A largo plazo conflicto sensorial en comportarse libremente ratones

Animales todos los procedimientos siguieron las regulaciones animales de la Universidad Descartes de París. 1. montaje de dispositivo Nota: El dispositivo utilizado en este protocolo es una estructura de casco-como fijada en cráneos de ratones por medio de un nombre implantado. Utilizando una impresora 3D y blanco opaco poli (ácido láctico) (PLA) plástico, impresión utilizando los archivos de diseño y especificación aquí (véase Tabla de materiales) para el dispositivo y el nombre.Nota: Las dimensiones del dispositivo se muestran en figura 1 y las dimensiones del nombre que se muestra en la figura 2. Un dispositivo con bandas como sham deben ser probados (figura 2A11). Para obtener el modelo rayas, usando esmalte de uñas negro, dibujar rayas verticales grandes de 3 mm en la superficie externa del dispositivo. La condición de impostor no requiere ninguna modificación en el dispositivo de impresión. 2. nombre cirugía de implantación Todos los materiales utilizados en el presente Protocolo se detallan en la lista de materiales en la información complementaria. Pasos 2.7-2.9 uso en biomateriales en la implantación del kit (véase Tabla de materiales). Garantizar el uso de instrumentos estériles y arreglar la cirugía y la recuperación en diferentes zonas. Una vez dominado, el procedimiento de implantación dura aproximadamente 30 minutos. Para la analgesia, 30 min antes del comienzo de la cirugía, por vía subcutánea inyectar buprenorfina (0,05 mg/kg) y devolver el animal en su jaula casera.Nota: Efectos analgésicos de buprenorfina duran aproximadamente 12 h, durante mucho tiempo después del final del procedimiento. En nuestra experiencia, ratones no muestran signos de angustia relacionada con esta intervención, pero una posterior dosis de 0,05 mg/kg de buprenorfina se recomienda 24 h después de la cirugía. Anestesiar al animal en una cámara con gas de isoflurano de 2,5% – 3%. Esperar 3 minutos y compruebe si el ratón es anestesiado correctamente mediante la observación de la respiración y la falta de movimiento dentro de la cámara. Pase el ratón a un cono de nariz en una mesa quirúrgica con una almohadilla térmica y pellizcando interdigital, verificar que existe ningún reflejo de retirada y baja el isoflurano al 1,5%. Afeitarse la cabeza del ratón use una afeitadora eléctrica. Para obtener un ambiente estéril, frotar la zona depilada con solución de yodo y luego con alcohol al 70%. Repita este procedimiento dos veces más. Inyección de clorhidrato de lidocaína (2%, 2 mg/kg) debajo de la piel de la cabeza para anestesia local y esperar 5 minutos para los efectos de comenzar. Para evitar daños oculares debido a la sequedad, cubre los ojos del ratón con el ungüento veterinario oftálmico tópico. Con un par de fórceps romos, agarrar la piel en la parte posterior de la cabeza y con un par de tijeras embotadas (o bisturí), hacer una incisión longitudinal de aproximadamente 1.5 cm para exponer el cráneo. Con la ayuda de un bisturí, rayar el periostio. Tenga cuidado de no rayar demasiado, ya que la fijación de la nombre puede verse comprometida si el cráneo comienza a sangrar un poco. Aplique una gota del activador del verde en el centro del cráneo. Esto mejorará la fijación del cemento por aumento de permeabilidad ósea. Preparar el cemento: mezcla una cuchara de (suministrada en el kit de implantación) de polímero con cinco gotas de monómero y una gota de catalizador. Con la ayuda de un pincel, aplique una cantidad generosa de la mezcla de cemento entre los hitos de cráneo lambda y bregma; Rápidamente Coloque el nombre en el cemento con un movimiento birlando pasando de lambda a bregma. Después de que se ha dado el nombre, volver a aplicar más cemento alrededor de la parte inferior para asegurar que el nombre correctamente se pega al cráneo. Para garantizar la correcta fijación, asegúrese de que el cemento se aplica abundantemente y que se seca antes de continuar al siguiente paso.Nota: Con este procedimiento de fijación, el nombre no sale y no permiten pruebas a largo plazo, repetidas; en nuestras manos, eliminación de nombre es < 10%. Preparar la mezcla de la resina mediante la aplicación de una relación de polvo a líquido que permite una suave consistencia de la mezcla. Aplique la resina donde se aplicó el cemento como en el nombre para proteger su superficie. Esperar 3 minutos para la resina seca y cerrar la piel en la parte posterior de las orejas con sutura de monofilamento. Con un algodón, aplicar diluido (10% – 20%) solución de yodo en la zona operada.Nota: Asegúrese de que la piel no se atascan a la resina. Apague la anestesia y colocar al animal bajo una cálida luz roja para evitar la hipotermia. Coloque el alimento humedecido e hidrogel u otra fuente de agua en gel en el piso de la jaula. No descuide el ratón hasta que recupere la conciencia. Tan pronto como el animal se recupera totalmente del procedimiento (generalmente, 30 min a 1 h después), colocar en una jaula con grupos de tres o cuatro para estimular las interacciones sociales. 3. fijación del dispositivo 48 h después de la cirugía, fije el aparato a la medida de cabeza en el nombre. Usando un par de tornillos de 1,2 mm y un destornillador (hex 1.3 mm), alinee los orificios en el dispositivo de rayas con los agujeros en el nombre, coloque los tornillos y fijarlos. Para solucionar la farsa, gire el dispositivo hacia abajo y, con la parte posterior (figura 1A) del dispositivo frente a la dirección rostral, alinee los orificios en el dispositivo con los agujeros en el nombre.Nota: Se recomienda hacer este paso por dos operadores, uno sostiene el ratón con una restricción de ratón con una sola mano, mientras que el otro asegurar el dispositivo para el nombre. Si la fijación se realiza por un solo operador, el dispositivo se puede colocar cuando el ratón está bajo anestesia de gas. Compruebe que el dispositivo está bien asegurado y no puede extraerse por el animal y que el dispositivo no aplica presión directamente sobre la nariz del ratón, que podría potencialmente causar dolor, dificultad para respirar, o lesiones de la piel.Nota: También es importante asegurar el dispositivo simétricamente se inserta en la cara de ratón, para que los ojos están cubiertos totalmente por el dispositivo principal. Compruebe que el animal no muestra signos de dolor anormal o señal de socorro. Deje el dispositivo en el ratón durante 14 días. 4. animal cuidado y vigilancia Una vez en sus jaulas, ratones presenta ciertas anomalías en el comportamiento. Al principio, el animal puede permanecer postrado y trate de remover el dispositivo con sus patas delanteras, pero esto debe parar después de la primera hora. Durante las próximas horas siguientes, el animal generalmente muestra dificultades orientando a sí mismo dentro de la jaula y llegar a agua y alimento. Por lo tanto, durante las 48 h después de la implantación, seguimiento de los ratones y proporcionan fácil acceso a agua y alimento, colocando directamente en el piso de la jaula, por ejemplo. Seguimiento de los pesos de los ratones durante la duración del protocolo. Pesan los ratones después de la implantación y otra vez cada 24 h. atención especial debe prestarse a los animales usando el dispositivo de rayas, como normalmente experimentan pérdida de peso corporal (1-2 g) durante las primeras 48 h, pero empezar a engordar otra vez a un ritmo normal siguiente ese período inicial (ver figura 2B11). Después de 2 días, se espera que los ratones retomar sus facultades regulares. Dependiendo del sistema utilizado en instalaciones, el dispositivo podría ser evitar el acceso a la comida y el agua. Asegúrese de que el animal está en la facilidad mientras que comer y beber o adaptar en consecuencia el sistema de dispensación.Nota: No se modifica el rango de movimientos de la cabeza producido por los animales después de unos días con el dispositivo en el dispositivo (ver figura 211) (es decir., la gama de movimientos de la cabeza produce restos similares a los movimientos naturales de la cabeza). Para asegurar bienestar de ratones, garantizar la vigilancia diaria y aplicar la escala cualitativa (tabla 1) del bienestar a lo largo de la duración del protocolo. Eliminar un ratón del protocolo actual si se aplican una o más de los siguientes criterios: Ratones que tienen un total puntuación superior a 4 puntos en la escala cualitativa antes mencionado deben ser excluidos inmediatamente del experimento (ver tabla 1). Independientemente de la puntuación, si el ratón no recupera su peso inicial después de 6 días, el procedimiento debe ser detenido. El dispositivo no se fija correctamente en el nombre si, por ejemplo, el nombre tiembla cuando se toca o algo comienza a salir. Esto causa el nombre a la cabeza del ratón y por lo tanto interrumpe el aprendizaje, que explica por qué son necesarias encuestas diarias. Cuando un ratón ha su nombre arrancó durante cualquier parte del protocolo. Debido a la sangría de cráneo asociados a este destacamento, la cirugía de reimplantación tiene una tasa de éxito baja y no merece la pena intentar. 5. extracción del dispositivo Después del período de aprendizaje (en el presente Protocolo 14 días), retire el dispositivo siguiendo las mismas instrucciones que para su fijación (sección 3). Tan pronto como se retira el dispositivo, prueba de los ratones con experimentos tales como pruebas de video-oculography, o, por ejemplo, en vitro electrofisiología como se describió anteriormente11.Nota: tan pronto como se saca el dispositivo, ratones están expuestos hacia el medio ambiente estándar, sin obstáculos visuales. Por lo tanto, realizar experimentos que tienen como objetivo probar los efectos de aprendizaje de este dispositivo directamente después de su retiro. 6. video-oculography sesiones Nota: Video-oculography experimentos se realizan para registrar los movimientos del ojo generado mientras el animal se gira en la oscuridad (reflejo vestibulo-ocular, VOR) o girando entorno al animal mientras el animal está todavía (reflejo de optokinetic, OKR). Cada ratón fue probado por tanto esos reflejos antes y después del Protocolo de adaptación. Para más detalles sobre la configuración de video-oculography, ver informes previamente publicados12,13. Para habituar a los ratones a la grabación contenida las condiciones, el día antes del comienzo de la grabación, coloque el animal en el tubo en el centro de la placa giratoria para 10 minutos sin realizar ninguna prueba. Asegure el ratón en el plato por cabeza-fijación con la ayuda de tornillos insertados en el nombre. Coloque un domo pantalla que rodea al animal y apagar todas las luces en la habitación excepto el proyector optoquinéticas.Nota: Grabaciones de Video-oculography requieren el animal que aún y con sus ojos abiertos. Interrumpir la sesión de grabación y el animal vuelve a su jaula en caso de que el ratón no voluntariamente mantener sus ojos abiertos, poner o si la apariencia del ojo se deteriora durante la sesión de grabación. Otro intento se puede hacer después de un período de descanso de al menos 12h. Iniciar la estimulación de campo completo OKR (proyección del patrón del punto blanco) y grabar a varias velocidades diferentes en las direcciones de las agujas del reloj las agujas del reloj y contador. Tan pronto como las grabaciones son más, quite la cúpula. Para poder grabar el VOR en tono oscuro, aplique una gota de pilocarpina 2% a la de ojos14. Espere al menos 5 minutos para que actúe y retírelo suavemente con un hisopo de algodón. La pilocarpina mantendrá a la pupila estrecha con un tamaño constante a lo largo de las mediciones, permitiendo la adecuada cuantificación de los movimientos en la oscuridad. Apague todas las luces en la habitación y añadir una caja encima de la bandeja giratoria para mantener el animal en tono oscuro. Iniciar el VOR horizontal sinusoidales angulares rotaciones alrededor de un eje vertical con diferentes frecuencias y velocidades diferentes. Una vez terminada la sesión de grabación, regresa el ratón a una jaula bien iluminada con una lámpara infrarroja. El calor será prevenir la hipotermia causada por los efectos de vasodilatador secundario de pilocarpina en el cuerpo del ratón.Nota: Debido al animal está restringido, las sesiones de grabación no pueden durar más de 90 minutos. Cuando se necesitan sesiones de prueba adicional, que el resto de animales durante 24 horas entre sesiones.