Isolamento e trasferimento adottivo di sale alta trattati cellule dendritiche presentanti l'antigene

L’eccesso di sale dietetico è un importante fattore di rischio per ipertensione. ^{1 , 2} the American Heart Association raccomanda un massimo di 2.300 milligrammi (mg) di apporto di sodio (Na⁺) al giorno, tuttavia; meno del 10% della popolazione statunitense osserva questa raccomandazione. ^{3 , 4} riduzioni modeste nell’assunzione di Na⁺ abbassano la pressione sanguigna e riducono l’annuali nuovi casi di malattia coronarica e ictus negli Stati Uniti del 20%. ⁵ un grosso problema con il consumo di sale in eccesso è che il 50% della popolazione ipertesa esibisce sale-sensibilità, definita come un aumento di 10 mmHg della pressione arteriosa dopo caricamento Na⁺ o un simile calo della pressione sanguigna dopo Na⁺ restrizione e la diuresi. ⁶ sale-sensibilità si verifica nel 25% degli individui normotesi ed è un preannunciatore indipendente della morte e di eventi cardiovascolari. ^{7 , 8} sale-sensing meccanismi nell’ipertensione che coinvolgono il rene sono stati ben studiati; Tuttavia, gli studi recenti suggeriscono che le cellule immuni possono percepire Na⁺. ^{9 , 10}

La prova recente suggerisce che i cambiamenti in extra-renale Na⁺ manipolazione possono causare accumulo di Na⁺ nell’interstizio e promuovono l’infiammazione. ^{11 , 12} il nostro laboratorio ed altri hanno indicato che le cellule del sistema immunitario innato e adattivo contribuiscano all’esacerbazione dell’ipertensione. ^{9 , 13 , 14 ,} Vari stimoli ipertesi ¹⁵ , tra cui l’angiotensina II, noradrenalina e macrofagi causa sale, monociti e linfociti di T per infiltrarsi il rene ed il sistema vascolare e promuovere la ritenzione di Na⁺ , vasocostrizione, pressione sanguigna elevazione e danno d’organo fine. ^{9 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20} in studi precedenti, abbiamo trovato che DCs si accumulano isolevuglandin (IsoLG)-proteina addotti in risposta a vari stimoli di ipertesi compreso ipertensione di angiotensina II e DOCA-sale. ¹⁴ IsoLGs sono altamente reattivi prodotti di perossidazione lipidica che rapidamente e in modo covalente del complesso di Lisine sulle proteine e il loro accumulo è associato con l’attivazione delle DC. Formazione in murino DCs.⁹ entrata Na⁺ in DCs è mediata con amiloride sensibile trasportatori del complesso ¹⁴ recentemente abbiamo stabilito che elevato Na⁺ è un potente stimolo per IsoLG-proteina. Na⁺ viene poi scambiato per calcio (Ca^{2 +}) tramite lo scambiatore di Na⁺/ca^{2 +} . CA^{2 +} attiva la protein chinasi C (PKC) che attiva la NADPH ossidasi che porta maggiore superossido (O₂^{· –}) e la formazione del complesso IsoLG-proteina. ⁹ trasferimento adottivo di sale-esposti di ipertensione numeri primi DCs in risposta ad una dose sub-pressoria di angiotensina II. ⁹

Identificazione di CD11c⁺ DCs dai tessuti è stata precedentemente limitata a immunoistochimica e RT-PCR, e isolamento di DCs è stata limitata a cella ordinamento tramite flusso cytometry. Anche se l’ordinamento delle cellule di flusso cytometry è un metodo efficace per l’isolamento delle cellule del sistema immunitario, è costoso, richiede tempo e conduce ad un rendimento basso di cellule vitali. Di conseguenza, abbiamo ottimizzato un protocollo passo dopo passo per la digestione del tessuto, stimolazione in vitro e trasferimento adottivo di CD11c⁺ DCs per studiare l’ipertensione.