यहाँ, हम चूहों के अधोजत्रुक नस से रक्त के नमूने लेने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं ।
माउस मानव रोग और मानव स्वास्थ्य के अध्ययन के लिए अग्रणी स्तनधारी मॉडल है । हालांकि शोध कार्य में चूहों से रक्त का नमूना संग्रह चुनौतीपूर्ण है । पूंछ रक्त संग्रह एक लोकप्रिय तरीका है जब रक्त के नमूने की एक छोटी राशि की जरूरत है । नेत्रगुहा धमनी पर विचार किया जा सकता है अगर रक्त की एक बड़ी राशि की जरूरत है, लेकिन इस रक्त संग्रह विधि नैतिक मुद्दों है । पूर्व में, हम चूहों में अधोजत्रुक नस पंचर के माध्यम से रक्त नमूना संग्रह की व्यवहार्यता और सुरक्षा का प्रदर्शन किया, और यहाँ हम इस विधि चूहों में इस्तेमाल किया जा सकता है कि जांच । हम रिपोर्ट करते हैं कि यह तरीका चूहों में रक्त संग्रह के लिए सुरक्षित और व्यावहारिक है । चूहों में अधोजत्रुक नस पंचर के माध्यम से रक्त संग्रह दैनिक अनुसंधान कार्यों में एक सुविधाजनक तरीका हो सकता है ।
अधिकांश शोध प्रयोगशालाओं में चूहों से रक्त नमूना संग्रह आवश्यक है । चूहों में रक्त संग्रह के लिए पारंपरिक दृष्टिकोण पूंछ काटने जब नमूना की तुलना में कम १०० μL है1की जरूरत है । हालांकि, यदि एक गैर टर्मिनल समय बिंदु पर १०० μL से अधिक रक्त की आवश्यकता होती है, तो retroकक्षीय, अवअधोहनुज रक्तस्राव या submental रक्त संग्रह सबसे अधिक माना जाता है तकनीक2। कुछ अवसरों में, सर्जिकल चीरा के माध्यम से जुगुलर शिरा कैकैटेराइजेशन को वैकल्पिक विधि3के रूप में अपनाया गया था ।
इसके बावजूद उपरोक्त तरीके चूहों के लिए नुकसानदेह हैं । हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए, retroorbital विधि जटिलताओं के संभावित जोखिम के कारण व्यापक रूप से स्वीकार नहीं किया है4,5. ऑपरेशन से संबंधित आघात न केवल दृश्य क्षेत्र6,7में होता है, बल्कि6कक्षा के भीतर भी गहरा होता है । इसके अलावा, अवअधोहनुज रक्त संग्रह8 तनावपूर्ण है और अत्यधिक रक्तस्राव2,9के साथ जुड़ा हो सकता है । हमारे पूर्व अनुसंधान के आधार पर10,11, यहां हम चूहों में अधोजत्रुक नस से रक्त संग्रह के लिए एक नई रणनीति का परिचय । सुरक्षा, व्यवहार्यता, और इस तकनीक के साथ प्राप्त रक्त की मात्रा प्रस्तुत कर रहे है और चर्चा की ।
यह रिपोर्ट चूहों में11अधोजत्रुक नस पंचर के माध्यम से रक्त नमूने पर पिछले अनुसंधान के विस्तार का प्रतिनिधित्व करता है । माउस के रूप में सबसे अधिक इस्तेमाल किया अनुसंधान जानवर है, यह देखने के लिए अगर इस तकनीक को भी चूहों के लिए लागू किया जा सकता है मूल्यवान होगा । चुनौती अधोजत्रुक नस के अपेक्षाकृत छोटे व्यास से आता है ।
वर्तमान अनुसंधान में, हमने पाया कि चूहों में अधोजत्रुक पंचर रक्त इकट्ठा करने के लिए एक व्यवहार्य और विश्वसनीय तरीका है । पूंछ नस काटने या कक्षीय रक्त संग्रह के रूप में पारंपरिक तरीकों की तुलना में, वहां वर्तमान विधि के कोई नैतिक मुद्दों रहे हैं । लगभग २०० μL रक्त निष्कर्षण के बाद तरल की खुराक के बिना इस प्रक्रिया के बाद सभी जानवरों बच गया, और पशुओं आगे प्रयोगात्मक अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । सैद्धांतिक रूप से, कुल नमूना मात्रा निष्कर्षण कुल परिसंचारी रक्त की मात्रा प्रत्येक समय और एक वयस्क जानवर की कुल मात्रा का 10% से अधिक तक नहीं पहुंच सकता है ५५ ७० मिलीलीटर/ इस शोध में इस्तेमाल चूहों के लिए (21.6-283 जी), अधिकतम मात्रा निष्कर्षण के आसपास होना चाहिए २०० μL. हम इस प्रकार प्रत्येक माउस के लिए २०० μL के आसपास रक्त नमूना राशि सेट । रक्तचाप को मापने में असमर्थता, दिल की दर, और अन्य तनाव मापदंडों इस रिपोर्ट की मुख्य सीमाएं हैं.
पर्याप्त सामान्य संज्ञाहरण एक और महत्वपूर्ण मुद्दा पंचर की सफलता की गारंटी है । चूहों को पंचर की प्रक्रिया के दौरान चुप रहना चाहिए ताकि सुई द्वारा पोत को घायल करने के जोखिम से बचा जा सके । हमने पाया है कि pentobarbital सोडियम पर ६० मिलीग्राम/किलोग्राम सामान्य संज्ञाहरण के लिए संज्ञाहरण की आदर्श गहराई को पूरा कर सकता है । इस एजेंट के एक नकारात्मक पक्ष अपेक्षाकृत लंबी वसूली समय है (लगभग 30 मिनट के औसत) । कुछ संस्थानों में, isoflurane सांस लेना कम वसूली समय के लिए प्रयोग किया जाता है और एक वैकल्पिक संज्ञाहरण विकल्प के रूप में विचार में लिया जाना चाहिए15।
अवक्लेनेवियाई शिरा का स्थान चित्र 4में दर्शाया गया है । पतली दीवार और नस में कम दबाव की वजह से, पूर्वकाल और पीछे की दीवार अधोजत्रुक नस एक सुई के दबाव में एक दूसरे को देते हैं, जबकि सुई आगे बढ़ रहा है (चित्र 5a) । प्लंजर को पीछे की ओर निकालते समय, संलग्न दीवारें अनायास ही अलग हो जाएंगी, और सुई की नोक पोत की सही गुहा में प्रवेश कर सकती है और रक्त सिरिंज में निरंतर ऋणात्मक दाब के नीचे बह सकता है (चित्र 5B) । एक वैक्यूम रक्त संग्रह प्रणाली16 का उपयोग भी रक्त संग्रह एहसान हो सकता है । चूहों अधोजत्रुक नस के अपेक्षाकृत छोटे व्यास के कारण, वहां भी एक अनुभवी ऑपरेटर के लिए विफलताओं हो सकता है । एक नौसिखिया के लिए, हम चूहों में अधोजत्रुक नस पंचर की सिफारिश के रूप में11की सूचना दी । चूहों में कई सफल पंचर प्रयास के बाद, चूहों में अधोजत्रुक नस पंचर की सफलता दर काफी बढ़ाया जा सकता है । सुनिश्चित करें कि सही पंचर स्थान बस हंसली हड्डी के बीच में पुच्छ है । ऊपर की ओर और बेहतर स्टर्नल खात करने के लिए कपाल चलती सुई अंय महत्वपूर्ण बिंदुओं के लिए एक सफल पंचर गारंटी रहे हैं ।
अंत में, अधोजत्रुक नस पंचर चूहों में रक्त संग्रह के लिए एक सुरक्षित और प्रभावी तरीका है । पूंछ नस काटने और रेट्रो-कक्षीय जाल रक्त संग्रह के अलावा, इस विधि संभव है, सुरक्षित, और चूहों में कई समय बिंदुओं पर अवलोकन शोधों के लिए उपयुक्त है ।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को चीन के नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन नंबर ८१६७०२६९, नंबर ८१५००३५५ और नंबर ८१५००२२६ से मिलने वाले ग्रांट ने सपोर्ट किया ।
1.0 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
75% ethanol | Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University | made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | |
adhesive tape | 3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany) | 1534-1 | |
canvas gloves | for anesthesia | ||
electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China) | KP-3000 | |
epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China) | 8281744 | |
heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU) | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) | H32025851 | |
mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | Kunming spcies | |
needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
pentobarbital sodium (used solution 1%) | Merck | P-010-1ML | |
physiological saline, 100 mL | Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China) | H43020454 | |
stastical software | International Business Machines | SPSS Statistics 25 | |
tube, 2 mL | Hubei Jinxing Technology & Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China) | MCT-150-C |