Анализ аналогов иофеноковой кислоты в малых индийских mongoose (Herpestes Auropunctatus) Сера для использования в качестве устного бешенства Вакцинация Биологического маркера

Вирус бешенства (RABV) является отрицательным чувством одного мель лиссавирус, и циркулирует среди различных видов диких животных водохранилища в рамках заказов Carnivora и Chiroptera. Несколько видов мангуста являются резервуарами RABV, и небольшой индийский мангуст (Herpestes auropunctatus) является единственным резервуаром в Пуэрто-Рико и других Карибских островов в Западном полушарии^1,2,3 . Контроль циркуляции RABV в резервуарах дикой природы, как правило, осуществляется в рамках стратегии вакцинации против оральных бешенства (ORV). В Соединенных Штатах (США), эта деятельность по управлению координируется USDA / APHIS / Дикой службы Национальной программы по борьбе с бешенством (NRMP)⁴. В настоящее время в Пуэрто-Рико не существует программы дикой природы ORV. Исследования в вакцинах против бешенства и различных типов приманки для мангустов было проведенос многообещающими результатами предлагая ORV программа для мангустов возможно 5,^6,7,8.

Мониторинг воздействия ORV опирается на оценку поглощения приманки целевыми видами, которая обычно включает в себя оценку изменения серораспространенности противотел R. Тем не менее, эта стратегия может быть сложной задачей в районах с активной дикой природы ORV программ или в районах, где Р. является энзоотическим и фоновые уровни RABV нейтрализующих антител (RVNA) присутствуют в водохранилище видов. В таких ситуациях может быть полезным биомаркер, включенный в приманку или внешнюю матрицу приманки.

Различные биологические маркеры были использованы для мониторинга поглощения приманки в многочисленных видов, в том числе енотов (Procyon лотор)^9,10, stoats (Mustela горностай)^11,12, Европейские барсуки ( Мелес Мелес) ¹³, дикие кабаны (Sus scrofa)¹⁴, небольшие индийские мангусты¹⁵ и прерии собак (Cynomysludovicianus)^16,17, среди других. В США, операционные приманки ORV часто включают 1% тетрациклина биомаркер в матрице приманки для мониторинга поглощения приманки^18,19. Тем не менее, недостатки использования тетрациклина включают растущую озабоченность по поводу распределения антибиотиков в окружающую среду и что обнаружение тетрациклина, как правило, инвазивные, требующие удаления зубов или уничтожения животного для получения кости образцы²⁰. Родамин B был оценен в качестве маркера в различных тканях и может быть обнаружен с помощью ультрафиолетового (УФ) света и флуоресценции в волосах и усы^10,21.

Иофеноковая кислота (IPA) является белый, кристаллический порошок, который был использован для оценки потребления приманки в койотов (Canis latrans)²², арктическая лиса (Vulpes lagopus)²³, красная лиса (Vulpes vulpes)²⁴, еноты ^{9 До 9 , 25}, дикий кабан¹⁴, красный олень (Cervus elaphus scoticus)²⁶, Европейские барсуки¹² и хорьки (M. furo)²⁷, среди нескольких других видов млекопитающих. Время удержания IPA варьируется в зависимости от вида от менее чем двух недель в некоторых сумчатых^28,29, по крайней мере 26 недель в книжающих²⁶ и более 52 недель в домашних собак (Canis lupus familiaris)³⁰. Время удержания также может быть зависимым от дозы³¹. Иофеноковая кислота сильно связывается с альбумином в сыворотке крови и исторически была обнаружена путем измерения уровня йода в крови³². Этот косвенный подход был вытеснен высокопроизводительными методами жидкой хроматографии (HPLC) для непосредственного измерения концентраций иофеноковой кислоты с УФ-детектором^33,и в конечном итоге с жидкой хроматографией и масс-спектрометрией (LCMS) ^34,35. Для этого исследования была разработана высокочувствительная и селективная жидкая хроматография с тандемной масс-спектрометрией (LC-MS/MS), которая использует многократный мониторинг реакции (MRM) для количественной оценки двух аналогов иофеноксиновой кислоты. Наша цель состояла в том, чтобы использовать этот метод LC-MS/MS для оценки способности маркировки 2-(3-гидрокси-2,4,6-триоодобензил) пропаниной кислоты (метил-IPA или me-IPA) и 2-(3-гидрокси-2,4,6-triiodobenzyl) бутаноиновой кислоты (ethyl-IPA или et-IPA) при доставке в приманка для пленных мангустов.

Мангусты были живы ею, захваченными в ловушках в клетках, заманиваемых коммерчески доступными копчеными сосисками и рыбьим жиром. Мангусты размещались в отдельных клетках из 60 см х 60 см х 40 см из нержавеющей стали и кормили ежедневным рационом в размере 50 г коммерческого сухого кошачьего корма, дополняемого два раза в неделю коммерчески доступным куриным бедренным… Вода была доступна объявление libitum. Мы поставили два производных IPA, этил-IPA и метил-IPA, в плен мангусты в плацебо ORV приманки. Все приманки состояли из 28 мм х 20 мм х 9 мм фольги волдырь пакет с внешним покрытием (в дальнейшем “приманка матрицы”), содержащий порошкообразное куриное яйцо и желатин (Таблица материалов). Приманки содержали 0,7 мл воды или производной IPA и весили около 3 г, из которых 2 г были внешней матрицей приманки.

Мы предложили 16 пленных мангустов и МПА в трех концентрациях: 0,14% (2,8 мг и МПА в матрице приманки 2 г; 3 самца, 3 самки, 0,4% (2,8 мг и МГ АПИ в объеме упаковки 0,7 мл волдыря; 3 м, 3f) и 1,0% (7,0 мг этил-IPA в 0,7 мл блистерного пакета; 2 м , 2f). Общая доза 2,8 мг соответствует дозе 5 мг/кг^27,36 и основана на среднем весе мангуста 560 г в Пуэрто-Рико. Мы выбрали 1% в качестве самой высокой концентрации, как исследования показывают, отвращение вкуса кнекоторым биомаркеров может произойти в концентрациях Мы только предложили 1% дозы в волдырь пакет, как флоккуляция предотвратить растворение от растворения в растворителе достаточно, чтобы быть равномерно включены в матрицу приманки. Одна контрольная группа (2м, 1f) получила приманки, наполненные стерильной водой и без АПИ. Мы предлагали приманки мангустам утром (8 утра) во время или до кормления их ежедневного рациона обслуживания. Остатки приманки были удалены примерно через 24 часа. Мы собрали образцы крови до лечения, один день после лечения, а затем еженедельно до 8 недель после лечения. Мы обезопасили мангусты путем вдыхания изофлурана газа и собрали до 1,0 мл цельной крови путем венипанктуры черепной полы вены, как описано для хорьков³⁸. Мы центрифугированные образцы цельной крови, перенесли серту в криовиалы и хранили их при -80 градусах Цельсия до анализа. Не все животные были отобраны в течение всех периодов времени, чтобы свести к минимуму воздействие повторных черпает крови на здоровье животных. Контроль животных были отобраны на день 0, а затем еженедельно в течение 8 недель после лечения.

Мы доставили мне-IPA в трех концентрациях: 0,035% (0,7 мг), 0,07% (1,4 мг) и 0,14% (2,8 мг), все включены в матрицу приманки, с 2 мужчин и 2 женщин на группу лечения. Два самца и две самки получили приманки, наполненные стерильной водой, и не АПИ. Приманка предлагая раз и мангуста анестезии описаны выше. Мы собрали образцы крови до начала лечения на 1-й день, а затем еженедельно до 4 недель после лечения.

Мы проверили данные о концентрации сыворотки на нормальность и предполагаемые средства для концентрации iPA в сыворотке сыворотки различных групп лечения. Мы использовали линейную смешанную модель для сравнения средних концентраций сыворотки и IPA, объединенных между отдельными лицами. Тип приманки (матрица/волдырь пакет) был фиксированный эффект в дополнение к экспериментальной день, в то время как животное ID был случайный эффект. Все процедуры были запущены с использованием общего статистического программного обеспечения(Таблицаматериалов), и значение было оценено на уровне 0,05 евро.