Os ecossistemas australianos sustentam a vida humana através da prestação de serviços, incluindo alimentos e fibras, entre muitas outras interações dinâmicas¹. Ironicamente, é atividade humana que atua como o condutor dominante da perturbação do ecossistema através da mudança de biodiversidade². A fragmentação do habitat, conhecida como o processo de divisão de grandes habitats contínuos em pequenas manchas de terra, isoladas umas das outras, é a maior mudança de biodiversidade antropogênica ameaçando os ecossistemas australianos². A fragmentação do habitat modifica a estrutura e a diversidade da composição de espécies em uma determinada área, reduzindo assim a área de habitat necessária para que essas espécies mantenham populações viáveis². O resultado disso é o aumento da concorrência entre as espécies de recursos, incluindo alimentos, combustíveis, fibras e água³. A destruição de ecossistemas australianos através da mudança de biodiversidade está tendo conseqüências catastróficas em muitas espécies nativas australianas¹.

A espécie marsupial mais emblemática da Austrália, ocoala (Phascolarctos cinereus), depende dos ecossistemas australianos que permanecem saudáveis para sua sobrevivência⁴. A introdução do assentamento europeu causou um rápido declínio nas populações australianas de coalas, como eles foram abatidos por suas peles em busca de lucro em um grande comércio de exportação⁵. Esta prática foi proibida na década de 1980 e as populações de coalas foram então capazes de estabilizar⁵. No entanto, o crescimento exponencial da população humana resultou nesta espécie competindo por grande parte de seu habitat, e sua sobrevivência é novamente ameaça⁶. De acordo com a União Internacional para a conservação da natureza (IUCN), todas as populações de coalas australianas estão listadas como vulneráveis à extinção com uma tendência populacional decrescente⁷. Este anúncio é atribuído à incerteza em torno dos parâmetros populacionais relevantes e à variação acentuada das tendências populacionais para esta espécie⁷. Como os animais mais emblemáticos e endêmicos, coalas em grande parte beneficiam a economia australiana através do turismo (NSW Office of Environment and Heritage 2018). Uma estimativa sugere que o turismo relacionado Koala gerou aproximadamente 9.000 empregos e contribui entre $1.01 e $2500000000 para a economia (NSW escritório de meio ambiente e património 2018). A remoção de qualquer uma das espécies tem o potencial de ser catastrófico, e pode ser visto no declínio constante da vida selvagem australiana nativa⁶. Adicionalmente, a economia de Austrália sentirá as ramificações se as populações de coalas Australian continuarem a declinar na taxa que são⁶.

Sugere-se que a prevalência de morte e doença em resposta à fragmentação do habitat é o resultado do estresse crônico⁸. Já, vinte e quatro espécies marsupiais foram declaradas extintas na Austrália devido à fragmentação do habitat, com coalas seguindo uma tendência semelhante⁸. A complexidade da fragmentação do habitat e dos sistemas biológicos é sinergética, mas pode ser desempacotada através da análise da resposta ao estresse⁶. Geralmente, qualquer perturbação em um ambiente natural de animais ativa uma cascata complexa de eventos Neurohormonais, conhecida como uma resposta de “luta ou fuga”^9,10. Esta resposta ao stress é um processo que começa no cérebro onde o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HPA) é ativado¹¹. Um componente do cérebro chamado hipotálamo libera o hormônio liberador de corticotrofina (CRH), que então sinaliza a hipófise anterior para liberar o hormônio adrenocorticotrófico (ACTH)¹¹. Isso, por sua vez, estimula a secreção glicocorticóide da medula adrenal. O corpo circula glicocorticóides através do sangue, que desvia o armazenamento da glicose do glicogênio e mobiliza a glicose do glicogênio armazenado¹¹. Esta cascata de eventos Neurohormonais é a resposta usada pelo animal para lidar com estímulos imprevisíveis¹¹. No entanto, quando os glicocorticóides estão sendo liberados e permanecem elevados por um período prolongado de tempo, o animal é considerado como tendo estresse crônico^12,13. Esse processo envolve desviar a energia de outras funções corporais corpóreas, como é necessário para a produção contínua de glicocorticóides¹³. Como resultado, o estresse crônico pode proibir o crescimento, a reprodução e a imunidade, sendo todos os principais traços de aptidão necessários para a sobrevida¹⁴.

Medir a produção de glicocorticóides de um animal é um indicador comum usado para determinar se o animal está ou não experimentando estresse fisiológico¹⁵. Para isso, os glicocorticóides podem ser medidos no plasma sanguíneo, soro, saliva, urina ou fezes¹⁶. No entanto, evidências sugerem que o cabelo é um indicador muito mais eficaz do estresse crônico, em oposição aos¹⁶acima mencionados. Isso é porque o cabelo é pensado para incorporar hormônios transmitidos pelo sangue durante a sua fase de crescimento; é relativamente estável; e todo o cortisol detectado no cabelo reflete o esforço fisiológico experimentado sobre o período de crescimento do cabelo, que pode ser semanas completamente aos meses¹⁶. Além disso, qualquer coleta de cortisol deve ser não invasiva, a fim de minimizar o estresse associado à captura e manuseio¹⁶. No entanto, qualquer estresse experimentado durante este evento não afetaria os níveis de glicocorticóides no cabelo¹⁶. Houve muitos estudos que exploram a proficiência de usar o cabelo para medir o stress a longo prazo em um número de animais, e incluem estudos em Rena, ursos de urso, macacos de rhesus, muskoxen, e ursos marrons^{17,18, 19} anos de ^{, 20} anos de ^, o cortisol ²¹. Hair é extraído geralmente primeiramente lavando a amostra para assegurar o cortisol do suor e do sebo-derivado depositado na superfície do cabelo não é coextraído com cortisol e então pulverizando a amostra em um grânulo-batedor²². Após a lavagem, a amostra precisa de ser secada para assegurar a evaporação completa²². Finalmente, usando um solvente, a amostra pode ser extraída e reconstituída para facilitar o ensaio de cortisol²². O solvente mais comum usado para extrair o cortisol da pele é o metanol^21,23; no entanto, existem alguns estudos que usam etanol e isopropanol em suas técnicas de extração de cortisol. Por exemplo, um estudo que utilizou etanol foi bem-sucedido para extrair o cortisol do fluido amniótico humano²⁴. Adicionalmente, um estudo que utilizou isopropanol foi bem-sucedido para extrair o cortisol do cabelo humano e unhas^25,26. Por esta razão, este estudo testou todos os três solventes (metanol, etanol e isopropanol) para determinar qual foi o mais bem sucedido para a extração de cortisol de amostras de peles de coala.

O objetivo preliminar deste estudo era usar técnicas atuais para validar uma técnica óptima da extração de hormona a ser usada como uma medida não invasora do cortisol da pele do Koala. Isto foi conseguido testando três solventes da extração (metanol, ethanol, e isopropanol). Nós supor que o metanol será o solvente ideal usado para extrair o cortisol da pele do Koala porque é o solvente recomendado da extração pelos jogos²⁷do cortisol do ensaio da árvore.