsamlings metoden har etiske problemstillinger. Tidligere viste vi gjennomførbarhet og sikkerhet for blodprøve samling gjennom arteria vene punktering i rotter, og her undersøker vi om denne metoden kan brukes i mus. Vi rapporterer at denne metoden er trygg og praktisk for blod samling hos mus. Blod samling gjennom arteria vene punktering i mus kan være en praktisk metode i daglig forskning fungerer.
Blodprøve samling fra mus er viktig i de fleste forskningslaboratorier. De konvensjonelle tilnærmingene for blod samling hos mus er hale skjæring når mindre enn 100 μL av prøven er nødvendig1. Men hvis mer enn 100 μL av blod er nødvendig på et nonterminal tidspunkt, retroorbital, submandibular blødning eller submental blod samling er de hyppigst betraktet teknikker2. I noen tilfeller, den hals vene catheterization gjennom et kirurgisk snitt ble vedtatt som en alternativ metode3.
Likevel, de ovennevnte metodene er skadelige for mus. Etter beste viten, er retroorbital metoden ikke allment akseptert på grunn av den potensielle risikoen for komplikasjoner4,5. Operasjon relaterte traumer ikke bare skjer i det synlige området6,7, men også dypt inne i bane6. Dessuten er submandibular blod samling stressende8 og kan være forbundet med overdreven blødning2,9. Basert på vår tidligere forskning10,11, her introduserer vi en ny strategi for blod samling fra arteria vene i mus. Sikkerhet, gjennomførbarhet, og innhentet blod volum med denne teknikken er presentert og diskutert.
Denne rapporten representerer en forlengelse av tidligere forskning på blod prøvetaking gjennom arteria vene punktering i rotter11. Som musen er den mest brukte forskningen dyr, ville det være verdifullt å se om denne teknikken kan også brukes på mus. Utfordringen kommer fra den relativt mindre diameter på arteria vene.
I dagens forskning, fant vi at arteria punktering i mus er en mulig og pålitelig måte å samle blod. Sammenlignet med konvensjonelle metoder som hale blodåre skjæring eller orbital blod samling, er det ingen etiske problemstillinger av denne metoden. Alle dyrene overlevde etter denne fremgangsmåte uten flytende komplettere etter i nærheten 200 μL av blod trekking, og dyrene det kan brukes for fremme eksperimentelle studier. Teoretisk sett kan den totale prøven volum ekstraksjon ikke nå mer enn 10% av totalt sirkulerende blod volum hver gang og det totale volumet av en voksen dyr er 55 til 70 mL/kg kroppsvekt5. For musene som brukes i denne forskningen (21.6-28.3 g), bør den maksimale volum utvinningen være rundt 200 μL. Vi setter dermed blodprøve beløpet rundt 200 μL for hver mus. Manglende evne til å måle blodtrykk, hjertefrekvens, og andre stress parametre er de viktigste begrensningene i denne rapporten.
Tilstrekkelig generell anestesi er en annen viktig sak å garantere suksessen til punktering. Musene skal forbli stille under punktering prosedyren for å unngå risikoen for å skade fartøyet ved nålen. Vi fant at pentobarbital natrium på 60 mg/kg for generell anestesi kunne tilfredsstille ideell dybde av anestesi. En downside av denne agenten er relativt lang utvinning tid (i snitt ca 30 minutter). I noen institutter, isoflurane inhalasjon brukes til kort utvinning tid og bør tas i betraktning som en alternativ anestesi valg15.
Plasseringen av arteria vene er vist i Figur 4. På grunn av den tynne veggen og lavt trykk i venen, ville den fremre og bakre vegg av arteria vene festes til hverandre under trykket av en nål mens nålen beveger seg fremover (figur 5a). Mens trekke stempelet sakte bakover, vil de vedlagte veggene skille spontant, og tuppen av nålen kunne gå inn i den sanne hulrom i fartøy og blod kan renne inn i sprøyten under vedvarende negativt trykk (figur 5B). Bruk av et vakuum blod innsamlingssystem16 kan også favorisere blod samlingen. På grunn av den relativt lille diameteren på mus arteria vene, kan det være feil selv for en erfaren operatør. For en nybegynner, anbefaler vi arteria vene punktering i rotter som rapportert11. Etter flere vellykkede punktering forsøk på rotter, kan suksessen rate på arteria vene punktering i mus bli betydelig forbedret. Sørg for at den nøyaktige posisjonen til punktering bare caudal til midten av krageben benet. Nålen beveger seg oppover og skallen til overlegen sternal Fossa er andre viktige punkter for å garantere en vellykket punktering.
Avslutningsvis er arteria vene punktering en trygg og effektiv metode for blod samling i mus. I tillegg til hale blodåre skjæring og retro-orbital plexus blod samling, denne metoden er gjennomførbart, trygg, og egnet for observasjons undersøkelser på flere tid poeng i mus.
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av stipendet fra National Natural Science Foundation i China no. 81670269, no. 81500355 og no. 81500226.
1.0 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
75% ethanol | Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University | made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | |
adhesive tape | 3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany) | 1534-1 | |
canvas gloves | for anesthesia | ||
electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China) | KP-3000 | |
epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China) | 8281744 | |
heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU) | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) | H32025851 | |
mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | Kunming spcies | |
needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
pentobarbital sodium (used solution 1%) | Merck | P-010-1ML | |
physiological saline, 100 mL | Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China) | H43020454 | |
stastical software | International Business Machines | SPSS Statistics 25 | |
tube, 2 mL | Hubei Jinxing Technology & Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China) | MCT-150-C |