Australske økosystemer opretholder menneskeliv gennemleve ring af tjenester, herunder mad og fiber blandt mange andre dynamiske interaktioner¹. Ironisk nok er det menneskelig aktivitet, der fungerer som den dominerende drivkraft for økosystem forstyrrelser gennem biodiversitets ændringer². Fragmentering af levesteder, kendt som processen med at opdele store kontinuerlige habitater i små jord pletter, isoleret fra hinanden, er den største antropogene biodiversitet forandring truer australske økosystemer². Fragmentering af levesteder ændrer strukturen og mangfoldigheden af artssammensætning i et givet område og mindsker dermed det område af habitat, som er nødvendigt for at opretholde levedygtige populationer². Resultatet af dette er øget konkurrence mellem arter for ressourcer, herunder fødevarer, brændstof, fiber, og vand³. Ødelæggelsen af australske økosystemer gennem ændringer i biodiversiteten har katastrofale konsekvenser for mange australske indfødte arter¹.

Australiens mest ikoniske pungdyr arter, Koala (phascolarctos cinereus), afhænger af australske økosystemer forbliver sunde for deres overlevelse⁴. Indførelsen af den europæiske bosættelse forårsagede en hurtig nedgang i de australske befolkninger i Koalas, da de blev slagtet for deres skind i jagten på profit i en stor eksporthandel⁵. Denne praksis blev forbudt i 1980 ‘ er og populationer af Koalas var derefter i stand til at stabilisere⁵. Men eksponentiel vækst i den menneskelige befolkning har resulteret i denne art konkurrerer om en stor del af deres habitat, og deres overlevelse er igen under trussel⁶. Ifølge den internationale Union for naturbevaring (IUCN), alle populationer af australske Koalas er opført som sårbare over for udryddelse med en faldende befolknings tendens⁷. Denne fortegnelse tilskrives usikkerheden omkring relevante populations parametre og markante variationer i befolknings tendenserne for denne art⁷. Som de mest ikoniske og endemiske dyr, Koalas stort set gavne den australske økonomi gennem turisme (NSW Office of Environment and Heritage 2018). Et skøn tyder på, at Koala relaterede turisme har genereret ca 9.000 job og bidrager mellem $1,1 og $2.500.000.000 til økonomien (NSW Office of Environment and Heritage 2018). Fjernelsen af en art har potentialet til at være katastrofal, og kan ses i den stadige nedgang i indfødte australske dyreliv⁶. Desuden, Australien økonomi vil føle forgreninger hvis populationer af australske Koalas fortsætte med at falde med den sats, de er⁶.

Det foreslås, at forekomsten af død og sygdom som følge af fragmentering af levesteder er resultatet af kronisk stress⁸. Allerede, fireogtyve pungdyr arter er blevet erklæret uddøde i Australien på grund af habitatfragmentering, med Koalas efter en lignende tendens⁸. Kompleksiteten af habitatfragmentering og biologiske systemer er synergistisk, men kan pakkes ud gennem analyse af stress respons⁶. Generelt, enhver forstyrrelse i et dyr naturlige omgivelser aktiverer en kompleks kaskade af Neuro hormonelle begivenheder, kendt som en ‘ Fight eller Flight ‘ svar^9,10. Denne reaktion på stress er en proces, der begynder i hjernen, hvor hypothalamus-hypofyse-adrenal (HPA) akse er aktiveret¹¹. En komponent i hjernen kaldes hypothalamus frigiver kortikotropin-releasing hormon (CRH), som derefter signalerer den forreste hypofyse til frigivelse adrenocorticotrophic hormon (ACTH)¹¹. Dette stimulerer igen glukokortikoid sekretionen fra binyre medulla. Kroppen cirkulerer glukokortikoider gennem blodet, som afledes lagring af glucose fra glykogen og mobiliserer glukose fra lagret glykogen¹¹. Denne kaskade af Neuro hormonelle begivenheder er det svar, der anvendes af dyret til at beskæftige sig med uforudsigelige stimuli¹¹. Men, når glukokortikoider frigives og forblive forhøjet i en længere periode, dyret anses for at være oplever kronisk stress^12,13. Denne proces indebærer at omdirigere energi væk fra andre korporal kropsfunktioner, da det er nødvendigt for løbende glukokortikoid produktion¹³. Som et resultat, kronisk stress kan forbyde vækst, reproduktion og immunitet, alle er vigtige fitness egenskaber kræves for overlevelse¹⁴.

Måling af et dyrs glukokortikoidproduktion er en fælles indikator, der anvendes til at bestemme, om dyret oplever fysiologisk stress¹⁵. For at gøre dette kan glukokortikoider måles i blodplasma, serum, spyt, urin eller fæces¹⁶. Men, tyder på, at hår er en langt mere effektiv indikator for kronisk stress, i modsætning til de førnævnte¹⁶. Dette skyldes, at håret menes at indarbejde blod-bårne hormoner i sin vækstfase; Det er relativt stabilt; og enhver cortisol detekteret i håret afspejler fysiologiske stress oplevet i perioden med hårvækst, som kan være uger frem til måneder¹⁶. Desuden bør enhver samling af cortisol være ikke-invasiv for at minimere stress i forbindelse med opsamling og håndtering¹⁶. Men, enhver stress oplevet under denne begivenhed ville ikke påvirke glukokortikoid niveauer i hår¹⁶. Der har været mange undersøgelser, der udforsker færdighed i at bruge hår til at måle langsigtet stress i en række dyr, og omfatter undersøgelser af rensdyr, Grizzly bjørne, rhesus aber, moskus og brune bjørne^{17,18, 19 , 20 , 21}. hår cortisol er normalt udvindes ved første vask prøven for at sikre sved og sebum-afledte cortisol deponeret på overfladen af håret er ikke Co-ekstraheret med cortisol og derefter pulveriserer prøven i en perle-beater²². Efter vask skal prøven tørres for at sikre fuldstændig fordampning²². Endelig, ved hjælp af et opløsningsmiddel, kan prøven ekstraheres og rekonstitueres for at lette analysen af cortisol²². Det mest almindelige opløsningsmiddel, der anvendes til at udtrække cortisol fra pels, er methanol^21,23; Men, der er nogle undersøgelser, der bruger ethanol og isopropanol i deres cortisol udvinding teknikker. For eksempel, en undersøgelse, der brugte ethanol var en succes for udvinding cortisol fra Human amniotisk væske²⁴. Desuden, en undersøgelse, der anvendes isopropanol var en succes for udvinding cortisol fra menneskehår og negle^25,26. Af denne grund testede denne undersøgelse alle tre opløsningsmidler (methanol, ethanol og isopropanol) for at afgøre, hvilken var den mest vellykkede til ekstraktion af cortisol fra prøver af Koala pels.

Det primære formål med denne undersøgelse var at bruge nuværende teknikker til at validere en optimal hormon udvinding teknik, der skal anvendes som en ikke-invasiv måling af cortisol fra Koala pels. Dette blev opnået ved at afprøve tre ekstraktionsmidler (methanol, ethanol og isopropanol). Vi hypotese, at methanol vil være den optimale opløsningsmiddel, der anvendes til udvinding cortisol fra Koala pels, fordi det er den anbefalede opløsningsmiddel af ekstraktion af Arbor assay cortisol kits²⁷.