Australiska ekosystem upprätthålla mänskligt liv genom tillhandahållande av tjänster, inklusive mat och fiber bland många andra dynamiska interaktioner¹. Ironiskt nog är det mänsklig verksamhet som fungerar som den dominerande föraren av ekosystem störningar genom biologisk mångfald förändring². Habitat fragmentering, känd som processen att dela upp stora sammanhängande livsmiljöer i små fläckar av mark, isolerade från varandra, är den stora antropogena biologiska mångfalden förändring hotar australiska ekosystem². Fragmentering av livsmiljöer förändrar strukturen och mångfalden av artsammansättningen i ett visst område, vilket minskar det område av livsmiljö som behövs för dessa arter för att bibehålla livskraftiga populationer². Resultatet av detta är ökad konkurrens mellan arter för resurser, inklusive mat, bränsle, fiber och vatten³. Förstörelsen av australiska ekosystem genom förändring av den biologiska mångfalden har katastrofala följder för många australiska inhemska arter¹.

Australiens mest ikoniska pungdjur arter, Koala (Phascolarctos cinereus), beror på australiska ekosystem förbli friska för sin överlevnad⁴. Införandet av den europeiska bosättningen orsakade en snabb nedgång i australiska populationer av koalaer, eftersom de slaktades för sina skinn i jakten på vinst i en stor export handel⁵. Detta övar förbjöds i 1980talet, och befolkningar av Koalas var därefter kompetent att stabilisera⁵. Emellertid, exponentiell tillväxt av den mänskliga befolkningen har resulterat i denna art konkurrerar om mycket av sin livsmiljö, och deras överlevnad är återigen under hot⁶. Enligt internationella naturvårdsunionen (IUCN) är alla populationer av australiska Koalas listade som sårbara för utrotning med en minskande befolknings trend⁷. Denna förteckning tillskrivs osäkerheten kring relevanta populations parametrar och markant variation i befolkningsutvecklingen för denna art⁷. Som den mest ikoniska och endemiska djur, Koalas gynnar till stor del den australiska ekonomin genom turism (NSW Office of Environment och Heritage 2018). En uppskattning tyder på att Koala relaterad turism har genererat cirka 9 000 arbetstillfällen och bidrar mellan $1,1 och $2 500 000 000 till ekonomin (NSW Office of Environment och Heritage 2018). Avlägsnandet av en art har potential att vara katastrofal, och kan ses i stadig nedgång av infödda australiska djurliv⁶. Dessutom kommer Australiens ekonomi känna förgreningar om populationer av australiska Koalas fortsätter att sjunka i den takt de är⁶.

Det föreslås att prevalensen av död och sjukdom som svar på Habitat fragmentering är resultatet av kronisk stress⁸. Redan, tjugofyra pungdjur arter har förklarats utrotade i Australien på grund av habitat fragmentering, med Koalas efter en liknande trend⁸. Komplexiteten i Habitat fragmentering och biologiska system är synergistisk men kan packas upp genom analys av stress Response⁶. I allmänhet, alla störningar i ett djur naturliga omgivningar aktiverar en komplex kaskad av neurohormonella händelser, känd som en “kamp eller flykt” svar^9,10. Detta svar på stress är en process som börjar i hjärnan där hypotalamus-hypofys-binjure (HPA) axeln aktiveras¹¹. En del av hjärnan som kallas hypotalamus frigör kortikotropinfrisättande hormon (CRH), som sedan signalerar den främre hypofysen att frigöra adrenokortikotrofiska hormon (ACTH)¹¹. Detta i sin tur stimulerar glukokortikoid sekretion från adrenal medulla. Kroppen cirkulerar glukokortikoider genom blodet, som avskiljer lagring av glukos från glykogen och mobiliserar glukos från lagrad glykogen¹¹. Denna kaskad av neurohormonella händelser är det svar som används av djuret för att hantera oförutsägbara stimuli¹¹. Men när glukokortikoider släpps och förblir förhöjda under en längre tid, djuret anses ha drabbats av kronisk stress^12,13. Denna process innebär att avstyra energi från andra kroppslig kroppsfunktioner, eftersom det behövs för pågående glukokortikoidproduktion¹³. Som ett resultat, kronisk stress kan förbjuda tillväxt, reproduktion och immunitet, alla är viktiga Fitness egenskaper som krävs för överlevnad¹⁴.

Att mäta ett djurs glukokortikoidproduktion är en vanlig indikator som används för att avgöra om djuret upplever fysiologisk stress¹⁵. För att göra detta kan glukokortikoider mätas i blodplasma, serum, saliv, urin eller avföring¹⁶. Emellertid, bevis tyder på att hår är en mycket mer effektiv indikator på kronisk stress, i motsats till de ovan nämnda¹⁶. Detta beror på att hår tros införliva blodburna hormoner under sin tillväxtfas; Det är relativt stabilt; och alla kortisol upptäcks i håret återspeglar fysiologiska stress upplevt under perioden av hårväxt, som kan vara veckor fram till månader¹⁶. Dessutom bör varje samling av kortisol vara icke-invasiv för att minimera stressen i samband med avskiljning och hantering¹⁶. Emellertid, någon stress upplevde under denna händelse skulle inte påverka glukokortikoid nivåer i hår¹⁶. Det har varit många studier som utforskar kompetensen att använda hår för att mäta långsiktig stress i ett antal djur, och inkluderar studier på renar, grizzlybjörnar, rhesusapor, muskoxen och brunbjörnar^{17,18, 19 , 20 , 21}. hår kortisol extraheras vanligtvis genom att först tvätta provet för att säkerställa svett och talg-härledda kortisol deponeras på ytan av håret inte samextraheras med kortisol och sedan pulverisera provet i en pärla-beater²². Efter tvättning måste provet torkas för att säkerställa fullständig avdunstning²². Slutligen, med hjälp av ett lösningsmedel, provet kan extraheras och beredas för att underlätta analysen av kortisol²². Det vanligaste lösningsmedlet som används för att utvinna kortisol från päls är metanol^21,23; emellertid, det finns vissa studier som använder etanol och isopropanol i deras kortisol utvinning tekniker. Till exempel, en studie som används etanol var framgångsrik för att utvinna kortisol från Human fostervatten²⁴. Dessutom, en studie som används isopropanol var framgångsrik för att utvinna kortisol från människohår och naglar^25,26. Av denna anledning, denna studie testade alla tre lösningsmedel (metanol, etanol, och isopropanol) för att avgöra vilken var den mest framgångsrika för utvinning av kortisol från prover av Koala päls.

Det primära syftet med denna studie var att använda nuvarande tekniker för att validera en optimal hormon utvinning teknik som ska användas som en icke-invasiv åtgärd av kortisol från Koala päls. Detta uppnåddes genom att testa tre extraktionsmedel (metanol, etanol och isopropanol). Vi hypotes om att metanol kommer att vara den optimala lösningsmedel som används för att utvinna kortisol från Koala päls eftersom det är den rekommenderade lösningsmedlet för utvinning av Arbor assay kortisol Kits²⁷.